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TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义
被引量:
3
1
作者
高洁
严敏
+1 位作者
付婷
邵中军
《中国现代药物应用》
2018年第11期52-53,共2页
目的探究TapMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的方法及意义。方法 24例确诊感染乙型流感病毒的咽拭子及相关机构提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,均采用TapMa...
目的探究TapMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的方法及意义。方法 24例确诊感染乙型流感病毒的咽拭子及相关机构提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,均采用TapMan荧光定量RT-PCR检测,此外乙型流感病毒采用常规RT-PCR检测,观察检测结果。结果对于检测甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,TapMan荧光定量RT-PCR仅对乙型流感病毒呈阳性,且反应与其他病毒无交叉。TapMan荧光定量RT-PCR相比于常规RT-PCR检测,对于不同浓度的乙型流感病毒敏感度更高。对24例送检样本,TapMan荧光定量RT-PCR的准确率为83.33%(20/24),明显高于常规RT-PCR检测的54.17%(13/24),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对于乙型流感病毒的快速检测,根据病毒核酸的特点,使用TapMan荧光定量RT-PCR进行检测,具有高特异性、敏感度及准确率,推荐广泛应用。
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关键词
乙型流感病毒核酸
荧光定量
逆转录-聚合酶链反应
tapman探针
检测
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职称材料
金铁锁β-actin基因克隆及其作为内参基因的研究
被引量:
2
2
作者
李媛
张爱丽
+1 位作者
李国栋
钱子刚
《中药材》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1971-1974,共4页
目的:建立金铁锁β-actin基因实时荧光定量PCR方法,为金铁锁实时荧光定量PCR的检测提供了内参基因。方法:根据Gen Bank上β-actin基因保守区域设计特异性引物,利用PCR扩增的方法扩增β-actin目的片段。并以β-actin作为内参基因,利用荧...
目的:建立金铁锁β-actin基因实时荧光定量PCR方法,为金铁锁实时荧光定量PCR的检测提供了内参基因。方法:根据Gen Bank上β-actin基因保守区域设计特异性引物,利用PCR扩增的方法扩增β-actin目的片段。并以β-actin作为内参基因,利用荧光定量PCR技术对糖基转移酶基因(UGT)在金铁锁根、茎、叶组织中的表达情况进行分析。结果:扩增到金铁锁的β-actin基因序列,长度为153 bp,与王不留行、鹅肠菜、马齿苋的β-actin有较高的同源性。而糖基转移酶基因在以β-actin作为内参基因时能够在金铁锁的不同组织稳定表达。结论:金铁锁β-actin基因是一个可靠的内参基因,适合在金铁锁三萜皂苷生物合成相关功能基因的表达研究中作为内参基因。
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关键词
金铁锁
Β-ACTIN
实时荧光定量PCR
tapman探针
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职称材料
猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用
被引量:
2
3
作者
朱丽珂
房永祥
+8 位作者
李皖豫
刘娟
高真贞
贾怀杰
何小兵
陈国华
娄忠子
李维克
景志忠
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1475-1481,共7页
为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对Gen Bank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,...
为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对Gen Bank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证。结果显示,本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测,并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应,组内和组间检测变异系数均小于1%,敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1 000倍以上,且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/μL和1.58 copies/μL。应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测,结果,阳性符合率高达100%。本方法特异性强,稳定性和灵敏度高,不仅能够准确定量,并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测,为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段。
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关键词
猪瘟病毒
疫苗株
tapman探针
双重实时定量PCR
原文传递
题名
TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义
