蒲公英TmRAV1基因克隆及其响应脱落酸信号表达分析

根据脱落酸处理的蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)的转录组数据,在蒲公英中克隆获得1个编码RAV转录因子的基因序列,命名为TmRAV1。TmRAV1的开放阅读框(ORF)长度为1026 bp,编码342个氨基酸。TmRAV1的理论相对分子质量为38229,理论等电点为pI 9.20。TmRAV1为不稳定蛋白,具有亲水性,没有跨膜结构域和信号肽,含有44个磷酸化位点。氨基酸序列比对结果显示:TmRAV1与莴苣(Lactuca sativa Linn.)LsRAV1氨基酸序列的同源性最高(一致性为85.88%),具有高度保守的AP2和B3结构域。系统发育分析结果表明TmRAV1与其他5种植物的RAV转录因子聚在一起。TmRAV1在蒲公英叶中的相对表达量显著(P<0.05)高于根和花。TmRAV1受100μmol·L^(-1)脱落酸和250 mmol·L^(-1)NaCl的显著诱导。TmRAV1能够显著上调脱落酸敏感型转录因子基因TmAREB1的表达。TmRAV1是核定位转录因子,与脱落酸信号核心蛋白家族成员TmSnRK2.6互作。综上所述,蒲公英TmRAV1响应脱落酸等多种信号,其编码蛋白与TmSnRK2.6互作,并调控TmAREB1的表达。

食用蒲公英种子萌发对PEG-6000模拟干旱胁迫的响应

采用浓度分别为0%、5%、10%、15%、20%和25%的PEG-6000溶液模拟干旱条件,测定蒲公英种子在不同干旱胁迫条件下的日相对萌发率、发芽势、发芽指数、活力指数及上下胚轴长度等指标,研究了蒲公英种子萌发及幼苗生长对PEG-6000模拟干旱胁迫的响应,探讨了经20%、25%PEG-6000浸种预处理后种子的萌发恢复能力。结果表明:5%PEG-6000胁迫下提前了萌发高峰、提高了发芽率,促进了种子的萌发;10%PEG-6000胁迫显著降低了种子发芽势,但未对其发芽率产生显著影响;高度水分胁迫(15%PEG-6000浓度)显著抑制了蒲公英种子的萌发,并延长其萌发时间,但是,其种子萌发率仍是对照的73.35%,说明蒲公英具有很强的抗旱性。当重度胁迫时(20%、25%PEG-6000浓度)蒲公英种子未见萌发,解除胁迫后遇充足水分,蒲公英种子即立刻快速整齐的萌发,表现为蒲公英种子对较强干旱环境的适应性,也是野生植物的生存策略之一。

外源硒对蒲公英生长、生理特性及其硒含量的影响

为研究叶面喷施外源硒对蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)生长和品质的影响,采用盆栽试验,分析叶面喷施不同浓度亚硒酸钠溶液(0、100、200、300、400μmol/L)对蒲公英生长、生理特性及其硒含量的影响。结果表明,随着喷施硒浓度的增大,蒲公英根长和鲜重等生长指标呈先升高后降低的趋势;与对照相比,施加200μmol/L亚硒酸钠可显著提高蒲公英光合作用速率和光化学反应效率,提高光合色素含量;施加200μmol/L亚硒酸钠时蒲公英叶片SOD和CAT活性最高,施加300μmol/L亚硒酸钠时POD活性最高(P<0.05)。施硒可有效提高蒲公英绿原酸、总黄酮和总多酚的含量,施加200μmol/L亚硒酸钠时总黄酮和总多酚的含量较对照分别提高49.73%、31.34%。施硒后蒲公英各部位硒含量显著提高,叶片和根系的硒含量随硒浓度的变化符合一元二次方程。蒲公英叶片对外源硒浓度的变化较敏感,是富硒的主要部位。研究认为,叶面喷施200μmol/L亚硒酸钠是培养富硒蒲公英的最佳浓度。

