基于NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路介导的细胞焦亡探讨大黄糖络丸对糖尿病肾脏疾病的干预效应

目的探讨大黄糖络丸(Dahuang Tangluo pills,DHTL)对糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)db/db小鼠NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(cystein-asparate protease-1,caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路介导的细胞焦亡的干预效应及机制。方法将8只db/m小鼠作为空白对照组,将40只db/db小鼠造模成功后随机分为模型组,DHTL低剂量组、中剂量组、高剂量组,达格列净组,每组各8只。空白组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,DHTL低、中、高剂量组分别给予DHTL溶液0.9、1.8、3.6 g·kg^(-1),达格列净组给予达格列净片溶液1.5 mg·kg^(-1),6组小鼠均每日灌胃1次,连续给药10周,给药期间每日检测小鼠体质量并调整灌胃剂量。给药结束后分别检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)及体质量;采用全自动生化分析仪检测小鼠24 h尿总蛋白(24 h urine protein,24h-UTP)、血肌酐(creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平;采用ELISA测定小鼠肾组织中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平;HE染色观察小鼠肾组织病理改变;TUNEL染色观察小鼠肾组织细胞DNA的损伤情况;采用RT-PCR和Western blot检测小鼠肾组织NLRP3、caspase-1、GSDMD mRNA及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、体质量、24h-UTP、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α均明显升高(P<0.01);小鼠肾脏组织中NLRP3、caspase-1、GSDMD mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠FBG、体质量、24h-UTP、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平不同程度降低(P<0.05);小鼠肾脏组织病理形态均不同程度改善,肾脏组织阳性细胞数量明显减少(P<0.05);DHTL高、中剂量组及达格列净组小鼠肾组织NLRP3、caspase-1、GSDMD mRNA及蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论DHTL可改善DKD小鼠的肾损伤,其机制可能通过调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD小鼠的炎症反应。

基于“心与小肠相表里”与“心主血脉”理论探讨肠道菌群与糖络病的关系及中药防治

仝小林院士提出的糖络病学说,是指由血糖增高等因素引起的脉络损伤,即糖尿病基础上伴随的大血管、微血管病变,临床常见于冠心病、动脉粥样硬化及糖尿病肾病等。糖尿病并发症在糖尿病的进程中占有重要部分,也是致残、致死的主要因素,肠道菌群在其发病过程中起到关键作用。中医药对糖络病患者的肠道菌群有很好的调节作用,但理论基础薄弱、具体作用机制尚不明确。团队以“心与小肠相表里”“心主血脉”的中医理论为桥梁,构建肠道菌群与糖络病的联系,为中医药临床治疗糖络病及后期开展实验研究提供理论依据。

因古驿道而兴的汉水古镇——陕西省洋县华阳古镇研究

华阳因古道而兴,一度成为历史上的军事要冲,政治重镇,直至明清时期古镇发展至鼎盛繁荣,最后形成一个典型的陕南集镇。它有着悠久的历史,浓厚的地域文化,特色鲜明的空间形态和传统建筑,忠实的记录着当地的历史、经济、文化发展进程。该文以位于傥骆古道的华阳古镇为研究对象,对其现存的历史建筑的形成、现状、古镇形式以及南北地域文化的融合进行考察分析,总结了典型陕南古镇历史文化价值和空间形态特色。

