丹参酮ⅡA通过调控p38MAPK/NF-κB信号通路减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤实验研究

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对糖尿病雄性大鼠生殖损伤的影响及其机制。方法:随机选取43只雄性SD大鼠中的35只通过高糖高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病动物模型,并分为模型组、TanⅡA(6 mg/kg)组、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂,2 mg/kg]组和TanⅡA+SB203580(6 mg/kg+2 mg/kg)组,每组8只;剩余8只设为正常组。给药治疗4周后,检测空腹血糖(FBG)水平。ELISA法检测血清睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)含量。检测精子质量(浓度、存活率和活力),测量睾丸重量并计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织病理学改变。检测睾丸组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8含量。Western blot法检测睾丸组织p38MAPK、p-p38MAPK、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达。结果:与模型组比较,TanⅡA组、SB203580组和TanⅡA+SB203580组FBG水平比较差异无统计学意义(均P>0.05);T、LH、FSH含量和精子浓度、存活率及活力升高(均P<0.05);睾丸重量和睾丸指数升高(均P<0.05);睾丸组织病理学改变明显改善;T-SOD、CAT活力升高且MDA、TNF-α、IL-1β、IL-8含量降低(均P<0.05);HMGB1水平和p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低(均P<0.05)。TanⅡA+SB203580组以上指标优于TanⅡA组和SB203580组(均P<0.05)。结论:TanⅡA可能通过抑制p38MAPK/NF-κB信号通路,降低氧化应激水平和炎症反应,从而减轻糖尿病雄性大鼠生殖损伤。

丹参酮ⅡA调节骨关节炎小鼠骨代谢的作用机制

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过介导Yes激酶相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)、核因子-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核因子κB受体活化因子(eceptor activator of nuclear factor-κB,RANK)/骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)调节骨关节炎小鼠骨代谢的作用机制。方法建立骨关节炎小鼠模型,将60只小鼠随机分成假手术组、模型组、TanⅡA低剂量组和TanⅡA高剂量组,每组15只,造模成功后灌胃给药,连续4周。HE和番红O固绿染色观察软骨组织病理损伤并进行Mankin评分。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清骨碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(C-telopeptide of typeⅠcollagen,CTX)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)。蛋白质印迹法(Western blotting)检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、YAP、RANK、RANKL和OPG蛋白。结果TanⅡA可改善小鼠软骨组织病理变化并降低Mankin评分。与假手术组比较,模型组BALP、OC水平下降,CTX、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、MMP1、MMP3和MMP13水平升高(P<0.05)。与模型组比较,TanⅡA低剂量组、TanⅡA高剂量组BALP、OC水平升高,CTX、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、MMP1、MMP3和MMP13水平降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组小鼠软骨组织中YAP、OPG和RANK蛋白水平下降,RANKL蛋白水平升高(P<0.05);与模型组比较,TanⅡA 2组小鼠软骨组织中YAP、OPG和RANK蛋白水平上升,RANKL蛋白水平下降(P<0.05)。结论TanⅡA可能通过介导YAP、RANK/RANKL/OPG信号通路调控骨关节炎。

丹参酮ⅡA抑制血小板与肿瘤细胞相互作用的实验研究

目的探究丹参酮IIA(TanⅡA)抗血小板作用以及抑制人血小板与结肠癌HCT116细胞的相互作用。方法采用不同浓度TanⅡA(10、20、40μmol/L)处理健康志愿者全血或血小板,通过血栓弹力图试验(TEG)检测二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、花生四烯酸(arachidonic acid,AA)抑制率,流式细胞术检测血小板CD62P、PAC-1表达率,黏附试验检测TanⅡA处理后血小板与HCT116细胞的黏附情况,划痕试验检测TanⅡA处理后血小板对HCT116细胞的迁移能力的影响。结果TEG结果表明,Tan IIA呈浓度依赖性抑制ADP、AA诱导的血小板聚集(P<0.01),低浓度TanⅡA处理就能获得较好的ADP抑制率,为(73.48±19.63)%,高浓度TanⅡA才能获得较好的AA抑制率,为(78.20±18.58)%。流式细胞术结果显示,TanⅡA可以呈浓度依赖抑制凝血酶或ADP诱导的血小板表面CD62P、PAC-1表达(P<0.05)。黏附试验结果证实,TanⅡA能显著抑制凝血酶或ADP激活血小板与HCT116细胞之间的黏附作用,抑制能力与TanⅡA浓度呈正相关。划痕试验结果发现,活化血小板可促进HCT116细胞迁移,采用低浓度(10μmol/L)TanⅡA处理血小板就可显著抑制肿瘤细胞的迁移。结论TanⅡA可通过抑制血小板聚集和活化,进而抑制血小板与肿瘤细胞的相互作用。

丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病对患者炎症因子及凝血功能的影响

【目的】探讨丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病对患者炎症因子及凝血功能的影响。【方法】选取2019年9月至2022年9月本院收治的100例冠心病患者,按随机数字表法将其分为观察组(丹参酮ⅡA磺酸钠与他汀类药物联合治疗,n=50)与对照组(他汀类药物治疗,n=50)。比较两组的治疗效果、不良反应发生率,比较两组治疗前后的超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、全血黏度、血浆黏度。【结果】观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP、TNF-α、IL-6低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后D-D、Fbg、FDP显著低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05);两组全血黏度、血浆黏度显著低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病临床效果较好,可改善患者的炎症因子水平及凝血功能。

丹参酮ⅡA对胆道闭锁肝纤维化大鼠SMAD4 SMAD7及I型胶原蛋白的影响

目的探讨丹参酮ⅡA通过调控SMAD4、SMAD7蛋白延缓胆道闭锁肝纤维化的机制。方法30只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、吡非尼酮组(300 mg/kg)和丹参酮ⅡA组(20 mg/kg),每组6只。除正常组和假手术组外,其余各组鼠采用胆总管注射无水乙醇的方法复制胆道闭锁肝纤维化模型,造模后第1天,吡非尼酮组和丹参酮ⅡA组鼠给予相应药物灌胃,假手术组和模型组鼠给予等体积生理盐水(10 mL/kg)灌胃。给药20 d后,采用戊巴比妥钠过量麻醉动物留取标本,比较各组间大鼠血液生化指标及肝脏组织病理学改变;检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素水平;Western blot检测肝组织SMAD4、SMAD7的表达以及肝组织中collagen I的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素升高(P<0.05),肝组织呈明显的纤维化改变,肝组织SMAD4、collagen I蛋白表达水平升高,SMAD7表达降低(P<0.05);丹参酮ⅡA治疗后,SMAD4、collagen I表达水平下降,SMAD7表达升高(P<0.05),且大鼠肝纤维化较吡非尼酮组明显减轻。结论丹参酮ⅡA可以有效延缓胆道闭锁肝纤维化进展,其机制可能通过调节TGF-β/Smads中关键蛋白SMAD4及SMAD7的表达,从而减少肝组织中collagen I的沉积。

丹参酮ⅡA通过抑制JAK2/STAT3通路减轻慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜损伤的机制研究

[目的]研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃黏膜的影响,并基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)通路探讨其机制。[方法]将80只Wistar大鼠随机分为5组(n=16):正常(Normal)组、模型(Model)组、TanⅡA(5 mg/kg)组、TanⅡA(5 mg/kg)+AG490(JAK2抑制剂,5 mg/kg)组和Tan IIA(5 mg/kg)+C-A1(JAK2激动剂,50 mg/kg)组。除Normal组外,其他4组均采用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍溶液(MNNG,0.04 g/mL)自由饮联合雷尼替丁灌胃、饥饱失常饮食的综合法构建CAG大鼠模型。各组分别每日1次连续给药治疗12周后,中性红清除法检测胃黏膜血流量,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测血清胃泌素(GAS)、血浆胃动素(MTL)及胃黏膜炎症因子水平,苏木精-伊红(HE)染色法观察胃黏膜组织病理学改变并行萎缩评分,TUNEL染色法观察胃黏膜细胞凋亡状况并计算凋亡指数,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测胃黏膜JAK2/STAT3通路相关mRNA和蛋白表达。[结果]与Model组相比,TanⅡA组大鼠胃黏膜血流量、血清GAS水平、血浆MTL水平均明显升高(P<0.05);胃黏膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6等炎症因子水平明显降低(P<0.05);胃黏膜病理学改变明显改善,萎缩评分明显降低(P<0.05);胃黏膜凋亡细胞数量明显减少,凋亡指数明显降低(P<0.05);胃黏膜JAK2、STAT3 mRNA表达量明显降低(P<0.05);B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达量明显升高,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、激活型半胱氨酸蛋白酶3(C-Cas-3)、C-Cas-9蛋白表达量及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、胞核核因子-κB(NF-κB)p65/胞浆NF-κB p65表达比值明显降低(P<0.05)。AG490能够明显增强TanⅡA对CAG大鼠各检测指标的调控作用,C-A1则能够明显逆转TanⅡA对CAG大鼠各检测指标的调控作用(P<0.05)。[结论] TanⅡA可能通过抑制JAK2/STAT3通路活化及NF-κB核转位,减轻炎症反应和细胞凋亡,从而减轻CAG大鼠胃黏膜结构和功能损伤。