ICP-MS法比较蒲公英根与茎叶中人体必需微量元素的含量

建立了电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法同时快速、准确检测蒲公英根与茎叶中12种人体必需微量元素的分析方法,比较了蒲公英地上与地下部分中所含的Mn、Zn、Sr、Rb、B、Cu、Cr、Ni、V、Co、Se、Mo12种人体必需微量元素的含量,为评价其药用价值及其不同部位医疗保健成分的选择性开发提供理论依据。采用电热板湿法消解法,分别将蒲公英根、茎叶粉末(过200目筛)放入HNO_3-H_2O_2(1∶2,v/v)中进行消解,以ICP-MS法测定,以In、Rh元素为内标,标准曲线法计算各元素含量。结果,12种元素在0.05 g/L^150 g/L范围内线性关系良好,相关系数r均大于0.999,各元素的检出限为0.008 g/g^0.02 g/g,加样回收率为96.1%~103.8%。蒲公英地下及地上部分均富含这12种微量元素,其中,Mn、Sr、Rb、B等4种元素在茎叶中含量(120.70 g/g、92.88 g/g、30.69 g/g、32.67 g/g)均明显高于根中含量(81.72 g/g、36.10 g/g、20.14 g/g、14.19 g/g);Zn、Cu、Cr、Ni、V、Co、Se、Mo在根中含量(81.88 g/g、15.92 g/g、20.24 g/g、6.372 g/g、4.907 g/g、1.698 g/g、1.575 g/g、1.8 g/g)则高于茎叶中含量(70.5 g/g、12.47 g/g、8.142 g/g、5.801 g/g、3.216 g/g、1.332 g/g、1.478 g/g、1.436 g/g)。所建立的ICP-MS法具有良好的精密度、重复性和准确性,可用于同时测定蒲公英根、茎叶中12种人体必需微量元素的含量。蒲公英根与茎叶中微量元素含量有所不同,该结果为合理利用蒲公英不同部位提供了数据支持。

蒲公英总黄酮提取液对D-gal衰老模型小鼠脑组织的抗氧化作用

目的 :探讨蒲公英总黄酮提取液对 D- gal衰老模型小鼠脑组织的抗氧化作用。方法 :采用小鼠注射 D- gal制成衰老模型 ,蒲公英总黄酮提取液灌胃 30 d,测定小鼠脑组织内 SOD、MDA、L PF的含量。结果 :蒲公英总黄酮提取液能提高衰老模型组小鼠脑组织内 SOD活性 (P <0 .0 5 ) ,降低 MDA、L PF含量 (P <0 .0 5 )。结论 :蒲公英总黄酮提取液能提高衰老模型小鼠脑组织的抗氧化能力 。

基于网络药理学对蒲公英抑制α-葡萄糖苷酶活性成分及作用机制的研究

为阐明蒲公英对α-葡萄糖苷酶抑制的活性成分。实验对蒲公英进行活性筛选和分子对接,结果表明,其乙醇提取物的石油醚萃取成分能良好抑制α-葡萄糖苷酶的作用(IC50=0.9μg/mL),其抑制效果强于阳性药阿卡波糖(IC50=174.3μg/mL)。故采用GC-MS联用技术从上述成分中分离鉴定了37个化合物,由虚拟筛选后,共得到5个成药性强的小分子化合物;通过与人源性α-葡萄糖苷酶进行分子对接后,证实其中2个小分子化合物能与α-葡萄糖苷酶存在亲和性。基于网络药理学构建蒲公英"降糖成分-靶点"图,阐述蒲公英的降糖机理。

蒲公英含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、黏附和运动的影响

目的:观察蒲公英对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、黏附和运动的影响。方法:将32只SD大鼠随机分为4组:对照组、蒲公英高(0.54 g·kg-1)、中(0.27 g·kg-1)、低(0.135 g·kg-1)剂量组,每组8只。各组每日早晚灌胃1次,对照组给予等体积生理盐水,连续给药6 d,第7天腹主动脉取血,分离血清。各组含药血清分别作用于人肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测细胞增殖及黏附情况,细胞划痕法检测细胞运动情况。结果:与对照组比较,蒲公英含药血清各剂量组均明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖、黏附及运动能力(P<0.05),抑制作用与浓度呈正相关。结论:蒲公英可抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、黏附及运动。

