2012—2022年肠道绦虫感染患者的临床表现和流行病学特征

目的 探讨肠道绦虫病病例的临床表现及流行病学特征。方法 对北京市某医院2012年1月—2022年7月就诊的35例肠道绦虫病患者临床特点进行总结,并分析患者流行病学特征。结果 35例肠道绦虫病患者均有绦虫节片排出,经鉴定牛带绦虫病18例(51.43%),阔节裂头绦虫病17例(48.57%)。临床表现为腹痛、腹胀症状11例(31.43%),肛周瘙痒及头晕各2例(各占5.71%),恶心及呕吐、腹泻、发热、体重下降各1例(各占2.86%),无症状16例(45.71%)。21例(60.00%)北京市本地病例,其余患者来自北京市以外省份。31例(88.57%)患者有食用生或半生可疑食物病史。结论 肠道绦虫病患者多无临床症状或有轻微消化道症状,易被误诊、漏诊,重视流行病学史的询问可提高该疾病的诊断率。

亚洲无钩绦虫感染者在云南省首次发现

目的：对云南兰坪防治绦虫病试点进行病原学调查，查明流行虫种与流行环节。方法：对该地２例患者作驱绦虫治疗，获取成虫，洗净，取孕节直接灌喂本地圈养的健康断乳猪５头，并设健康断乳猪２头作对照，分别隔离饲养观察。２－３个月后，解剖观察各组织器官，查找囊尾蚴。另对该地放养的自然感染疫猪１头同法解剖观察。结果：驱出成虫４条，取头节和孕节观察，形态特征与牛带绦虫相似。取其孕节人工感染猪，于２头猪的肝脏、大网膜及肠系膜查见囊尾蚴２３个。自然感染猪１头，经解剖仅在肝脏及大网膜查见囊尾蚴３个。取囊尾蚴直接压片、染色、镜检，见成熟囊尾蚴原头节均有钩，具顶突及４个吸盘，与猪囊尾蚴相似。根据形态特征及囊尾蚴寄生部位鉴定为亚洲无钩绦虫。结论：亚洲无钩绦虫感染者在云南省首次发现。

贵州都匀牛带绦虫亚洲亚种的调查和虫体内元素及氨基酸的检测

目的 了解贵州省都匀市牛带绦虫病的流行因素及病原虫种 ,并对成虫体内氨基酸组分及元素进行检测。 方法 ①对该市河阳乡的米秀村等 6个村寨进行牛带绦虫病流行病学调查 ,对 70名现症患者 (男性 67,女性 3 )的感染原因、临床症状进行了解分析并作驱虫治疗。②对驱出的成虫作形态学鉴定和测量。③采用氨基酸分析仪、原子吸收光谱仪及分子荧光仪等分别测定成虫体内游离氨基酸组分及各种元素的含量。 结果 ①当地牛带绦虫感染主要是因群众喜吃生的或不熟的猪肝引起 ,患者的临床表现以排节片、肛门瘙痒、腹痛、腹泻等为主。 70位有临床症状的成人中 ,有 2 5人驱出成虫 (男性 2 4人 ,女性 1人 )。②成虫外形与牛带绦虫极其相似 ,头节上无顶突及小钩 ;但虫体较短 ,大小在 0 .61～ 2 .5 8m之间 ,节片较薄而且数量少。③检测了成虫的 16种氨基酸及 12种元素。 结论 贵州省都匀有牛带绦虫病局部流行 ,患者的临床表现与传统的牛带绦虫病相似。根据感染原因和对虫体的测量结果 ,认为病原体应当是牛带绦虫亚洲亚种 (Taeniasaginataasiatica)。

亚洲牛带绦虫26kDa GST基因表达及免疫学分析

目的对亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因(glutathione S-transferase,GST)进行克隆、表达和免疫学初步分析研究,为深入研究其生物学功能提供依据。方法将亚洲牛带绦虫成虫26kDa GST克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-30a(+)-TaGST构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清识别,表明其具有免疫原性;并且能识别感染了亚洲牛带绦虫的猪血清和亚洲牛带绦虫患者血清,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。

