一种移码差错率大幅度下降的聚合酶N端缺失体的研究

采用双引物定点突变法，构建了以２３６位氨基酸为起始密码子的Ｔａｑ酶（ＴａｑＮＤ２３６）的高表达质粒。并以－１移码突变质粒ｐＦＤＰＭＩ１８作为模板，建立了测定ＤＮＡ聚合酶的体外合成精确性的Ｇａｐｐｅｄ－ＤＮＡ系统。通过转化大肠杆菌ＴＧ１菌株后计数Ｘ－ｇａｌ平板上蓝白菌落的比例，测定了Ｔａｑ和ＴａｑＮＤ２３６两种ＤＮＡ聚合酶在ＤＮＡ体外合成中的移码突变率，发现缺失后的ＴａｑＮＤ２３６复制精确性提高了１０倍以上。