蒲公英总黄酮上调miR-129-5p表达改善高糖诱导的心肌细胞损伤的研究

目的:探讨蒲公英总黄酮对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及可能的机制。方法:将H9C2细胞分为对照组、高糖组,高糖+蒲公英总黄酮低、中、高浓度组,高糖+miR-NC、miR-129-5p组,高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC、anti-miR-129-5p组,后4组转染24 h后进行高糖损伤和(或)蒲公英总黄酮干预。CCK-8法检测细胞活性,试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧(ROS)含量,流式细胞术评估凋亡率,Western blotting分析凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-129-5p表达。结果:与对照组比较,高糖组心肌细胞的MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平升高,细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平、miR-129-5p表达水平降低(均P<0.05)。与高糖组比较,高糖+蒲公英总黄酮低、中、高浓度组心肌细胞的MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平逐渐降低,细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平、miR-129-5p表达水平逐渐升高,呈浓度依赖性(均P<0.05)。高糖+miR-129-5p组心肌细胞中miR-129-5p表达水平、细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平高于高糖+miR-NC组,MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平低于高糖+miR-NC组(均P<0.05)。高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-129-5p组较高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC组心肌细胞中miR-129-5p表达水平、细胞活性、SOD、CAT活性、Bcl-2蛋白水平低,MDA、ROS含量、LDH活性、凋亡率、Bax蛋白水平较高糖+蒲公英总黄酮+anti-miR-NC组高(均P<0.05)。结论:在高糖诱导的心肌细胞损伤中,蒲公英总黄酮通过上调miR-129-5p提高细胞活性,改善氧化应激,并减少细胞凋亡。

蒲公英黄酮类物质的抗氧化活性

为研究蒲公英中黄酮类物质的抗氧化活性,分别应用NBT法测定去除超氧阴离子活性,Vc-Cu2+ -Cyt·C反应体系研究清除羟自由基的能力,采取H2O2 及UV诱导的红细胞溶血实验研究总黄酮、芦丁和槲皮素的抗H2O2、UV破坏膜结构的能力.结果表明在清除O·2 、·OH及抗H2O2 诱导的红细胞溶血实验中总黄酮的活性都比芦丁和槲皮素及阳性对照组VitE较强,在UV诱导的红细胞溶血实验中略弱于VitE.说明蒲公英黄酮类物质具有较强的清除活性氧(ROS)的活性.

蒲公英的化学成份及其药理作用

蒲公英种类繁多、资源丰富、化学成分复杂,其活性成分主要有黄酮类、萜类、酚酸类、蒲公英色素、植物甾醇类、倍半萜内酯类和香豆素类等。蒲公英具有良好的广谱抗菌、抗自由基、抗病毒、抗感染、抗肿瘤作用,有养阴凉血、舒筋固齿、通乳益精、利胆保肝、增强免疫力等功效。蒲公英与其它中药配合用于治疗烧伤合并感染、胃痛、急性胆道感染、腮腺炎等多种疾病。

蒲公英体外抑菌作用研究

目的 :探讨蒲公英的体外抑菌作用。方法 :用 K- B纸片扩散法 10 0 %蒲公英浸出液滤纸片对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用进行了研究。结果 :蒲公英对以上细菌均有明显抑菌作用。结论 :蒲公英在体外有明显的抑菌作用。

旱生和湿生生境对蒲公英体内抗氧化物质的影响

选择旱生和湿生生境中生长的蒲公英 (TaraxacummongolicumHand -Mazz)分根、叶、花序分别测定抗氧化成分及总抗氧化能力 ,并比较了SOD同工酶谱的变化情况。结果表明不同生境选取的蒲公英叶片中抗氧化物质以SOD、POD、CAT等抗氧化酶和Vc等小分子为主 ,花序中可溶性糖、类黄酮和绿原酸含量最高 ;湿生蒲公英各器官尤其是根中的SOD、CAT、POD活性高于旱生蒲公英对应器官中的酶活性 ,旱生蒲公英各器官尤其是花序中的可溶性糖、类黄酮和绿原酸含量高于湿生蒲公英对应器官中的含量 ;旱生和湿生生境未诱导出新的SOD同工酶带 ;

蒲公英总黄酮的提取工艺及定性分析

探讨了蒲公英总黄酮的提取工艺。在单因素实验的基础上,通过正交实验,确定总黄酮提取的最佳工艺条件为:乙醇浓度75%,温度70℃,液料比28∶1,时间60min,在此条件下,总黄酮含量达到3.869%(以芦丁计)。通过颜色反应和紫外光谱法对提取物进行了定性分析,结果表明,提取物中存在黄酮类化合物,其类型主要为黄酮醇类,还可能含有黄酮或二氢黄酮类。