用mtCO技术测定云南及贵州四地区的牛带绦虫

目的 用 mt CO 技术鉴定云南省大理及贵州省都匀、从江等地所发现的是牛带绦虫或牛带绦虫亚洲亚种。 方法 采集成虫样本 ,抽提 DNA,PCR扩增线粒体细胞色素 C氧化酶 (mt CO )部分基因片段并测序 ,经PHYL IP软件包处理 ,计算遗传距离并构建系统发育树状图。 结果 云南省兰坪、大理和贵州省都匀的标本 mt CO 基因片段序列与已知牛带绦虫亚洲亚种的序列相同。贵州从江的标本 mt CO 基因片段序列与已知牛带绦虫的序列相同。两组基因片段的同源性达 97.4 4 % ,氨基酸序列同源性达 99.16 %。系统发育树状图显示 ,牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫最为接近 ,远离猪带绦虫及其他绦虫。 结论 云南省兰坪、大理及贵州省都匀存在牛带绦虫亚洲亚种 ,贵州省从江发现的虫种为牛带绦虫。

我国4省区5地牛带绦虫rDNA-ITS2序列分析

目的采用PCR克隆测序方法对贵州都匀、从江,云南大理及新疆乌什4地牛带绦虫标本进行研究,与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种地理株作比较,为贵州株、云南株和新疆株的鉴别提供分子生物学证据,并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种的分类学地位。方法取贵州都匀株(DY1)、贵州从江株(CJ1),云南大理株(DL1),新疆乌什株(XJ1)和台湾桃园株(TW1)成虫节片,分别抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS2区段,克隆rDNA-ITS2区段后作序列分析,构建不同地理株系统发育树。结果根据ITS2序列构建的系统发育树显示:系统发育树分为3支,XJ1占据上方1支;CJ1占据中间1支;而TW1、DY1和DL1组成下方1支。结论1.DY1、DL1与TW1属于牛带绦虫亚洲亚种,CJ1、XJ1属于传统牛带绦虫;2.rDNA-ITS2序列分析可用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学之研究。

亚洲牛带绦虫Spef1-Like基因及其蛋白结构特征的生物信息学分析

目的分析和预测亚洲牛带绦虫的Spef1-Like基因及其编码的蛋白质的结构和功能。方法利用生物信息学网站如美国国家生物技术中心(NCBI,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Ex-PASY,http://ca.expasy.org/)所提供的有关基因和蛋白序列和结构功能分析工具,以及专业的生物信息学软件包如pc-gene,VectorNTIsuite,从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库当中识别该基因及编码区,分析和预测该基因编码的蛋白质的理化性质,一级结构中的修饰位点及模序,亚细胞定位特征,二级结构特征以及蛋白三维空间构象,蛋白亲水性及潜在抗原表位。结果该基因全长1099bp,编码区为117-929bp,编码271个氨基酸,与GenBank当中的其他序列比对,预测该基因为全长基因。编码的蛋白质理化性质比较稳定,含有多个能被其他酶修饰的位点,无跨膜区,预测其主要含有三个亲水性较强的抗原表位,空间结构上相距较近。结论生物信息方法可从亚洲牛带绦虫成虫cDNA文库中筛选出Spef1-like基因并进行分析。

牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶基因的生物信息学分析

利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其他生物信息学分析软件包进行分析。牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶(MDH)基因是全长基因,长度为1212bp,编码区为30～1028bp,编码332个氨基酸,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白理化性质稳定;预测3个主要的抗原表位(aa95～aa100、aa322～aa327和aa117～aa122)在MDH空间结构上相距较远的分子表面,aa117～aa122属于带绦虫共有的线性抗原表位。预测胞桨型苹果酸脱氢酶是一个潜在的诊断抗原。

