应用TFF微孔过滤澄清白喉、破伤风毒素培养液及超滤浓缩的试验

用ＴＦＦ微孔过滤系统对白喉、破伤风毒素培养液分别进行了两次澄清过滤试验，澄清过滤后的毒素上清液立即用ＴＦＦ超滤系统浓缩至原培养液体积的１／１０－１／２０。白喉毒素总回收率分别为８６％、７６．６％，破伤风毒素总回收率为９４．１％、９２％。澄清过滤中白喉毒素平均Ｆ１ｕｘ分别为２３．４、１４．３Ｌ／ｍ２／ｈ，破伤风毒素平均Ｆｌｕｘ为２４及２２．９Ｌ／ｍ２／ｈ。结果表明破伤风两次试验有很好的一致性，白喉毒素回收率差别不甚明显，而两次试验Ｆｌｕｘ相差较大，ＴＦＦ微孔过滤系统用于澄清白喉培养液，滤膜使用后的清洗程序仍需改良，以提高膜滤过功能的恢复。

基于中空纤维的灌流培养细胞截留技术的研究

近年来由于生物制药行业对于蛋白产品需求的日益增加,连续型细胞培养工艺的灌流培养模式越来越受到重视.为了维持生物反应器中较高的细胞数量和生产力,收获纯度较高的蛋白产品,需要一种良好的分离装置来保留生物反应器中的细胞.本文在比较不同类型的细胞截留技术的基础上,总结了中空纤维过滤技术操作条件温和、通量大、过滤精度高且应用广泛的优势.为了缓解中空纤维过滤过程中存在的膜污染问题,延长膜组件寿命,本文还分析了灌流培养常用的中空纤维膜材质、孔径大小、组件内径、长度及填充密度等设计因素,讨论了不同的切向流过滤操作参数对膜组件的影响,以期为灌流培养工艺领域中细胞分离用中空纤维膜组件的设计与优化提供理论依据.

A comparison of centrifugation and tangential flow filtration for nanoparticle purification: A case study on acetalated dextran nanoparticles

Tangential fiow filtration (TFF) is a purification method commonly used in a multitude of fields,including particle engineering.Currently,there is still a lack of comprehensive understanding of the effects of key TFF parameters on nanoparticle (NP) characteristics (purification outcomes).The present study aimed to investigate the influence of various factors on the characteristics of TFF-purified NP.The most commonly used NP purification method,centrifugation,was studied as a control.A design of experiment approach was implemented to investigate the influence of transmembrane pressure,flow rate,and initial drug loading on NP characteristics using paclitaxel as a model small molecule.Following the determination of optimized TFF parameters,the two purification methods were assessed using other model small molecules (i.e.tacrolimus and resveratrol).The results indicated that the TFF parameters and initial loading of the drug played important roles in the purified NP outcomes.Compared with the centrifugation method,TFF resulted in smaller NP with higher drug loading.TFF was able to circumvent issues associated with conventional centrifugation,while yielding similar results,and can potentially serve as a suitable large-scale purification method for polymeric NP.

超滤分级研究腐殖酸的结构组成

利用切面流超滤技术将Pahokee泥炭腐殖酸分为相对分子质量不同的8个级分,并综合应用元素分析和傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、固体13C核磁共振(13CNMR)和裂解-气相色谱-质谱(Py-GC-MS)技术详细研究了分级前后腐殖酸分子的结构组成特征。研究表明,随相对分子质量的增加,腐殖酸分子中的元素碳、元素氢含量增加;而元素氧和含氧官能团含量减少;并且低相对分子质量级分中含有相对较多的木本植物来源的芳香结构,而高相对分子质量级分中含相对较多微生物和植物来源的聚脂肪结构。本研究结果不仅说明环境中的腐殖酸分子是由许多相对分子质量不同、结构性质各异的腐殖酸分子组成,而且这些腐殖酸分子可能与腐殖酸形成过程中各种来源的物质在不同阶段的腐殖化产物有关,表明了腐殖酸类地质大分子物质的非均一性和复杂性。

旋转切向流强化管式膜微滤机理研究

首次设计出了旋转切向流管式膜分离器及其实验系统 ,通过理论研究和实验测试 ,系统地研究了旋转直线切向流和旋转圆弧切向流聚丙烯管式膜微滤的流场特征 ,揭示了旋转切向流强化膜微滤的机理 .

