中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:探讨中药复方糖耐康对KKAy小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其可能机制。方法:12周龄雄性KKAy小鼠50只,按血糖随机分为模型组、缬沙坦组、糖耐康高、中、低剂量组,每组10只,另设10只C57BL/6J小鼠为正常组,正常组和模型组给予0.9%氯化钠溶液,其余组给予对应浓度的药液灌胃,用药8周后处死,取肾脏组织,进行Mosson、PAS染色,免疫组化染色观察平滑肌肌动蛋白(α-SMA),E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达分布;Western Blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:与正常组相比较,模型组小鼠肾纤维化面积显著增大(P<0.01),α-SMA蛋白表达呈现较强阳性,E-cadherin蛋白表达弱阳性。与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康各剂量组肾纤维化面积显著减小(P<0.01),α-SMA蛋白表达显著减少(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达明显增加(P<0.05)。KKAy小鼠肾脏组织TGF-β1蛋白表达较正常小鼠显著升高(P<0.01);与模型组比较,缬沙坦组、糖耐康低、中和高剂量组TGF-β1蛋白表达含量都显著降低(P<0.01),其中糖耐康高剂量组与缬沙坦组相比较TGF-β1显著降低。结论:中药复方糖耐康可抑制肾小管上皮细胞EMT的发生,减轻肾小管间质纤维化而发挥肾脏保护作用。

复方中药糖耐康对高糖诱导大鼠系膜细胞外基质的影响

目的观察复方中药糖耐康对高糖环境下大鼠系膜细胞外基质的纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(IV-C)及转化生长因子TGF-β1含量的影响。方法大鼠肾小球系膜细胞按1×105/孔接种24孔板,实验分为6组:正常葡萄糖组、高糖对照组、中药糖耐康高、中、低浓度干预组、西药吡格列酮组。每组设平行孔4孔,培养24 h后检测指标。采用双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测FN、Ⅳ-C及TGF-β1含量。结果与空白对照组比较,高糖模型组MCs的上清中的FN、Ⅳ-C、TGF-β1含量均显著升高,差异有统计学意义(P均<0.05);与高糖组比较,治疗组FN、Ⅳ-C、TGF-β1含量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);与吡格列酮组比较,糖耐康中、低剂量组FN、IV-C、TGF-β1含量差异有统计学意义(P<0.01),而糖耐康高剂量组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖耐康对糖尿病肾病肾脏的保护作用之一,是通过抑制系膜细胞外基质中FN、Ⅳ-C、TGF-β1的分泌、产生,从而抑制了系膜细胞的增值,起到保护糖尿病患者肾脏的作用。

糖耐康颗粒含量测定方法研究

目的:研究糖耐康颗粒的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定糖耐康中迷迭香酸的含量,C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%三氟乙酸-甲醇(60:40),检测波长λ为330 nm,理论板数大于2000,用标准曲线法测定;采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量,采用C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水-乙腈,梯度检测方法,检测波长λ为203 nm,理论板数均大于2 000,用标准曲线法测定。结果:迷迭香酸在浓度为0.300-0.500 mg·m L-1范围内线性关系良好,回归方程为:Y=1E+07X-7 334,R2=0.999,测得加样回收率为97.32%(RSD 1.25%)。人参皂苷Rg1在0.138-0.220 mg·m L-1范围内均有良好的线性关系,回归方程为:Y=2E+06X+34 864,R2=0.999;人参皂苷Re在0.126 mg·m L-1-0.250 mg·m L-1范围内均有良好的线性关系,回归方程为:Y=2E+06X+39 879,R2=0.999;人参皂苷Rb1在0.132-0.220 mg·m L-1内均有良好的线性关系,回归方程为:Y=2E+06X+39 070,R2=0.999。3种人参皂苷的加样回收率分别为:Rg1 97.97%(RSD 1.83%);Re 101.80%(RSD 1.83%);Rb1 98.35%(RSD 1.82%)。结论:该含量测定方法简便、快捷、可靠,可用于糖耐康的质量控制。