丹参酮ⅡA抑制内皮细胞焦亡减轻糖尿病大鼠肾损伤

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对大鼠糖尿病肾脏疾病(DKD)的保护作用及机制。方法高脂饮食联合链脲佐菌素注射液(STZ)复制大鼠DKD模型。将实验动物分为对照组、模型组、TanⅡA组、缬沙坦组。实验过程中动态检测各组大鼠的体重、血糖变化,收集血、尿标本检测生化指标;收集肾组织进行苏木精-伊红染色(HE)、过碘酸雪夫染色(PAS)、透射电镜以及免疫组化检测。结果TanⅡA可增加DKD大鼠体重(P<0.01),降低血尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白和血清肌酐(Scr)水平(P<0.05),而用药各组空腹血糖(FBG)差异无统计学意义。TanⅡA组肾组织HE染色后肾小管损伤分级、PAS阳性的肾小球系膜区统计均较DKD组减轻(P<0.05)。TanⅡA改善DKD大鼠的氧化应激与细胞焦亡:透射电镜观察到TanⅡA组和缬沙坦组大鼠肾小球微血管内皮细胞(RGMEC)的细胞膜损伤明显减轻;TanⅡA组和缬沙坦组的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Txnip)、含NLR家族Pyrin域蛋白3(Nlrp3)表达减少(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可以通过调节Txnip/Nlrp3炎症小体,抑制大鼠肾小球微血管内皮细胞焦亡,从而延缓DKD的进展。

促内皮和抗炎的丹参酮ⅡA洗脱支架涂层研究

目的针对目前临床心血管支架存在的晚期血栓和支架内再狭窄等问题,通过超声雾化喷涂技术构建传统中药丹参酮ⅡA(TS)洗脱支架,探究其在动脉粥样硬化病变部位的治疗作用。方法采用超声雾化喷涂技术构建TS洗脱支架;利用水接触角(WCA)检测仪、傅里叶变换红外吸收光谱仪(FTIR)、球囊扩张实验及场发射扫描电镜(SEM)等对涂层表面的亲疏水性、化学成分及结构、涂层机械性能进行检测分析;采用紫外-可见光分光光度计(UV-Vis)对TS涂层药物释放行为进行检测;通过体外溶血率和血小板实验初步评价涂层的血液相容性;通过体外细胞相容性实验评估TS涂层对内皮细胞(ECs)和平滑肌细胞(SMCs)增殖的影响,以及对巨噬细胞炎症行为及表型的调节作用;通过半体内血液循环实验进一步探索涂层抗血栓形成效果。结果WCA、FTIR、SEM和UV-Vis等检测结果证实了TS洗脱支架的成功制备,涂层中TS在体外能够保持28 d持续释放;体外生物相容性结果表明,TS与聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)质量比为30%的涂层具有显著抑制血小板的黏附和激活、促进ECs及抑制SMCs增殖的作用,同时能够有效调节巨噬细胞的炎症行为;半体内血液循环实验结果表明,涂层具有良好的抗血栓形成的效果。结论制备的TS洗脱支架具有选择性促进内皮增殖,抑制平滑肌增生、调控炎症的作用,以及优异的抗血栓形成能力,能够为病变血管修复提供一种潜在的解决方案。