补肾活血法中药(糖络通)防治糖尿病大鼠早期视网膜病变的实验研究

目的:研究补肾活血法中药(糖络通)对糖尿病大鼠早期视网膜病变的防治作用及其作用机制。方法:随机将33只正常雄性Wistar大鼠分为正常对照组(N)11只,糖尿病对照组(D)11只,糖络通治疗组(DT)11只,连续给药8周后观察大鼠体重、空腹血糖、FPG、糖化血红蛋白(HbA1c)及大鼠视网膜RAGE mRNA的表达水平。并通过光镜电镜观察大鼠视网膜组织病理形态学的变化。结果:实验研究表明,糖络通可降低糖尿病大鼠视网膜RAGE mRNA的表达水平,组间比较有差异性(P<0.01);ALT,AST,Cr,BUN等安全性指标未出现异常,组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论:光镜、电镜观察表明糖络通对糖尿病大鼠的视网膜具有保护作用,能抑制神经节细胞及内外核层细胞的减少,减轻毛细血管扩张及视网膜组织的水肿。说明糖络通能够在一定程度上减缓DM大鼠视网膜的病理变化,对早期DR具有良好防治作用。为中医临床防治糖尿病微血管病变的研究提供理论依据。

唐宋明清时期傥骆道的交通及作用

在穿越秦岭的蜀道北段四道之中,傥骆道最为近捷,受到唐王朝的高度重视,多次整修道路,并在沿途置关、设驿,唐中后期,傥骆道尤为鼎盛,是官员商旅南入巴蜀的首要线路。五代两宋时期,傥骆道仍是重要的军事通道,其在经济方面的作用也日趋显现。元明清时期,傥骆道成为民间商道和山区经济开发之路,在促进陕南秦巴山区经济开发中起着极为重要的作用。

高糖环境下糖络宁对大鼠背根神经节神经元细胞凋亡水平及MAPKs信号通路的影响

目的研究糖络宁对高糖环境下大鼠背根神经节神经元(DRGn)细胞凋亡及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法6~8周体重(215±15)g清洁级雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为高、中、低浓度糖络宁组和正常组,每组15只。各组分别以糖络宁组方生药5、2.5、1.25 g/(kg·d)和等量蒸馏水灌胃,制备含药血清和正常对照血清。新生SD胎鼠制备DRGn细胞,分为正常组(10%正常大鼠血清+Neurobasal培养基),高糖组(正常组基础上+50 mmol/L葡萄糖),糖络宁各浓度组(高糖组基础上+10%低、中、高浓度糖络宁含药血清),培养24 h后检测细胞凋亡及JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun、Map3k8、p-Map3k8蛋白表达。结果高糖组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、Map3k8、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);糖络宁各浓度组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值明显低于高糖组,差异有高度统计学意义(P<0.01);中浓度糖络宁组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值明显低于高、低浓度糖络宁组,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);中、低浓度糖络宁组c-Jun表达低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05),糖络宁各浓度组JNK1、Map3k8及c-Jun表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖络宁可能通过抑制MAPKs信号通路降低细胞凋亡水平。

基于“伏火”理论探讨糖络病病机与治疗

糖络病,就是由血糖增高引起络脉损伤为特征的一类疾病。“伏邪”是指人体感受邪气,邪匿于体,伏而后发的病邪。通过临床观察与文献研究发现,糖络病的发生发展与邪气伏络的特点极为相似,其发病机制可概括为脏腑虚衰,邪伏于络,日久络损,并发他症。伏火作为伏邪的组成部分,是具有伏潜、潜藏特性的火邪,其贯穿于糖络病的始终。文章将从中医的“伏火理论”着手,对糖络病的病机与治疗进行论述,以期为临床治疗糖络病提供有效参考。