超微粉碎对蒲公英成分溶出特性的影响

目的 :对蒲公英超微细粉体有效成分溶出特性进行观察研究。方法 :对蒲公英药材进行细胞级超微粉碎 ;用薄层色谱法对其所含成分溶出特性进行观察研究。结果 :超微细粉体薄层色谱有明显改变 ,其中代表成分咖啡酸可在甲醇及水中快速溶出。结论 :蒲公英经超微粉碎后 ,成分溶出特性有明显改变 ,由此可简化提取过程。

蒲公英在食品中的开发与应用

蒲公英既是传统的营养保健野菜,又是常用的中药材,富含多种营养元素及保健功能因子,有很大的开发价值。就蒲公英的营养成分及在食品中的应用现状作一阐述,为蒲公英在食品中的深度开发提供理论参考。

蒲公英的化学与药理

中药蒲公英主要含有胡萝卜素类、三萜类、植物甾醇类、倍半萜内酯类、香豆素类、黄酮类和酚酸类物质．药理研究认为其具有抑菌、抗内毒素、健胃、利胆、通乳和抗肿瘤作用．

蒲公英水溶性化学成分研究

目的：研究蒲公英全草的水溶性化学成分。方法：采用多种层析分离技术进行分离纯化，根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果：从蒲公英干燥全草的85％乙醇提取物的水溶性部位中分离得到9个化合物，分别鉴定为：反式对羟基-苯丙烯醇（1）、反式对羟基-苯丙烯醛（2）、对羟基苯甲酸（3）、对羟基苯丙酸（4）、4-羟基．2，6-甲氧基苯酚-1-O-β-D-葡萄糖苷（5）、原儿茶醛（6）、芦丁（7）、槲皮素（8）、山柰酚-3-O-α—L-吡喃鼠李糖基-（1→6）β—D-葡萄糖苷（9）。结论：其中，化合物1～6为首次从该植物中分离得到。

高效毛细管电泳法测定蒲公英及妇洁灌肠液中咖啡酸的含量

目的采用高效毛细管电泳法对妇洁灌肠液及蒲公英原药材中所含咖啡酸进行含量测定,尝试从原药材到成品二个层面来控制妇洁灌肠液的质量.方法高效毛细管电泳法.电泳条件为:石英毛细管柱(75μm×60cm);运行缓冲液为20 mmo1/L的硼砂溶液(25℃时pH=9.18);分离电压12 kV;真空进样时间为5 s;温度为25℃,紫外检测波长为313 nm.结果咖啡酸在10～100μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.999 2).平均回收率大于95%;RSD均小于3%(n=3).结论本法简单、快捷、灵敏,可用于蒲公英及妇洁灌肠液的质量控制.

藏药星状凤毛菊、藏蒲公英的生药学鉴定

采用原植物、性状、显微、薄层鉴定的方法对藏药星状凤毛菊、藏蒲公英进行系统的生药学鉴定,为其鉴别及应用提供科学依据。结果表明:通过原植物、性状、显微、薄层色谱图研究能够很好的鉴定原植物。

蒲公英水提物对鲫鱼生长、鱼体成分、消化酶和免疫系统的影响

本试验将蒲公英水提物添加在鲫鱼饲料中喂养鲫鱼70d,观察研究蒲公英水提物对各组鲫鱼的生长、鱼体成分、消化酶和免疫系统的影响。结果表明,添加4%、2%的蒲公英水提物能促进鲫鱼的生长,对鲫鱼的肉质有改善作用,能显著提高鲫鱼的淀粉酶和蛋白酶活性(P<0.05);添加4%、2%蒲公英水提物组鲫鱼血液白细胞数目均极显著增多(P<0.01);4%、2%和1%的蒲公英水提物对鲫鱼血清总蛋白、甘油三酯的含量和谷丙转氨酶活性均无显著影响(P>0.05);4%、2%的蒲公英水提物能显著提高鲫鱼血清碱性磷酸酶的活性(P<0.05)。