丹参酮ⅡA磺酸钠对尿毒症毒素作用下人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对尿毒症毒素作用下人脐静脉内皮细胞(hUVECs)功能的影响,并阐明其作用机制。方法:将hUVECs进行传代培养并分为空白对照组、尿毒症毒素刺激组、尿毒症毒素+STS组和尿毒症毒素+STS+细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂组,其中后2组中STS的浓度为10 mg·L^(-1);先给予各组剪切力刺激,剪切力大小为12 dyn·cm^(-2);采用CCK-8法测定各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中ERK、核因子κB(NF-κB)和Ⅰ型胶原蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞中ERK、NF-κB和Ⅰ型胶原mRNA表达情况;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测各组细胞凋亡率。结果:CCK-8法检测,在剪切力作用后,尿毒症毒素刺激组和尿毒症毒素+STS+ERK抑制剂组细胞增殖活性低于尿毒症毒素+STS组(P<0.01)。Western blotting法检测,与尿毒症毒素组比较,尿毒症毒素+STS组细胞中ERK、NF-κB和Ⅰ型胶原蛋白表达水平升高(P<0.01);抑制ERK信号通路后,与空白对照组、尿毒症毒素组和尿毒症毒素+STS组比较,尿毒症毒素+STS+ERK抑制剂组细胞中ERK、NF-κB和Ⅰ型胶原蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR法检测,与尿毒症毒素组比较,尿毒症毒素+STS组细胞中ERK、NF-κB和Ⅰ型胶原mRNA表达水平升高(P<0.01);抑制ERK通路后,与空白对照组、尿毒症毒素组和尿毒症毒素+STS组比较,尿毒症毒素+STS+ERK抑制剂组细胞中ERK、NF-κB和Ⅰ型胶原mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。TUNEL法检测,尿毒症毒素+STS组的细胞凋亡率小于尿毒症毒素刺激组和尿毒症毒素+STS+ERK抑制剂组(P<0.05)。结论:一定浓度STS能通过ERK信号通路调节NF-κB和Ⅰ型胶原mRNA及蛋白表达来改善尿毒症毒素作用下的内皮细胞增殖,减少细胞凋亡。

基于NF-κB通路探讨丹参酮ⅡA治疗膝骨关节炎的机制

目的 基于核因子κB(NF-κB)通路探讨丹参酮ⅡA治疗膝骨关节炎的机制。方法 取52只雄性SD大鼠,随机选择8只作为假手术组,其余大鼠采用改良Hulth法建立骨关节炎模型。将术后2周造模成功的40只大鼠随机分为模型组、玻璃酸钠组及丹参酮ⅡA低、中、高浓度组,每组8只。丹参酮ⅡA各组分别给予每2 mL药液含生药量2.5 mg、5 mg、10 mg的丹参酮ⅡA磺酸钠注射液0.09 mL关节腔注射,模型组和假手术组给予等量生理盐水关节腔注射,玻璃酸钠组给予等量玻璃酸钠关节腔注射,均每周1次。连续干预5周后,ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色、番红O固绿染色观察骨关节炎病变程度和胶原纤维含量,Mankin评分量化软骨的退化程度;Western blot法检测膝关节软骨组织中NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)蛋白表达情况,qRT-PCR法检测膝关节软骨组织中NF-κB p65、IκBα、ColⅡ、Aggrecan mRNA表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠软骨损伤严重,血清IL-6、IL-1β、TNF-α水平及软骨组织中IκBα、ColⅡ、Aggrecan蛋白相对表达量和ColⅡ、Aggrecan mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05),软骨组织中p-NF-κB p65蛋白相对表达量和NF-κB p65、IκBα mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,丹参酮ⅡA各组和玻璃酸钠组大鼠软骨损伤减轻,除丹参酮ⅡA低浓度组血清TNF-α水平变化不明显外(P>0.05),丹参酮ⅡA各组和玻璃酸钠组血清IL-6、IL-1β、TNF-α及软骨组织中IκBα、ColⅡ、Aggrecan蛋白相对表达量和ColⅡ、Aggrecan mRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05),软骨组织中p-NF-κB p65蛋白相对表达量和NF-κB p65、IκBα mRNA相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论 丹参酮ⅡA可以通过抑制NF-κB信号通路来延缓膝骨关节炎的进展。

丹参酮ⅡA磺酸钠联合尼可地尔治疗冠心病稳定性心绞痛疗效及对心功能改善研究

目的 分析丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone sulphonate, STS)联合尼可地尔治疗冠心病(coronary heart disease, CHD)稳定性心绞痛患者的临床疗效,并探究对患者氧化应激、血清肌红蛋白(myoglobin, MYO)、肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)水平的影响。方法 选取2022年3月至2024年3月南阳医学高等专科学校第一附属医院心脏外科收治的CHD稳定性心绞痛患者164例,使用简单随机数表法分为对照组82例(尼可地尔治疗)和观察组82例(STS联合尼可地尔治疗)。比较2组疗效、治疗前后氧化应激指标[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、脂质过氧化产物(lipid peroxide, LPO)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)]、血清MYO、cTnT水平、心功能指标[心排血量(cardiac output, CO)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)]、心绞痛症状、生活质量及运动耐力,并记录不良反应。结果 观察组总有效率显著高于对照组(95.12%vs 82.93%,P<0.05);观察组治疗后SOD、GSH-Px水平显著高于对照组,LPO、MDA水平显著低于对照组(P<0.01);观察组治疗后血清Myo、cTnT水平显著低于对照组(P<0.01);观察组治疗后CO、LVEF显著高于对照组[(5.74±0.59)L/min vs(5.38±0.46)L/min,P<0.01;(55.06±4.27)%vs(49.14±3.85)%,P<0.01];观察组治疗后加拿大心血管病学会心绞痛分级显著低于对照组,西雅图心绞痛量表评分、六分钟步行试验距离显著高于对照组(P<0.01);2组不良反应发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论 STS联合尼可地尔治疗CHD稳定性心绞痛有助于提升疗效,减轻氧化应激,保护患者心功能,安全性良好。