基于“糖络病”学说自拟参七糖络方防治2型糖尿病血管并发症经验探讨

糖尿病已成为当今全球重大公共卫生问题,其中以2型糖尿病患者居多。2型糖尿病血管并发症不仅是2型糖尿病常见的合并疾病,也是2型糖尿病患者致残和致死的首要原因,临床多见于心脑血管疾病、糖尿病肾病、糖尿病眼病等血管并发症。文章从糖尿病络病的概念、病因、病机、治法等方面探讨参七糖络方防治2型糖尿病血管并发症的理论依据及组方原则。糖尿病血管并发症可归属于中医学“络病”范畴,可伴随2型糖尿病发生发展的始终。根据“糖络病”学说及临床经验,将通络与降糖同治,本着以“络以通为用”为基本原则,以清热降糖、活血通络为治法,佐以扶正祛邪,以降低血糖和畅通血管,明显改善2型糖尿病临床症状。参七糖络方是在经典方剂葛根芩连汤的基础上化裁而成,由黄连、黄芩、葛根、苦瓜、知母、西洋参、三七、僵蚕、干姜9味药物组成,全方清热燥湿,益气通络。文章举例论证了参七糖络方防治2型糖尿病血管并发症的可行性,说明了参七糖络方治疗2型糖尿病及其血管并发症的思路与方法,验证了“糖络病”学说的理论。参七糖络方的应用发展了仝小林教授提出的治疗糖尿病新型诊疗模式,提高了糖尿病的治疗效果及患者的生存质量,可供临床参考。

糖络宁调控miR-211对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经元凋亡的影响

目的探讨中药糖络宁调控miR-211对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠背根神经元(DRGn)凋亡的影响。方法以新生大鼠DRGn细胞作为研究对象,将其分为正常组、高糖组、糖络宁组、miR-211抑制剂阴性组和miR-211抑制剂组。正常组采用神经元专用培养基,高糖组、糖络宁组、miR-211抑制剂阴性组和miR-211抑制剂组采用高糖神经元专用培养基(含50 mmol/L葡萄糖),其中miR-211抑制剂阴性组和miR-211抑制剂组分别予空载体和miR-211抑制剂载体进行转染。正常组、高糖组、miR-211抑制剂阴性组和miR-211抑制剂组给予10%空白血清干预,糖络宁组予10%糖络宁含药血清干预。干预24 h后,收集各组细胞,检测细胞凋亡率、miR-211及凋亡通路相关指标蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核细胞起始因子2α(eIF2α)、转录激活因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果高糖组与miR-211抑制剂阴性组细胞凋亡率各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高糖组细胞凋亡率、miR-211基因表达及PERK、eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平均高于正常组,糖络宁组和miR-211抑制剂组细胞凋亡率、miR-211基因表达及PERK、eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖络宁可通过抑制miR-211调控凋亡通路来减轻高糖诱导下的大鼠DRGn凋亡。

糖络方联合弥可保治疗2型糖尿病周围神经病变的临床观察

目的观察益气养阴活血通络之糖络方联合弥可保治疗2型糖尿病周围神经病变的疗效。方法将65例患者随机分成治疗组(中西药组)和对照组(西药组),均在西药降血糖基本达标的同时,对照组单纯口服弥可保,治疗组口服弥可保的基础上加用糖络方内服,治疗8周。结果总有效率及治疗后证候积分比较,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后肌电图比较,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论益气养阴活血通络之糖络方联合弥可保治疗2型糖尿病周围神经病变疗效优于单用弥可保,是治疗该病的有效方剂之一。

秦岭骆谷道——傥骆古道考古调查述略

2016-2017年,佛坪厅考古调查队对傥骆古道进行了实地调查。通过调查,明确了傥骆古道秦岭段主线的整体面貌、具体走向以及保存状况。该道路呈东北—西南走向,修建较为规整,现存栈道、碥道、桥梁、房址、碑刻等各类遗存123处,部分路段发现有不同时期的栈道和碥道,整个道路以兴隆岭为界呈现出比较明显的南北差异,其中北段以栈道和桥梁为主,南段以碥道为主。

北宋前期河北路塘泺探析

“塘泺”是北宋时期横亘在河北路宋辽边境线南侧的湖泊群,东西长达二百余公里。宋太宗时期,连结河北路塘泺于一体,作为“水长城”以防御契丹骑兵南侵,是为人工天险。以河北路塘泺作为防御工事,至迟在太平兴国六年(981)已经实行,并非由何承矩于端拱元年(988)提出。塘泺防御工事兴起于太宗时期,至真宗、仁宗两朝,发展最为完备,此后由于承平日久,逐渐荒废。河北路塘泺的修建,有效抵御了契丹南侵,是我国古代国防工程上的伟大创举。