复方糖耐康对GK大鼠胰脏的组织学影响

目的:观察中药复方糖耐康对自发性2型糖尿病GK大鼠胰脏组织病理变化的影响。方法:将50只SPF级GK大鼠按照血糖值随机分为5组:模型组、吡格列酮组、糖耐康低剂量组、糖耐康中剂量组、糖耐康高剂量组,并设Wistar大鼠10只作为正常对照组,连续给药8周,测定OGTT、空腹血清胰岛素、并计算胰岛素抵抗指数、观察胰脏的病理变化。结果:与正常对照组比较,GK大鼠空腹血糖正常或轻度升高,负荷2h后血糖明显升高;空腹血清胰岛素水平升高,呈高胰岛素抵抗状态;镜下观察到胰岛形态不规则,胰岛数及岛内细胞数目减少,胰岛细胞颗粒脱失,核大小不等,胰岛细胞被增生血管纤维所分隔,胰岛纤维化。糖耐康各剂量组及西药吡格列酮组对血糖、血清胰岛素及胰岛素抵抗指数以及胰腺病理变化均有不同程度改善,与模型组比较有显著差异。结论:中药复方糖耐康可通过降低血糖,改善胰岛素抵抗而发挥对胰岛细胞的保护作用。

糖耐康对db/db小鼠肝脏p38MAPK/NF-κBp65信号通路的影响

目的基于p38MAPK/NF-κBp65通路,探讨糖耐康对db/db小鼠肝脏的保护作用。方法16只db/db小鼠按体重、血糖随机分为糖耐康组和模型组,每组8只,另设同周龄db/m+小鼠8只为正常组,分别以3.24 g/kg溶液及等量超纯水灌胃。给药8周后,检测各组小鼠空腹血糖、血脂和肝功水平,HE染色观察肝组织病理改变,检测肝组织TNF-α、IL-6、IL-1β含量以及相关蛋白的表达。结果糖耐康组可显著降低肝重、空腹血糖、血清ALT、AST、TG、TC和FFA的水平,下调肝脏组织炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和p-p38MAPK、核NF-κBp65的蛋白表达水平。病理显示糖耐康组可显著减少小鼠肝细胞的脂肪样变性。结论糖耐康可改善db/db小鼠的糖脂代谢紊乱,减少脂肪在肝脏中的蓄积以及相关炎症因子的表达,其作用机制可能通过调节p38MAPK/NF-κBp65信号通路有关。

基于能量限制效应考察中药复方糖耐康干预db/db小鼠胰岛素抵抗作用机制

胰岛素抵抗(IR)是导致2型糖尿病和多种代谢性疾病发生发展的共同病理生理基础,通过模拟能量限制调控能量代谢网络已经成为防治IR相关疾病的研究热点.本课题组前期研究结果提示,中药复方糖耐康可能通过激活SIRT1-AMPK通路模拟能量限制效应改善IR.通过比较糖耐康和能量限制对自发性2型糖尿病db/db小鼠(Mus musculus)糖脂代谢、胰岛功能、线粒体功能和胰岛素敏感性的影响,进一步验证糖耐康是否可在整体和分子水平模拟能量限制效应进而干预IR.与对照组相比,糖耐康和能量限制均可相似地显著改善db/db小鼠口服葡萄糖耐量(OGTT)、降低空腹血胰岛素(FINS),升高胰岛素敏感指数(ISI).同时糖耐康和能量限制还可相似地升高糖负荷后30 min胰岛素分泌与血糖变化比值(?I30/?G30),降低肌肉TG含量,上调肌肉组织AMPK磷酸化水平以及SIRT1和PGC1?的蛋白表达水平,不同程度提高肌肉组织线粒体质量和数量.以上结果表明,糖耐康可显著改善db/db小鼠的糖代谢、胰岛功能、脂质异位沉积、线粒体功能和IR,激活肌组织AMPK/SIRT1/PGC1?信号通路,上调肌肉脂肪酸氧化相关基因表达,在整体效应和能量代谢转录调控方面具有能量限制拟似效应,进而从新的视角揭示了糖耐康干预IR的药效模式和分子机制.