基于网络药理学与分子对接技术探讨黄连素-丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接的方法探讨“黄连素-丹参酮ⅡA”抗动脉粥样硬化的潜在靶点和通路,以期为基础研究及临床应用提供依据。方法:通过PubChem数据库获得黄连素-丹参酮ⅡA分子结构及作用靶点,应用SwissTargetPrediction平台预测作用靶点;通过GeneCards、OMIM、DisGeNET数据库检索并筛选动脉粥样硬化的治疗靶点,取药物靶点和疾病靶点的交集;通过STRING 11.5数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,并通过Cytoscape 3.9.1软件进行拓扑分析;通过DAVID数据库对交集靶点进行基因本体(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;采用AutoDock Tools 1.5.6、PyMOL 2.5.5等进行分子对接分析。结果:共获得95个黄连素-丹参酮ⅡA-动脉粥样硬化交集靶点。蛋白质相互作用分析挖掘其有效成分可能作用的核心靶点包括原癌基因酪氨酸蛋白激酶(SRC)、磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、细胞分裂周期蛋白42(CDC42)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)、Janus激酶2(JAK2)、Abelson鼠白血病病毒癌基因同源物1(ABL1)、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(RAC1)等。GO功能富集分析结果显示,黄连素-丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化主要涉及蛋白质磷酸化、信号转导、对外源刺激的反应、对药物的反应、免疫应答等230条生物功能。KEGG信号通路富集结果显示,黄连素-丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的潜在作用途径包括脂质与动脉粥样硬化信号通路、神经营养素信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路、血管内皮生长因子(VEGF)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、大鼠肉瘤(Ras)信号通路等106条信号通路。将黄连素-丹参酮ⅡA与筛选的8个核心靶点进行分子对接,结合能均<-20.92 kJ/mol,表明关键靶点和黄连素-丹参酮ⅡA结合活性较好,其中与黄连素、丹参酮ⅡA对接结合能是最高的均为靶点蛋白SRC,二者之间具有强烈的结合活性。结论:黄连素-丹参酮ⅡA可能通过SRC、PIK3R1、PIK3CA、CDC42等多靶点,作用于脂质、PI3K/AKT、VEGF、MAPK、Ras等多条信号通路发挥抗动脉粥样硬化作用;分子对接结果显示,黄连素-丹参酮ⅡA与预测的核心靶点结合活性较好,为进一步研究提供应用依据。

丹参酮ⅡA磺酸钠治疗冠心病心绞痛疗效和安全性的Meta分析

目的:通过Meta分析评价丹参酮ⅡA磺酸钠治疗冠心病心绞痛的疗效和安全性。方法:计算机检索中国知网(CNKI)、维普(VIP)、万方、中国生物医学文献数据库(CMB)、PubMed、The Cochrane Library、EMbase等数据库,搜集关于丹参酮ⅡA磺酸钠与心绞痛的相关研究,检索时限截至2022年9月30日。由2名参与人员独立筛查文献、提取信息并评价纳入文献的偏倚风险,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入20篇文献,涉及2975例病人。Meta分析结果显示,丹参酮ⅡA磺酸钠联合常规西药治疗冠心病心绞痛的临床总疗效[OR=3.32,95%CI(2.66,4.15),P<0.00001]、心绞痛发作次数[MD=-1.38,95%CI(-1.83,-0.92),P<0.00001]、心绞痛持续时间[MD=-6.27,95%CI(-8.06,-4.48),P<0.00001]、心电图疗效[OR=2.54,95%CI(1.92,3.36),P<0.00001]、总胆固醇[MD=-1.20,95%CI(-1.68,-0.71),P<0.00001]、三酰甘油[MD=-0.50,95%CI(-0.74,-0.26),P<0.00001]、高密度脂蛋白胆固醇[MD=0.17,95%CI(0.01,0.33),P<0.00001]、低密度脂蛋白胆固醇[MD=-0.54,95%CI(-0.84,-0.24),P<0.00001]均优于单纯使用常规西药。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:当前证据表明,丹参酮ⅡA磺酸钠联合常规西药治疗冠心病心绞痛的疗效优于常规治疗,但其安全性仍需要较多的研究提供更加可靠的证据。