北宋边塞诗的军事意象——以烽燧、斥堠、塘泺、榆塞为中心

北宋边塞诗的意象择取,既延续前代边塞诗的创作经验,关注关山、陇头、羌笛等语符意象,关注玉门、凉州、西域等地名意象,在意象中构筑意境,又开辟出烽燧斥候、塘泺方塘、壕林榆塞等军事意象,烘托意境,营造事境,折射出言意尚理、叙议相彰的特点。同样运用意象,唐代边塞诗喜欢借助意象的并置与叠加形成丰富的画面感,北宋边塞诗多不以画面取胜,往往由意象切入边事的交代与态度的回应,最终传输清晰的价值判断与深刻的情感表达。

从文献记载看塘泺工程的兴废

北宋时期,河北路是宋辽接壤的边境地区,北方燕山天险丧失后,面对强大的辽国骑兵,出于巩固边防的需要,北宋政府依托本区域独特的地势和水资源条件,疏浚河流、筑堤蓄水,将河湖等自然水系联络起来,建成独特的“塘泺防线”,被誉为“水长城”。在防线附近营建寨堡,驻军戍守,依赖塘泺的水源开垦水田,种植水稻,为驻军提供军粮和水产品,造就了北方的鱼米之乡。北宋之后在自然、人为因素共同作用下塘泺逐渐废弃,金元明清继续对塘泺遗存进行改造利用。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病大鼠肠道炎症损伤的影响

目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病(T2DM)大鼠肠道炎症损伤的影响及作用机制。方法将8只ZDF(fa/+)大鼠作为空白组,40只ZDF(fa/fa)大鼠经高脂饲料喂养后,随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g/kg二甲双胍)和中药高、中、低剂量组(2.16、1.08、0.54 g/kg大黄糖络丸),给药组分别以相应药液灌胃,连续12周。干预前后测定大鼠体质量和空腹血糖(FBG),干预结束后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),检测血清葡萄糖(GLU)、糖化血清蛋白(GSP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,ELISA测定血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)及结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-22、脂多糖(LPS)、肠道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量,HE染色观察结肠组织形态,Western blot检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、核因子-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα、髓样分化因子88(MyD88)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、FBG显著升高(P<0.01),OGTT各时间点血糖显著升高(P<0.01),血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著升高,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著降低(P<0.01),结肠组织细胞核固缩,胞质溶解,炎性细胞浸润,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著升高,IκBα、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组和中药高、中剂量组体质量、FBG显著降低(P<0.01),OGTT不同时间点血糖降低,血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著降低,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织结构明显改善,炎性细胞浸润减少,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著降低,IκBα、ZO-1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论大黄糖络丸可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,减少炎症因子释放,改善肠道炎症损伤,恢复肠道内环境稳态,进而改善糖脂代谢,发挥治疗T2DM作用。

