桦树ISSR-PCR反应体系的优化

以桦树 (Betula)DNA为材料 ,分析了DNA浓度、TagDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR PCR扩增结果的影响 ,筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的 17个ISSR引物 ,建立了稳定的、可重复的桦树ISSR PCR最佳反应体系及PCR扩增参数 。

白菜RAPD反应条件的优化

以芜菁、大白菜及其杂交 1代为试材 ,系统分析了 Mg Cl2 浓度、d NTP浓度、随机引物浓度、模板 DNA用量、Taq DNA聚合酶浓度以及不同来源扩增缓冲液对 RAPD反应的影响 ,建立了一套稳定的 RAPD反应体系。该体系反应体积为 2 0μL,Mg Cl2 浓度为 1 .5mmol/L ,d NTP浓度为 2 0 0μmol/L ,随机引物浓度为 0 .4μmol/L ,模板 DNA为 2 0 ng,TaqDNA聚合酶为 6.67μmol/( L· min)。在 8种热循环条件下 ,该体系具有稳定的重现性 ,其扩增程序为 :94℃ /1′→ 36℃ /2 0″→ 72℃ /1 0″预扩增 2循环 ;94℃ /1 0″→ 36℃ /1 5″→ 72℃ /70″扩增38循环 ;72℃