丹参酮ⅡA对脓毒症肺微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探寻丹参酮ⅡA对脓毒症肺血管内皮细胞损伤的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术构建脓毒症肺损伤小鼠模型,分为6组:假手术组、模型组、丹参酮1组(10 mg/kg)、丹参酮2组(30 mg/kg)、丹参酮3组(50 mg/kg)、丹参酮4组(100 mg/kg)。药物干预24 h后检测肺组织病理变化、肺微血管通透性、肺组织湿/干重比、白细胞计数以及炎症因子等各项指标,假手术组仅行盲肠探查术。结果丹参酮各组较模型组小鼠肺组织损伤及评分均减轻(P<0.05)。与模型组比较,丹参酮各组小鼠肺组织Evans Blue含量、肺组织湿/干比明显降低(P<0.05),BALF白细胞计数、蛋白含量、炎症因子明显减少(均P<0.05),且呈剂量依赖性,其中丹参酮2组、丹参酮3组和丹参酮4组之间,肺组织病理损伤、Evans Blue含量、肺组织湿/干比以及肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。结论丹参酮ⅡA能够剂量依赖性地降低脓毒症所致的肺微血管内皮细胞损伤,从而改善肺损伤;30 mg/kg剂量的丹参酮ⅡA即可达到最佳效果。

丹参酮ⅡA通过抑制炎症因子的表达保护视网膜神经节细胞

目的研究丹参酮ⅡA对高糖(HG)或LPS刺激的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells-5,RGC-5)的保护作用,并探讨其潜在的分子机制。方法将RGC-5细胞分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA不同剂量组,CCK-8法检测各组细胞活力,DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞活性氧,免疫荧光检测各组细胞Tuj-1和Brn3α的表达,PCR检测各组炎症因子及NFκB mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养上清液中TNF-α的含量。结果CCK-8结果显示,HG刺激后RGC-5细胞活力增强,在HG条件下丹参酮ⅡA 3.20μM可以抑制细胞活性(P<0.001)。ROS检测结果显示,丹参酮ⅡA各剂量组可以抑制HG条件下细胞ROS的积累(P<0.01或P<0.001)。免疫荧光结果显示,与正常组比较,HG和LPS组Tuj-1和Brn3α的表达显著降低(P<0.05或P<0.001),与HG或LPS组比较,丹参酮ⅡA可以增强Tuj-1和Brn3α的表达(P<0.01或P<0.001)。PCR结果显示,与正常组比较,HG组细胞内IL-6、IL-18、IL-1β、NFκB mRNA表达显著增高(P<0.001),与HG组相比,丹参酮ⅡA可以抑制细胞内IL-6、IL-18、IL-1β、NFκB mRNA的表达(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。与正常组比较,LPS组细胞内促炎因子NFκB mRNA(P<0.05)表达显著增高,抑炎因子IL-10表达显著降低(P<0.01);与LPS组比较,丹参酮ⅡA可以抑制细胞内NFκB mRNA的表达(P<0.05),并使抑炎因子IL-10表达增加(P<0.001)。ELISA检测显示,与正常组比较,HG组和LPS组细胞上清中TNF-α显著上升(P<0.001);与HG或LPS组比较,丹参酮ⅡA各剂量组细胞上清中TNF-α含量均下降(P<0.001)。结论丹参酮ⅡA可以保护视网膜神经节细胞,其机制可能与通过核因子-κB(nuclear factors-κB,NF-κB)通路抑制炎症因子的表达密切相关。

超临界流体抗溶剂技术制备丹参酮ⅡA超细微粒

目的采用超临界流体抗溶剂技术制备丹参酮ⅡA超细微粒。方法以超临界CO_(2)为抗溶剂,采用扫描电镜、红外光谱、X射线衍射、热重、差示扫描量热分析对超细微粒进行表征,测定其溶解度和体外溶出度。结果超临界CO_(2)流体制备后,超细微粒粒度更集中,结晶度更高,化学结构和晶型未发生改变,溶出率增加至2.40倍。结论本实验为增加丹参酮ⅡA溶出、促进其吸收提供了一种新方法,具有良好的应用前景。