参七糖络丸激活Nrf2/HO-1/NQO1信号通路改善2型糖尿病小鼠骨骼肌氧化应激损伤

目的:基于核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)/醌氧化还原酶1(NQO1)通路探讨参七糖络丸对2型糖尿病小鼠骨骼肌氧化应激损伤的干预作用及机制。方法:选取SPF级7周龄雄性db/db小鼠60只适应性饲养1周,按随机数字表法分为模型组、参七糖络丸低、中、高剂量组(19、38、76 g·kg^(-1)))和二甲双胍组(0.26 g·kg^(-1))灌胃,每组12只,另选12只同周龄雄性db/m小鼠为空白组。连续干预8周。检测小鼠空腹血糖(FBG);采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测空腹血清胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(HOMA-ISI);口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、胰岛素耐量实验(ITT);生化试剂盒检测骨骼肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠骨骼肌组织病理学改变;免疫荧光法(IF)检测骨骼肌组织中活性氧(ROS)及4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG、FINS、HOMA-IR均明显升高(P<0.05),HOMA-ISI降低(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,小鼠血糖在各时间节点均明显升高(P<0.05),糖耐量和胰岛素耐量明显受损;骨骼肌组织中SOD、GSH-Px活力明显降低(P<0.05),MDA、NADPH含量明显升高(P<0.05);骨骼肌组织肌纤维排列疏松,细胞核紊乱,见炎细胞浸润;骨骼肌组织中ROS、4-HNE表达水平明显升高(P<0.05);骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,二甲双胍组FBG、FINS、HOMA-IR均明显降低(P<0.05),HOMA-ISI升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,二甲双胍组小鼠血糖在各时间节点均明显降低(P<0.05);骨骼肌组织中SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);骨骼肌组织未见明显异常;骨骼肌组织ROS、4-HNE表达均减少(P<0.05);骨骼肌组织中Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,参七糖络丸中、高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR均显著降低(P<0.05),HOMA-ISI均升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,参七糖络丸各剂量组均改善小鼠糖耐量和胰岛素耐量;参七糖络丸低剂量组GSH-Px活性明显升高(P<0.05),NADPH含量降低(P<0.05);参七糖络丸中、高剂量组SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);参七糖络丸各剂量组小鼠骨骼肌组织损伤均可见不同程度改善;参七糖络丸中、高剂量组ROS、4-HNE表达均降低(P<0.05);参七糖络丸中、高剂量组Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与参七糖络丸低剂量组比较,参七糖络丸高剂量组FBG、HOMA-IR明显降低(P<0.05),HOMA-ISI升高(P<0.05);OGTT、ITT结果显示,参七糖络丸高剂量组显著改善小鼠糖耐量和胰岛素耐量;骨骼肌组织SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),MDA、NADPH含量明显降低(P<0.05);骨骼肌组织未见明显异常;骨骼肌组织ROS、4-HNE表达均减少(P<0.05);骨骼肌组织Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:参七糖络丸能够显著改善T2DM小鼠IR,其机制与参七糖络丸激活骨骼肌中Nrf2/HO-1/NQO1通路,促进骨骼肌中抗氧化酶的表达,进而改善骨骼肌氧化应激损伤有关。

基于Wnt/β-catenin通路探讨大黄糖络丸对糖尿病肾病db/db小鼠肾纤维化的作用机制

目的 观察大黄糖络丸对糖尿病肾病db/db小鼠肾功能及纤维化的影响,并基于Wnt/β-catenin通路探讨其可能的作用机制。方法 将40只db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组(1.5 mg·kg^(-1))和大黄糖络丸低、中、高剂量组(0.9、1.8、3.6 g·kg^(-1)),每组8只。另取8只db/m小鼠为正常对照组。正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水,6组小鼠每日灌胃1次,连续10周。定期测量小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),收集尿液并检测尿微量白蛋白、尿肌酐、尿微量白蛋白/肌酐比值(albumin-to-creatinine ratio,ACR);眼球取血,用全自动生化分析仪检测小鼠胆固醇(cholesterol,CHO)、甘油三酯(triglyceride,TG)。Masson染色观察肾脏组织纤维化程度;Real-time PCR、Western blotting检测肾组织中Wnt3a、β-catenin、GSK-3β及p-GSK-3β的mRNA及蛋白表达水平。透射电子显微镜观察肾脏细胞超微结构的改变,并观测小鼠肾脏的病理损伤程度。采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。结果 与正常对照组相比,模型组小鼠一般状态较差,小鼠肾脏出现明显损伤及纤维化,FBG、CHO、TG、ACR水平均显著升高(P<0.01),肾脏组织中Wnt3a、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β mRNA及蛋白表达水平均明显提高(P<0.01)。与模型组相比,各给药组小鼠一般状态、肾组织超微结构损伤有不同程度改善,肾纤维化程度和FBG、CHO、TG、ACR水平有不同程度降低,肾组织Wnt3a、β-catenin、 GSK-3β及p-GSK-3β的mRNA和蛋白表达水平有不同程度降低,且大黄糖络丸高剂量组作用最明显(P<0.01),大黄糖络丸对糖尿病肾病db/db小鼠作用呈剂量依赖性。结论 大黄糖络丸可有效降低血糖,改善肾纤维化,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路有关。