都匀亚洲带绦虫感染免疫抑制小鼠的实验研究

目的建立亚洲带绦虫囊尾蚴的小鼠动物模型,观察囊尾蚴的发育过程及形态变化。方法将亚洲带绦虫成熟孕节内虫卵经次氯酸钠孵化后经皮下注射、腹腔注射、灌喂三种方式感染小鼠,同时用地塞米松(1mg/d)皮下注射对小鼠进行免疫抑制。在30、40、506、0d剖杀,观察小鼠的感染情况,囊尾蚴用胆汁进行头节翻出及组织压片,镜下观察其形态变化。结果皮下注射组的感染率为46.7%,囊尾蚴总数359个,腹腔注射组感染率为20%,囊尾蚴69个,灌喂组感染率为零。皮下组感染30d发现早期囊尾蚴,组织学检查显示头节,未见吸盘和小钩。40d后囊尾蚴出现吸盘的雏形,随感染时间延长,囊尾蚴大小,吸盘直径增加,50d后看见明显的四个吸盘和不完整两圈呈点状小钩结构。结论用免疫抑制小鼠可替代scid小鼠感染亚洲带绦虫六钩蚴建立囊尾蚴动物模型。

我国西部4地牛带绦虫成虫的形态学观察

目的比较观察贵州省都匀、从江、新疆乌什和西藏拉萨等4地牛带绦虫成虫的形态学特征。方法分别测量采自都匀(42条)、从江(41条)、乌什(7条)和拉萨(18条)等4地完整牛带绦虫成虫的长度,计数链体节片数,并采用整体染色封制法观察头节、成节和孕节的形态结构,进行显微测量、计数和摄影。结果都匀的成虫平均长为(1.81±0.69)m,显著短于从江的(3.84±1.32)m、乌什的(2.76±0.86)m和拉萨的(3.72±1.12)m成虫(P<0.05)。都匀成虫的链体平均节片数为(574.64±189.33),也显著少于从江的(913.84±317.41)、乌什的(971.29±168.30)和拉萨的(940.38±368.26)(P<0.05)。都匀牛带绦虫成节的排泄管间距与卵黄腺长度比值平均为(1.71±0.13),明显小于从江的(2.23±0.06)、乌什的(2.03±0.21)和拉萨的(2.31±0.15)比值(P<0.05)。染色观察都匀牛带绦虫10个头节中有3个明显可见发育不良的顶突。结论都匀的牛带绦虫成虫形态特征与牛带绦虫亚洲亚种相似,而从江、乌什和拉萨等3地的牛带绦虫成虫形态特征与牛带绦虫指名亚种相似。

牛带绦虫亚洲亚种乳酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析

目的对牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因(LDH)进行克隆、表达和免疫原性分析。方法将牛带绦虫亚洲亚种成虫TaLDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET-30a(+)-TaLDH构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白,浓度为0.9mg/ml。Western blotting分析结果显示,重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH能识别感染牛带绦虫亚洲亚种的猪血清和患者血清,在相对分子质量(Mr)35000处有一清晰条带,表明其具有免疫反应性。结论牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。

我国4省9株牛带绦虫RAPD分子鉴别分析

目的分别对4省9株牛带绦虫标本进行分子鉴别。方法分别取台湾桃园株(TW1),贵州都匀株(DY1、DY2)、贵州从江株(CJ1、CJ2、CJ3、CJ4)、云南大理株(DL1)和新疆乌什株(XJ1)成虫节片,提取DNA,以13条随机引物进行PCR扩增,用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,并构建不同地理株系统发育树。结果13条引物共扩增RAPD片段331个(以相同bp数为依据)。单条引物扩增的RAPD片段数在3～28个之间,13条引物平均扩增RAPD片段在6.11～24.56个,平均14.15个;9个不同地理株牛带绦虫平均RAPD片段在9.85～16.62,平均14.08个。系统发育树显示:9个不同地理株牛带绦虫分为两支,DY1、DY2、DL1和TW1聚为一支,属于牛带绦虫亚洲亚种;CJ1、CJ2、CJ3、CJ4和XJ1聚为另一支,属牛带绦虫指名亚种。结论我国4省9株牛带绦虫分别属于牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫指名亚种。RAPD分析可用于区分牛带绦虫亚洲亚种与牛带绦虫指名亚种的分类学参考。