丹参酮ⅡA通过调控miR-27a抑制肝星状细胞活化的机制研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TⅡA)通过调控微小RNA-27a(miR-27a)抑制人肝星状细胞(LX2细胞)活化的机制。方法使用10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导LX2细胞活化;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-27a的表达;瞬时转染miR-27a的模拟物和抑制剂增强或抑制miR-27a的表达,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖情况,Western blot法检测胶原蛋白Iα2(COL1A2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(P-GSK3β)、分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)的表达;用不同浓度的TⅡA干预LX2细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,RT-qPCR检测miR-27a的表达,Western blot法检测COL1A2、α-SMA、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、P-GSK3β、SFRP1和细胞周期蛋白D1(CCND1)的表达。结果miR-27a在TGF-β1干预的LX2细胞中表达增加(P<0.05)。LX2细胞中miR-27a被敲低48 h和72 h后,细胞增殖显著被抑制(P<0.05),抑制miR-27a表达减少了LX2细胞中COL1A2、α-SMA和P-GSK3β蛋白的表达,却增加了SFRP1蛋白的表达(P<0.05),过表达miR-27a则呈现相反的结果(P<0.05)。TⅡA能抑制LX2细胞的增殖,其显著降低了miR-27a的表达,且下调了COL1A2、α-SMA、P-GSK3β、CCND1蛋白的表达并上调了SFRP1蛋白的表达(P<0.05)。结论miR-27a在活化的LX2细胞中表达升高,并能促进LX2细胞的增殖和活化。TⅡA通过下调miR-27a抑制Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路激活,进而抑制LX2细胞活化。

丹参酮Ⅱ_(A)通过调控Hedgehog/Gli1信号通路对乳腺癌 细胞迁移、侵袭的机制研究

目的探究丹参酮Ⅱ_(A)(TanⅡ_(A))对乳腺癌细胞迁移、侵袭的机制。方法使用不同浓度的TanⅡ_(A)对乳腺癌细胞系MCF-7进行治疗,MTT法检测细胞活力,流式细胞偶数检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力。使用Hedgehog激活剂SAG激活Hedgehog/Gli1通路,使用qRT-PCR及免疫印迹检测SMO、Gli1 mRNA及蛋白表达水平。通过免疫印迹检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1表达水平。结果50μmol·L^(-1) TanⅡ_(A)可以抑制MCF-7细胞活力,MDAMB-231细胞活力由(98.12±3.85)%下降至(69.32±3.68)%,MCF-7细胞活力由(99.32±3.65)%下降至(49.65±3.74)%。添加SAG后MCF-7细胞活力上升至(71.20±5.00)%(P<0.05)。SAG抑制MCF-7细胞凋亡,细胞凋亡率从(20.50±2.00)%下降至(12.00±1.00)%。SAG使得MCF-7细胞迁移数量从(52.00±5.00)上升至(76.00±5.00)(P<0.05),侵袭数量从(41.00±3.00)上升至(75.00±5.00)(P<0.05)。与Control组相比,TanⅡ_(A)组Beclin-1蛋白水平由(0.54±0.05)上升至(1.20±0.10),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平由(0.60±0.06)上升至(1.80±0.12)(P<0.05),而添加SAG后Beclin-1蛋白水平下降至(0.70±0.07)(P<0.05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平下降至(0.75±0.04)(P<0.05)。结论TanⅡ_(A)降低乳腺癌细胞活力、迁移及侵袭能力,抑制Hedgehog/Gli1信号通路活性,且促进乳腺癌细胞自噬。

黄芪甲苷与丹参酮ⅡA配伍拮抗内皮细胞糖氧剥夺损伤促进血管新生

目的观察益气活血药对黄芪、丹参的有效活性成分黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)与丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)配伍拮抗内皮细胞糖氧剥夺(Oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的效应,探索其促进血管新生的作用及机制。方法通过体外培养内皮细胞建立OGD损伤模型,实验设置对照组、模型组、AS-Ⅳ组、TanⅡA组和配伍组。分别采用CCK-8法、Transwell、体外血管形成实验观察AS-Ⅳ与TanⅡA配伍对内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响;利用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测内皮细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测VE-cadherin、TGF-β1、VEGFA、eNOS的蛋白表达;免疫荧光法检测CD31、eNOS的蛋白表达;同时采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中一氧化氮(Nitric oxide,NO)的浓度。结果与正常对照组相比,糖氧剥夺使HUVECs增殖、迁移与成管功能受损,诱导细胞凋亡,降低VEcadherin、TGF-β1、VEGFA、CD31、eNOS的蛋白表达以及NO含量(P<0.01)。药物配伍组与模型组相比能修复损伤的内皮细胞,促进其增殖、迁移和成管,抑制糖氧剥夺诱导的细胞凋亡,提高VE-cadherin、TGF-β1、VEGFA、CD31、eNOS的蛋白表达以及NO含量(P<0.05)。结论AS-Ⅳ与TanⅡA配伍具有拮抗内皮细胞糖氧剥夺损伤、激活血管新生反应的作用,其机制可能是激活eNOS,促进内皮细胞NO的生成与释放。

