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2种定量PCR法与探针杂交法在检测重组白介素1受体拮抗剂中宿主DNA残留量的比较
被引量:
2
1
作者
李京敬
郜尽
韩伟
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期140-145,共6页
目的:建立Taqman探针技术的定量PCR方法,对大肠杆菌E.coli/BL21菌株生产的重组白介素1受体拮抗剂(rhIL^-1ra)中的残留宿主DNA进行了定量分析,并与SYBR Green法和地高辛探针杂交法进行比较。方法:以BioRad Chromo 4荧光定量PCR仪...
目的:建立Taqman探针技术的定量PCR方法,对大肠杆菌E.coli/BL21菌株生产的重组白介素1受体拮抗剂(rhIL^-1ra)中的残留宿主DNA进行了定量分析,并与SYBR Green法和地高辛探针杂交法进行比较。方法:以BioRad Chromo 4荧光定量PCR仪为平台,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶基因,设计引物和Taqman探针,以纯化的宿主基因组DNA为标准品,对供试品中残留DNA进行定量。同时在重复性,精密度,检测限等方面与SYBR Green方法和地高辛探针杂交法进行比较。结果:本实验建立的Taqman探针法检测限为0.01 ng·mL^-1,在0.01~1000 ng·mL^-1区间同样具有良好的线性(r=0.997),回收率89.7%~136.0%。测定4批次供试品中残留DNA浓度为0.052、0.092、0.096、0.025 ng·mL^-1。结论:Taqman探针法与SYBR Green法检测灵敏度均达到0.01 ng·mL^-1,在重复性与精密度方面效果一致,且均优于探针杂交方法。
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关键词
大肠杆菌
定量PCR
宿主残留DNA
重组白介素1受体拮抗剂
质量控制
taqmen探针
原文传递
题名
2种定量PCR法与探针杂交法在检测重组白介素1受体拮抗剂中宿主DNA残留量的比较
被引量:
2
1
作者
李京敬
郜尽
韩伟
机构
上海交通大学药学院
交晨生物医药技术(上海)有限公司
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第1期140-145,共6页
文摘
目的:建立Taqman探针技术的定量PCR方法,对大肠杆菌E.coli/BL21菌株生产的重组白介素1受体拮抗剂(rhIL^-1ra)中的残留宿主DNA进行了定量分析,并与SYBR Green法和地高辛探针杂交法进行比较。方法:以BioRad Chromo 4荧光定量PCR仪为平台,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶基因,设计引物和Taqman探针,以纯化的宿主基因组DNA为标准品,对供试品中残留DNA进行定量。同时在重复性,精密度,检测限等方面与SYBR Green方法和地高辛探针杂交法进行比较。结果:本实验建立的Taqman探针法检测限为0.01 ng·mL^-1,在0.01~1000 ng·mL^-1区间同样具有良好的线性(r=0.997),回收率89.7%~136.0%。测定4批次供试品中残留DNA浓度为0.052、0.092、0.096、0.025 ng·mL^-1。结论:Taqman探针法与SYBR Green法检测灵敏度均达到0.01 ng·mL^-1,在重复性与精密度方面效果一致,且均优于探针杂交方法。
关键词
大肠杆菌
定量PCR
宿主残留DNA
重组白介素1受体拮抗剂
质量控制
taqmen探针
Keywords
E. coli
quantitative PCR
host residual DNA
recombinant IL - 1Ra
quality control
taqmen
probe
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
2种定量PCR法与探针杂交法在检测重组白介素1受体拮抗剂中宿主DNA残留量的比较
李京敬
郜尽
韩伟
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
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