大黄糖络丸对2型糖尿病大鼠肝损伤的影响及机制

目的探讨大黄糖络丸对2型糖尿病大鼠肝损伤的影响及机制。方法将ZDF(fa/fa)大鼠给予高脂饲料诱导2型糖尿病模型,造模成功后随机分为模型组、阳性药对照组(0.18 g·kg^(-1)二甲双胍)和低、中、高剂量实验组(0.54、1.08和2.16 g·kg^(-1)大黄糖络丸),每组8只。选取8只ZDF(fa/+)大鼠作为对照组。对照组及模型组灌服等体积纯净水,每日1次,持续12周。给药结束后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT);检测大鼠空腹血糖水平、体质量及肝质量并计算肝指数;检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量;用苏木精-伊红(HE)染色法和马松(Masson)染色法观察肝组织形态学变化。用蛋白质印迹检测肝组织磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的蛋白表达。结果对照组、模型组、阳性药对照组和高剂量实验组大鼠的空腹血糖分别为(4.71±0.45)、(29.90±2.97)、(15.28±4.52)和(13.84±1.55)mmol·L^(-1),肝指数分别为2.31±0.46、4.03±0.18、3.37±0.23和3.38±0.24,p-IRS1蛋白相对表达水平分别为1.00±0.36、4.00±0.11、1.62±0.27和1.90±0.17,p-Akt蛋白相对表达水平分别为1.00±0.25、0.21±0.04、0.73±0.15和0.54±0.04,GLUT4蛋白相对表达水平分别为1.00±0.11、0.40±0.08、0.86±0.04和0.70±0.06。高剂量实验组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论大黄糖络丸可有效改善2型糖尿病糖脂代谢和肝损伤,其作用机制可能与IRS1/Akt信号通路的激活有关。

大黄糖络丸调控AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路改善糖尿病肾病小鼠肾脏炎症损伤的机制

目的:探讨大黄糖络丸对db/db小鼠早期糖尿病肾病(DKD)的保护作用。方法:取8只db/m小鼠作为空白组,取40只雄性db/db小鼠通过尾静脉取血,检测空腹血糖(FBG),FBG≥16.7 mmol·L^(-1),尿量增多,且持续出现白蛋白尿提示造模成功。造模成功后随机分为模型组、达格列净组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、大黄糖络丸高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只。各给药组均采用灌胃给药,空白组和模型组每日给予等体积蒸馏水灌胃,连续给药10周,观察小鼠生存状态并测定小鼠体质量、FBG及肾功能相关指标;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肾组织中炎症相关指标;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、电镜观察各组肾脏组织病理学改变;免疫荧光观察晚期糖基化终末产物(AGEs)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中AGEs、RAGE、核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IKK)、NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量、FBG、血清肌酐(SCr)、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均明显增高(P<0.05);肾组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)明显增加(P<0.05);肾脏病理染色、电镜显示肾组织排列疏松,出现间隙,结构紊乱,系膜增生,纤维化明显;Real-time PCR结果显示,肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显增加(P<0.05);免疫荧光结果显示,肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显增加(P<0.05);Western blot结果显示,肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05)。给药干预后,与模型组比较,达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠体质量、FBG、SCr、ACR明显降低(P<0.05);达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TC明显降低(P<0.05);大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TG明显降低(P<0.05);各给药组肾组织中ICAM-1、IL-6和TNF-α表达明显降低(P<0.05)。肾脏病理染色、电镜显示各给药组小鼠肾脏损伤减轻,胶原纤维沉积减轻,系膜增生减少;Real-time PCR结果显示达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显降低(P<0.05);Western blot结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:大黄糖络丸能够改善DKD小鼠肾脏病理结构和肾脏炎症损伤,其作用机制可能与抑制AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路有关。

