常用化学试剂对Taq酶活性的影响

探讨用表面活性剂煮沸裂解结核杆菌（TB）快速提取DNA及在PCR试刑中加入一定浓度的表面活性剂和防腐剂后对Taq酶活性的影响程度．结果表明1％TritionX－100、1％Tween－20裂解TB后的残留部分对Taq酶活性无影响．我们用50ml1％TritionX－100或1％Tween－20与1ml临床标本混合后煮沸10分钟可有效裂解TB而获得阳性结果．但在PCR反应液中终浓度为1％TritionX－100、0．5％SDS、1％NP40、1％Tween－20、1／10000叠氮钠、1／1000甲醛对Taq酶有抑制作用，终浓度为5％甘油、1／10000硫柳汞、1／1000苯甲酸钠对Taq酶活性无影响．这对于分析PCR在出现假阴性及PCR试剂保存等方面都有一定意义．

不同DNA提取方法及Taq酶浓度对人白细胞抗原-B27基因分型结果的影响

目的探讨两种DNA提取方法(加热法、盐酸胍法)及不同浓度Taq酶对人白细胞抗原(HLA)-B27基因分型结果的影响。方法经柠檬酸右旋糖液抗凝的全血7人份,对比用加热法和盐酸胍法提取的DNA进行HLA-B27基因分型效果的差别;选取上述阴、阳性标本各1份,以Taq酶作浓度梯度试验,用浓度分别为每50微升0.3、0.6、1.2、2.4、4.8、7.2U6个梯度进行对比试验,摸索出HLA-B27基因分型试验中所需的最佳Taq酶浓度。结果用盐酸胍法所提取的DNA在HLA-B27基因分型实验中能达到很好的效果,而加热法的内对照不清晰。Taq酶浓度在0.3U/50μL时条带不清晰,在7.2U/50μL时阴性标本易产生非特异性条带。结论盐酸胍法提取DNA优于加热法。不同实验室应根据自身条件确定最佳反应条件及Taq酶浓度。

利用Taq DNA聚合酶直接从双链RNA模板中扩增靶序列

利用Taq DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性义具有反转录酶活性的特点,探索了在Taq DNA聚合酶单独作用下以双链RNA为模板进行PCR反应的条件。结果表明靶序列长度为277 bp、369 bp、987 bp时,均可直接进行PCR扩增;短片段序列扩增的退火温度在47．0℃、47．9℃、50．2℃、52．6℃、54．9℃、56．7℃条件下,均可有效扩增,而长片段序列扩增的退火温度在50．2℃、52．6℃、54．9℃、56．7℃条件下,也可扩增出相应的靶序列。这一结果提示利用Taq DNA聚合酶可以dsRNA为模板直接扩增目的片段,尤其是短片段的扩增。

融合大肠杆菌素DNA结合域的Taq DNA聚合酶的性质表征

Taq DNA聚合酶发现自水生热栖菌(Thermus aquaticus),是一种同时具有逆转录酶活性以及DNA聚合酶活性的工具酶。Colicin E(简称CE)蛋白质是一类以维生素受体BtuB为跨膜受体的大肠杆菌素,其中CE2、CE7、CE8和CE9是非特异性的DNase型大肠杆菌素。Taq DNA聚合酶由5′→3′核酸外切酶结构域、3′→5′核酸外切酶结构域以及聚合酶结构域组成。缺失5′→3′核酸外切酶结构域的Taq DNA聚合酶(ΔTaq)具有更高的产量,但是其进行性很低,无法扩增长片段。为了提高ΔTaq的进行性,本研究融合dCE和ΔTaq,发现dCE-ΔTaq的进行性相比于Taq DNA聚合酶和dCE-Taq显著提升,并且其逆转录酶活性也比ΔTaq更高。dCE8-ΔTaq的提升最明显,不仅能够1 min内扩增8 kb的DNA片段,并且产量高于其他突变体。综上所述,本研究通过将ΔTaq DNA聚合酶和dCE进行融合,提升了Taq DNA聚合酶的PCR效率和逆转录活性,为改造Taq DNA聚合酶提供了新的方法,有望开发出性质更好的Taq DNA聚合酶。

作物锰中毒以及耐锰机理研究(3)锰过量对不同作物呼吸作用和过氧化物酶活性的影响

选择水稻、大麦、玉米、紫花苜蓿、菜豆为参试作物。设置从0.3至32ppmMn浓度处理,作物水培14天后,测定各作物叶片呼吸率。在高Mn浓度下,除玉米外,其他参试作物的叶片上均出现程度不同受害斑点。水稻、大麦、紫花苜蓿、菜豆叶片的呼吸率均随溶液中Mn浓度上升而提高,呼吸强度上升的大小顺序为:紫花苜蓿】菜豆】大麦】水稻。在高Mn浓度中,几乎不影响玉米叶片的呼吸作用。

利用正交设计优化辣椒的SRAP反应体系

以辣椒雄性不育保持系B-07LP为试材,利用正交设计L16(45)在5个水平上对影响辣椒SRAP反应体系稳定性的dNTP浓度、引物用量及Taq酶活性浓度梯度等外部条件进行了优化试验。在此基础上,通过单因素完全随机试验确定了辣椒SRAP关键反应因子的适宜浓度。其中引物浓度为0.4μmol/L、dNTP的适宜浓度为0.2 mmol/L及适宜的Taq酶活性浓度为0.3 U/μL,并对所建体系的稳定性进行了验证。

PCR-DGGE技术在城市污水化学生物絮凝处理中的特点

通过PCR DGGE等分子生物学技术可以不经过常规培养直接从活性污泥和生物膜样品中提取DNA ,对 16SrDNAV3区进行PCR扩增 ,结合DGGE(变性梯度凝胶电泳 ) ,从而分析活性污泥与生物膜中微生物种群结构 .研究证实 ,活性污泥培养前后微生物种群结构发生很大的改变 .同时对 2种污水处理工艺中微生物种群结构进行了对比研究 ,对同一反应器不同位置微生物分布以及不同工况下的微生物种群结构进行了初步探讨 .测定了活性污泥中部分菌种的 16SrDNAV3区片段序列 ,通过NCBI(美国国立生物技术信息中心 )基因库比对 ,初步确定细菌的属 .结果显示 ,PCR

盐藻RAPD反应条件的优化

从盐藻中提取基因组DNA作为模板进行RAPD反应的优化试验 ,获得PCR扩增反应的最佳条件 :随机引物为CPS32 0 (5′ GGCTCATGTG 3′) ;2 0 μl体系中Mg2 + 2 .0mmol/L ,退火温度 35℃ ;Taq酶活性值 0 .8U。

山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs反应体系的优化

本文探讨了影响山东地方绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs扩增的因素,实验结果表明:抗凝剂、模板的浓度、纯度、Mg2+的浓度、引物的浓度、变性温度、Taq聚合酶、退火温度等因素对扩增结果的影响,为此我们对影响扩增结果的各个因素和反应程序进行了研究和浓度梯度的对比试验,建立了绵羊MHC-DRB3基因PCR-RFLPs的最佳反应体系和反应程序。

影响芥蓝×甘蓝RAPD标记稳定性的外部条件优化研究

通过对影响RAPD标记稳定性的引物浓度梯度、退火温度梯度、dNTP浓度梯度、Taq酶浓度梯度等外部条件的优化研究,确定了RAPD反应适宜的引物浓度为0.1～0.2 pmol/μL,退火温度为48～52 ℃,dNTP浓度为0.3～0.15 mmol/L及Taq酶浓度为0.3 U/μL,提高了该反应体系中RAPD的稳定性.