旋转流三管微滤膜强化分离过程

利用聚乙烯三管微滤膜在不同浓度、不同操作压力下,分别以切向进料和径向错流进料进行了分离实验对比研究,结果表明:在浓度为0.25%时三管膜切向进料具有通量大、能耗低的特征;切向进料的渗透通量是径向错流进料的2倍,且在浓度为0.5%时切向进料有一最佳操作压力,为深入研究多管膜过滤提供了依据。

一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法

建立了一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法,首先通过低温离心的方法去除糖化白蛋白粗溶液中可能含有的悬浮性杂质,取上清液备用,然后将上清液转移至切向流过滤系统,选择合适的中空纤维膜组件、泵速、剪切力,进行浓缩和洗脱操作,去除糖化白蛋白粗溶液中大部分糖化多肽、糖化氨基酸、葡萄糖,达到快速纯化糖化白蛋白粗溶液的目的。按该法进行糖化白蛋白粗溶液的纯化,可快速去除糖化多肽等小分子杂质,具有操作简单、方便、快捷等特点,适合大规模的糖化白蛋白粗溶液纯化。

中空纤维切向流过滤法测定盐酸多柔比星脂质体释放度

目的研究并建立基于中空纤维切向流过滤法的脂质体释放度测定新方法,测定盐酸多柔比星脂质体注射液的释放度。方法通过考察系统压力、循环速率、样品溶液浓度、中空纤维材料、截留相对分子质量、纤维表面积等因素对游离药物透过速率等的影响,建立切向流过滤释放度测定方法,测定盐酸多柔比星脂质体注射液的释放度。结果中空纤维切向流过滤法能够显著提高游离盐酸多柔比星的透过速率,加快游离药物与脂质体的分离,增加脂质体药物释放度实时测定的准确度;该方法重现性良好,测得的盐酸多柔比星脂质体释放曲线趋于缓慢匀速释放,释药量在72 h内达到最大,约为72%。结论中空纤维切向流过滤法可操作性强、方法重现性较好、准确度高、易于标准化,可用于盐酸多柔比星脂质体注射液及其他脂质体制剂的释放度测定。

切向流过滤结合超速离心分离小细胞外囊泡方法的建立

目的建立切向流过滤结合超速离心分离小细胞外囊泡的方法,以期提升小细胞外囊泡的分离效率。方法使用切向流过滤结合超速离心的方法分离小细胞外囊泡,并通过透射电镜观察、纳米颗粒追踪、Western blot等技术对分离的囊泡进行鉴定。结果通过该方法分离的小细胞外囊泡直径主要分布在30~250 nm之间,透射电镜下可明确观察到囊泡样结构,纯化后的细胞外囊泡CD9、CD63和ALIX蛋白呈阳性表达,分离时间较常规超速离心方法明显缩短。结论切向流过滤结合超速离心能够有效分离小细胞外囊泡,提升分离效率。

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装技术研究

目的:探索猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs)的高效组装技术,提高VLPs的稳定性。方法:利用大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装为VLPs,分析不同离子强度下VLPs的稳定性。利用切向流技术添加尿素,降低p H,可使VLPs解组装,利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和pH,实现VLPs的高效再组装。结果:PCV2 Cap蛋白自组装VLPs在150mmol/L NaCl下稳定性较差,而在500mmol/L NaCl下可提高VLPs的稳定性,但仍较易发生聚集,核酸含量均较高。在150mmol/L NaCl、300mmol/L尿素和p H 5.5的缓冲体系条件下,能够使VLPs解组装。经25%~50%饱和硫酸铵(V/V)分级沉淀粗纯,阴离子交换层析500mmol/L NaCl下洗脱获得精纯Cap蛋白,蛋白质纯度≥95%,并能够有效去除核酸。通过切向流技术去除体系中的尿素,并将NaCl浓度提高至1mol/L、p H提高至8.0,改变蛋白质表面静电荷分布,实现VLPs的高效、均一再组装,组装效率≥99%,回收率为65.85%,并明显提高VLPs的稳定性,能够稳定保存6个月以上。结论:利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和p H,实现VLPs的高效再组装。