云贵两省三地带绦虫的分子鉴定——核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析

目的用PCR-RFLP方法对rDNA-ITS1片段进行分析,以进一步明确云贵地区是否存在牛带绦虫亚洲亚种,并建立一种快速鉴定方法。方法取贵州都匀株(DY)、贵州从江株(CJ)、云南大理株(DL)带绦虫及台湾株(TW)成虫标本,剪取孕节,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1片段,分别用4种限制性内切酶MspI、CfoI、AluI、RsaI对扩增片段作酶切分析。结果PCR产物经AluI、RsaI酶切后,TW、DL、DY和CJ株RFLP图谱一致;经MspI、CfoI酶切后,TW、DL和DY株RFLP图谱一致,CJ株显著不同。结论1)DL和DY株与TW株同属牛带绦虫亚洲亚种;而CJ株是传统牛带绦虫;2)rDNA-ITS1的PCR-RFLP分析方法简便,可以用于带绦虫的分类学研究。

我国西部6省9地牛带绦虫rDNA-ITS1序列测定及分析

目的利用分子生物学技术鉴定我国6省9地是否存在牛带绦虫亚洲亚种。方法取成虫标本孕节2-3片,酚氯仿法提取DNA,PCR法扩增rDNA-ITS1片段,并纯化、克隆此片段后作序列测定。利用BioEdit,clustalx,PHYLIP,Treeview软件处理后构建系统发育树。结果广西融水（RS）、宾阳（BY）牛带绦虫标本与贵州都匀（DY）,云南大理（DL）牛带绦虫标本序列基本一致,同源性为98%-99%;新疆乌什（WS）、西藏拉萨（LS）、内蒙古（NM）、云南西双版纳（BN）牛带绦虫标本与贵州从江（CJ）牛带绦虫标本序列基本一致,同源性为98%-99%。系统发育树显示：RS、BY、DL和DY标本遗传距离较近;WS、LS、CJ、NM和BN标本遗传距离较近。而两组间遗传距离较远。结论RS、BY、DL和DY四地存在牛带绦虫亚洲亚种;WS、LS、CJ、NM和BN五地存在传统牛带绦虫。

贵州省都匀地区亚洲牛带绦虫病的流行病学调查

目的 了解亚洲牛带绦虫病在我省都匀地区的流行特点。方法 采用传统流行病学调查方法 (即 :询问病史、驱虫、肛门拭子法等 ) ,对都匀米秀地区相邻六个村寨进行实地调查 ,并对 70位有临床表现的成人 (男性6 7,女性 3)进行驱虫治疗。结果 在 6 7例男性患者中有 2 4人驱出虫体 ;在 3例女性患者中有 1人驱出虫体 ,成人感染率为 35 4 % ;对 10 0名儿童 ,进行了肛门拭子法查虫卵 ,均未检出。结论 贵州省都匀地区亚洲牛带绦虫病感染严重 。

云贵两省三地牛带绦虫核糖体rDNA-ITS1序列分析

目的：采用PCR克隆测序方法，对采自贵州省都匀、从江及云南省大理三地牛带绦虫，与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种标本进行比较，为贵州都匀、从江及云南大理牛带绦虫标本鉴别提供分子生物学证据，并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种分类学地位。方法：取贵州都匀株、贵州从江株、云南大理株和台湾桃园株成虫节片，抽提DNA，PCR扩增rDNA-ITS1区段，克隆测序；结合GenBank中已知猪带绦虫rDNA-ITS1序列，构建系统发育树。结果：贵州都匀、云南大理牛带绦虫标本、台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的ITS1序列基本一致，同源性达98％～99％；贵州从江牛带绦虫标本ITS1序列与前三者有30个碱基差异，与台湾桃园、贵州都匀和云南大理同源性均为97％。系统发育树显示：贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本与台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的遗传距离最接近，距贵州从江牛带绦虫标本较远，与猪带绦虫则更远。结论：（1）贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本属于牛带绦虫亚洲亚种，贵州从江牛带绦虫标本属于传统牛带绦虫。（2）rDNA-ITS1序列分析可以用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学研究。

亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1基因的表达、纯化及免疫学分析

目的对亚洲牛带绦虫成虫延伸因子-1(elongation factor1,EF-1)基因进行克隆、表达和免疫学初步研究。方法将亚洲牛带绦虫成虫EF-1克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中用异丙硫代-β-D半乳糖苷诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用蛋白印迹法(Western blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-EF-1构建成功。重组蛋白可被感染了亚洲牛带绦虫患者血清和猪血清识别,表明其具有免疫反应性。结论亚洲牛带绦虫成虫EF-1基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

IFN-γ对亚洲牛带绦虫囊尾蚴病小鼠肝肉芽肿的影响

采用免疫组织化学技术链酶亲和素-生物素化过氧化物酶复合物技术观察感染小鼠不同时期肝内γ干扰素(IFN-γ)水平,以及细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、层连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平及分布,并以FN、LN及PCⅢ作为判断IFN-γ对肝纤维化抑制作用的动态变化指标。结果表明,都匀亚洲牛带绦虫感染小鼠肝内IFN-γ含量与肝纤维化程度呈反比(P<0.01),注射IFN-γ后囊尾蚴肉芽肿面积明显减少,囊尾蚴肉芽肿减少(P值均<0.01)。

云南省防治亚洲无钩绦虫病试点研究

目的了解亚洲无钩绦虫病流行因素及流行环节,掌握流行特征,探索综合防治方法. 方法选择带绦虫病流行区兰坪县河西乡箐花村和三界村为防治试点,开展亚洲无钩绦虫流行病学调查.采用药物驱虫及健康教育(箐花村)等措施控制亚洲无钩绦虫病. 结果病史访问2 214人, 查到近期排亚洲无钩绦虫节片者886人,感染率分别为箐花村42.12%(489/1161),三界37.70%(397/1053).未发现有癫痫病史者和皮下结节者.人群感染率,男性38.55%,女性41.44%,差异无显著性;最小感染年龄为9个月,最大90岁;30～50岁组感染率最高,在55.99%～60.66%之间;普米族居民感染率为46.69%,高于其他民族;农民感染率为51.77%,高于其他职业人群.饮食习惯调查,生食猪肝者占调查人数的95.12%,感染率为41.55%,显著高于不生食猪肝者(6.48%).不同牲畜饲养户亚洲无钩绦虫感染率差异有显著性(χ2=299.266,P<0.01).3年累计复查7 771人次,驱虫3 285人次,药物驱虫治愈率分别为驱绦胶囊82.50%(509/617),吡喹酮75.00%(150/200).采取综合性防治措施后,箐花村居民生食猪肝者所占比例从防治前的95.95%下降至36.32%,厕所普及率从1.48%上升至39.41%,亚洲无钩绦虫人群感染率从42.12%下降至17.67%.三界村防治后上述指标无显著变化. 结论兰坪防治试点为亚洲无钩绦虫病流行区,居民主要通过生食猪肝感染 .采取驱虫、健康教育等综合性防治措施,可有效控制人群亚洲无钩绦虫感染.

中国西部地区牛带绦虫的分子鉴定和生物行为研究进展

本文对近年来涉及中国西部7省(区)10县(市)的牛带绦虫病的流行病学调查和驱虫治疗、成虫标本的形态学观察、11个地理虫株的分子生物学鉴定、牛带绦虫和亚洲带绦虫感染中间宿主猪和牛后囊尾蚴的发育和生物行为观察,以及中间宿主组织病理学变化的比较等进行综述,认为将亚洲带绦虫定为新物种比作为牛带绦虫的亚种更合适。