被引量:
3
1
作者
高洁
严敏
付婷
邵中军
机构
空军军医大学流行病学教研室、全军疾病预防控制实验室
出处
《中国现代药物应用》
2018年第11期52-53,共2页
基金
国家科技重大专项(项目编号:2017ZX10105011)
文摘
目的探究TapMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)快速检测乙型流感病毒核酸的方法及意义。方法 24例确诊感染乙型流感病毒的咽拭子及相关机构提供的甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,均采用TapMan荧光定量RT-PCR检测,此外乙型流感病毒采用常规RT-PCR检测,观察检测结果。结果对于检测甲型流感病毒(H1和H3)、呼吸道合胞病毒、禽流感病毒以及乙型流感病毒,TapMan荧光定量RT-PCR仅对乙型流感病毒呈阳性,且反应与其他病毒无交叉。TapMan荧光定量RT-PCR相比于常规RT-PCR检测,对于不同浓度的乙型流感病毒敏感度更高。对24例送检样本,TapMan荧光定量RT-PCR的准确率为83.33%(20/24),明显高于常规RT-PCR检测的54.17%(13/24),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论对于乙型流感病毒的快速检测,根据病毒核酸的特点,使用TapMan荧光定量RT-PCR进行检测,具有高特异性、敏感度及准确率,推荐广泛应用。
关键词
乙型流感病毒核酸
荧光定量
逆转录-聚合酶链反应
tapman探针
检测
分类号
R511.7 [医药卫生—内科学]
下载PDF
职称材料
题名
金铁锁β-actin基因克隆及其作为内参基因的研究
被引量:
2
2
作者
李媛
张爱丽
李国栋
钱子刚
机构
云南中医学院中药材优良种苗繁育工程中心
出处
《中药材》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期1971-1974,共4页
基金
国家自然科学基金(81260609)
云南省教育厅重点项目(2015119)
云南省教育厅科学研究基金(2015J101)
文摘
目的:建立金铁锁β-actin基因实时荧光定量PCR方法,为金铁锁实时荧光定量PCR的检测提供了内参基因。方法:根据Gen Bank上β-actin基因保守区域设计特异性引物,利用PCR扩增的方法扩增β-actin目的片段。并以β-actin作为内参基因,利用荧光定量PCR技术对糖基转移酶基因(UGT)在金铁锁根、茎、叶组织中的表达情况进行分析。结果:扩增到金铁锁的β-actin基因序列,长度为153 bp,与王不留行、鹅肠菜、马齿苋的β-actin有较高的同源性。而糖基转移酶基因在以β-actin作为内参基因时能够在金铁锁的不同组织稳定表达。结论:金铁锁β-actin基因是一个可靠的内参基因,适合在金铁锁三萜皂苷生物合成相关功能基因的表达研究中作为内参基因。
关键词
金铁锁
Β-ACTIN
实时荧光定量PCR
tapman探针
Keywords
Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu
β-actin
Real-time quantitative PCR
TaqMan probe
分类号
R282.71 [医药卫生—中药学]
下载PDF
职称材料
题名
猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用
被引量:
2
3
作者
朱丽珂
房永祥
李皖豫
刘娟
高真贞
贾怀杰
何小兵
陈国华
娄忠子
李维克
景志忠
机构
中国农业科学院
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1475-1481,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31972695)
“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0500907)。
文摘
为实现对猪瘟野毒株与疫苗株之间的快速鉴别,本试验建立了一种猪瘟野毒株与疫苗株的双重TapMan实时定量PCR的检测方法。通过对Gen Bank公布的猪瘟病毒野毒株及疫苗株的全基因组序列进行比对和分析,设计出2对特异性引物及2条TapMan探针,经反应体系及反应条件优化后,对其特异性、稳定性及敏感性进行了验证。结果显示,本方法能特异性地对猪瘟野毒株及疫苗株进行鉴别检测,并且不与其他常见的猪源病毒产生交叉反应,组内和组间检测变异系数均小于1%,敏感性较普通RT-PCR分别高出100倍和1 000倍以上,且野毒株与疫苗株的最低检测下限分别在1.3 copies/μL和1.58 copies/μL。应用本方法对实验室保存的甘肃某猪场猪瘟活疫苗免疫前、后的56份已知背景的样本进行检测,结果,阳性符合率高达100%。本方法特异性强,稳定性和灵敏度高,不仅能够准确定量,并且可快速地对同一个样品中猪瘟病毒野毒株、疫苗毒株进行检测,为后续猪瘟净化效果的评估提供了新的技术手段。
关键词
猪瘟病毒
疫苗株
tapman探针
双重实时定量PCR
Keywords
classical swine fever virus
hog cholera lapinized virus
tapman
probes
quantitative real-time PCR
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TapMan荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸方法的建立及意义
高洁
严敏
付婷
邵中军
《中国现代药物应用》
2018
3
下载PDF
职称材料
2
金铁锁β-actin基因克隆及其作为内参基因的研究
李媛
张爱丽
李国栋
钱子刚
《中药材》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
下载PDF
职称材料
3
猪瘟野毒株与疫苗株双重TapMan实时定量PCR方法的建立与应用
朱丽珂
房永祥
李皖豫
刘娟
高真贞
贾怀杰
何小兵
陈国华
娄忠子
李维克
景志忠
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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