大黄糖络丸调控RXRA/TNF-α/GLUT4通路改善2型糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗

目的:基于网络药理学和分子对接技术预测大黄糖络丸改善2型糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗(T2DM-IRSM)的分子机制并进行动物实验验证。方法:采用网络药理学和分子对接技术预测大黄糖络丸干预2型糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗的可能靶点,并采用分子生物学技术验证相关靶点。选取30只SPF级9周龄雄性ZDF(fa/fa)大鼠纳入试验,适应性喂养1 w后采用5008饲料诱导3 w复制模型,成模后随机分为模型对照组、罗格列酮0.36 mg/kg组和大黄糖络丸0.54、1.08、2.16 g/kg组,另选6只9周龄SPF级雄性ZDF(fa/+)大鼠作为正常对照组,连续干预12 w。双周测定大鼠体质量和空腹血糖(FBG),结束后全自动生化分析仪测定血清葡萄糖(GLU);ELISA法检测血清空腹胰岛素(FINS)并计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI);采用HE染色法观察骨骼肌病理形态变化。结果:网络药理学预测结果中PPI网络互作分析发现肿瘤坏死因子(TNF)、葡萄糖转运蛋白4型(SLC2A4,又称GLUT4)、类视黄醇X受体α(RXRA)是“药物-疾病”交集靶点中的关键靶点,槲皮素、汉黄芩素、豆甾醇、(2R)-7-羟基-5-甲氧基-2-苯基苯并二氢吡喃-4-酮等为药物的关键活性成分。GO富集分析结果中生物过程(BP)涉及腺苷酸环化酶激活肾上腺素能受体信号通路、肾上腺素能受体信号通路、化学信号介导的全身动脉血压调节等;细胞组成(CC)涉及膜筏、膜微区、膜区等;分子功能(MF)涉及G蛋白偶联胺受体活性、核受体活性、配体激活的转录因子活性等。KEGG富集分析涉及的关键通路包括脂肪细胞因子信号通路、唾液分泌、心肌细胞中的肾上腺素能信号、cGMP-PKG信号通路、化学致癌-受体活化等。分子对接结果表明槲皮素、汉黄芩素、豆甾醇、(2R)-7-羟基-5-甲氧基-2-苯基苯并二氢吡喃-4-酮和TNF-α、GLUT4、RXRA靶点均能较好的结合,以上靶点均主要富集于RXRA/TNF-α/GLUT4通路。动物实验结果显示,与正常对照组比较,模型对照组大鼠体质量、血清葡萄糖、空腹血糖、血清空腹胰岛素和稳态模型胰岛素抵抗指数明显升高(P<0.05),胰岛素敏感指数显著降低(P<0.05),骨骼肌细胞成角萎缩,少量坏死,肌细胞排列紊乱疏松,结缔组织大量增生、炎性细胞浸润、见空泡样脂滴;骨骼肌组织中Glut4、Rxra mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),Tnfa mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05);与模型对照组比较,各给药组大鼠体质量、血清葡萄糖、空腹血糖、血清空腹胰岛素和稳态模型胰岛素抵抗指数明显降低(P<0.05),胰岛素敏感指数明显升高(P<0.05),各给药组大鼠骨骼肌组织病理损伤明显改善;骨骼肌组织Glut4、Rxra mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05),Tnfa mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),尤以大黄糖络丸2.16 g/kg组干预效果最为显著。结论:大黄糖络丸能够显著改善2型糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗,其发挥作用的具体机制与有效调控RXRA/TNF-α/GLUT4通路关键分子在骨骼肌组织中的异常响应有关。