糖肾灌肠方经肠道干预糖尿病肾病小鼠模型的肠道菌群研究

目的观察中药经肠道干预糖尿病肾病(DKD)小鼠肠道菌群的多样性。方法将72只小鼠建立DKD动物模型后随机分成模型组、糖肾灌肠方组、替米沙坦组、替米沙坦+糖肾灌肠方组和预防组,每组15只,另取12只小鼠做正常组,各组小鼠给予相应的28天治疗后收集新鲜粪便,用Illumina-MiSeq高通量测序技术分析微生物群落结构和组成的变化。结果通过Alpha多样性中Simpson指数整体结果显示,正常组、模型组、糖肾灌肠方组和替米沙坦组之间差异无统计学意义(P>0.05);替米沙坦+糖肾灌肠方组和预防组与其他各组之间有差异有统计学意义(P<0.05)。从门水平上,相对丰度大于5%的门包括:Firmicutes(厚壁菌门,43.9%),Bacteroidetes(拟杆菌门,41.0%),Proteobacteria(变形菌门,6.0%)。这三个菌门总共占到总体菌落的90.9%。其中占比最多的是厚壁菌门,其次是拟杆菌门和变形菌门。从属水平上,Lactobacillus(乳酸菌属,27.0%),Clostridiales(梭菌目属,7.1%),Akkermansia(阿克曼菌属,5.3%),Prevotella(普氏菌属,4.1%),Allobaculum(3.2%),Bacteroides(拟杆菌属,3.1%)占总体的72%。通过QIIME软件,结果显示经药物干预后,乳酸菌属、梭菌目属、普氏菌属、双歧杆菌属明显上升。结论糖肾灌肠方可能通过增加DKD小鼠肠道菌群多样性,影响了肠道菌群的结构,从而对DKD小鼠模型的肾脏起保护作用。

糖肾灌肠方通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路调节糖尿病肾病炎症反应的机制研究

目的:糖尿病肾病(Diabetic kidney disease,DKD)是由高血糖引起的慢性肾脏疾病,炎症反应在DKD中起着关键作用,糖肾灌肠方治疗DKD疗效显著,但作用机制尚不清楚。本研究采用体内实验、临床试验、网络药理学及分子对接等方法对糖肾灌肠方治疗DKD的作用机制进行研究。方法:选取60只C57小鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、卡格列净0.013 g/kg组、糖肾灌肠方52 g/kg组。高糖高脂饲养并腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导形成DKD模型。造模成功小鼠给予糖肾灌肠方组灌肠,阳性对照组灌胃给予药物,连续28 d。HE染色观察DKD小鼠肾组织病理形态学改变;通过RT-qPCR、Western blot法检测小鼠肾组织Pi3k、Akt、Nfkb、Tnfa、Il6的mRNA及蛋白表达。将40例符合纳入标准的DKD患者随机分为基础治疗对照组和观察组,各20例,另纳入健康体检者20例为正常对照组。基础治疗对照组应用西医基础治疗,观察组在其基础上联合糖肾灌肠方治疗,两组患者连续用药2 w后,比较两组患者尿微量白蛋白(mALB)、尿蛋白/肌酐(UACR)、巨噬细胞M1水平、TNF-α、IL-6含量;以糖肾灌肠方中药物的名称及“糖尿病肾病”为关键词,搜索相关数据库进行网络药理学及分子对接分析。结果:动物实验显示,与正常对照组比较,HE染色显示肾组织病理损伤明显加重,肾组织中Pi3k、Akt、Nfkb、Tnfa、Il6 mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,糖肾灌肠方52 g/kg组小鼠HE染色显示肾组织病理损伤得到改善,肾组织中Pi3k、Akt、Nfkb、Tnfa、Il6 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.01)。临床研究显示,经治疗,观察组相较于基础治疗组mALB、UACR含量、巨噬细胞M1水平、TNF-α、IL-6含量下降更为明显(P<0.01)。通过网络药理学研究,糖肾灌肠方筛选出活性成分118个,主要包括芦荟大黄素、水黄皮素等,发现核心靶点TNF-α、IL-6等,GO富集在BP中主要包括炎症反应等;MF主要包括蛋白结构域特异性结合等;CC主要包括细胞外空间等;KEGG富集发现PI3K/AKT等信号通路能在糖肾灌肠方治疗DKD中起关键作用。结论:糖肾灌肠方可能通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达及TNF-α、IL-6等炎症因子的释放,干预DKD炎症反应发挥治疗作用。