丹参酮ⅡA磺酸钠和布地奈德格隆溴铵福莫特罗联合治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期的临床研究

目的观察在布地奈德格隆溴铵福莫特罗基础上加用丹参酮ⅡA磺酸钠对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者的临床疗效。方法选择芜湖市第一人民医院2021年9月至2023年9月收治的112例AECOPD患者作为研究对象。按病情严重程度将患者分为对照组和研究组,每组56例。对照组给予布地奈德格隆溴铵福莫特罗雾化吸入治疗,研究组给予布地奈德格隆溴铵福莫特罗雾化吸入联合丹参酮ⅡA磺酸钠治疗。治疗10d后,比较两组肺功能、血气指标和血液学指标的差异,并观察不良反应发生情况。结果与治疗前比较,两组治疗后第1秒用力呼气容积(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC、动脉血氧分压(PaO_(2))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(CSH)均明显升高[对照组:FEV1(L)为59.76±11.43比53.71±5.62,FVC(L)为63.54±6.19比55.28±7.51,FEV1/FVC为(59.48±8.15)%比(53.96±8.43)%,PaO_(2)(mmHg,1mmHg~0.133kPa)为76.93±4.58比68.95±4.96,S0D(kU/L)为83.19±6.58比70.41±5.57,CSH(mg/L)为242.89±21.78比218.31±46.52;研究组:FEV1(L)为65.83±10.35比52.49±5.41,FVC(L)为69.41±10.73比53.31±8.36,FEV1/FVC为(67.62±7.35)%比(52.71±7.33)%,PaO(mmHg)为83.21±5.34比70.32±5.31,S0D(kU/L)为90.32±7.14比71.63±5.94,GSH(mg/L)为264.33±26.14比213.67±41.36],动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、白细胞介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)均明显降低[对照组:PaCO_(2)(mmHg)为53.56±5.14比59.16±5.59,IL-1β(ng/L)为6.43±1.71比8.53±3.89,IL-6(ng/L)为18.64±2.13比25.31±4.19,TNF-α(ng/L)为81.72±10.79比102.58±14.31;研究组:PaCO_(2)(mmHg)为47.13±5.42比61.37±6.08,IL-1β(ng/L)为5.16±1.37比9.01±4.13,IL-6(ng/L)为10.52±2.43比25.84±4.27,TNF-α(ng/L)为61.35±12.81比104.35±16.51],差异均有统计学意义(均P<0.05),且以研究组的变化更明显。研究组治疗前后FEV1、FVC、FEV1/FVC、PaO_(2)、PaCO_(2)、IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD、GSH的差值△FEV1、△FVC、△FEV1/FVC、△PaO_(2)、△PaCO_(2)、△IL-1β、△IL-6、△TNF-α、△SOD、△GSH均明显高于对照组[△FEV1(L):13.85±4.52比6.13±2.31,△FVC(L):15.83±2.74比8.32±2.46,△FEV1/FVC:(14.65±1.95)%比(5.47±1.39)%,△PaO_(2)(mmHg):13.14±2.81比8.12±2.37,△PaCO_(2)(mmHg):13.68±2.75比4.84±2.53,△IL-1β(ng/L):4.33±1.06比2.02±0.56,△IL-6(ng/L):15.31±2.07比7.53±2.45,△TNF-α(ng/L):37.92±8.3比22.51±8.73,△SOD(kU/L):18.52±3.36比14.13±3.27,CSH(mg/L):41.59±8.61比28.75±7.34均P<0.05]。研究组和对照组不良反应发生率比较差异均无统计学意义[28.57%(16/56)比21.43%(16/56),P>0.05]。结论丹参酮IⅡIA磺酸钠联合布地奈德格隆溴铵福莫特罗治疗AECOPD,有助于抑制呼吸道炎症反应,改善肺功能及血气指标,安全性良好。