靶分子亲和-质谱联用技术应用于中药等复杂体系中活性成分的筛选

如何从中药等复杂体系中快速、高效地筛选出活性成分,是现代药物研究的重要领域之一。基于光学检测或放射性检测的高通量药物筛选模式,在应用于中药等复杂体系时,由于没有成分分离过程,易产生假阳性或假阴性结果;而采用传统的成分分离、结构鉴定、活性测试的筛选模式,则存在工作量大、周期长、活性成分易丢失等缺陷。靶分子亲和-质谱联用技术是利用药物靶点与配体的亲和作用或靶酶的催化作用将活性成分从复杂体系中抽提出来,并用质谱对其进行检测及活性评价的一种筛选技术。本文对适用于中药等复杂体系中活性成分筛选的靶分子亲和-质谱联用技术进行了综述,主要介绍直接进样质谱筛选技术、膜分离-质谱联用技术、分子排阻色谱-质谱联用技术、固定化靶蛋白-质谱联用技术、前沿亲和色谱-质谱联用技术、高效液相色谱恒流在线反应-质谱联用技术等的原理及其应用,为中药活性成分筛选提供技术参考。

DNA与生物碱类化合物非共价作用的负离子电喷雾质谱研究(Ⅰ)

Oligodeoxynucleotide from SARS virus was selected and synthesized. Its complexes with alkaloid compounds were investigated by electrospray mass spectrometry. We found that three alkaloid compounds could interact with the DNA target molecule in five alkaloids analyzed. With increasing molar ratio of the three alkaloid compounds, the complexes between alkaloids and DNA with different stoichiometric ratios were found in their MS spectra. The order of the alkalinity of their gas phase corresponds to that of liquid phase, that is: Palmatine>Jatrorrhizine>Berberin. The relative abundance of these complexes in mass spectra can assess the relative affinities of above three alkaloid compounds with the DNA target molecule. In this paper, the binding sites between jatrorrhizine and DNA was deduced from the interaction experiments of jatrorrhizine with three nucleosides.

靶向亲和-液质联用技术对人参茎叶总皂苷中α-葡萄糖苷酶抑制剂的快速筛选

建立了用于快速筛选人参茎叶总皂苷中α-葡萄糖苷酶抑制剂的靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术(Target molecule affinity-LC-ESI-MSn)。从人参茎叶总皂苷中筛选并鉴定出了人参皂苷Rb3等12种具有潜在α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物,同时对其中5种化合物(包括人参皂苷F2,Rf,Rg3,Rd和Rb3)进行了活性验证,发现人参皂苷Rb3活性最强,对α-葡萄糖苷酶活性抑制率为43.16%,抑制作用接近总皂苷。本方法直接从复杂的中药提取物中筛选出具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性成分,简单、快速、准确,适用于实现复杂体系中α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选。

靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术快速筛选黄藤总生物碱中乙酰胆碱酯酶抑制剂

采用靶向亲和-液相色谱-质谱联用技术(Target molecule affinity-LC-ESI-MS^n)快速筛选黄藤总生物碱中能够抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,共筛选出12种具有潜在抑制乙酰胆碱酯酶的活性成分,并鉴定了6种成分,分别为黄藤素(Palmatine)、小檗碱(Berberine)、药根碱(Jatrorrhizine)、巴马汀红碱(Palmatrubine)、7,8-二氢-8-羟基小檗碱(7,8-Dihydro-8-hydroxyberberine)、Groenlandicine,结合体外酶学实验对这6种化合物进行了活性验证实验。结果表明,黄藤素抑制活性最强,其抑制作用强于阳性对照药盐酸多奈哌齐,说明黄藤素具有开发成抗阿尔茨海默症药物的潜力。本方法简单、快速、准确地从复杂的中药提取物中筛选出具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的成分,适用于复杂体系中的高通量筛选。

超滤质谱法筛选与人血清白蛋白作用的大豆异黄酮粉中异黄酮成分

以异黄酮标准物质和人血清白蛋白为模型,采用超滤质谱法建立了一种从天然提取物中筛选鉴定活性物质的方法。利用此方法从大豆异黄酮粉提取物中筛选并鉴定了4种能与人血清白蛋白结合的异黄酮物质,验证了该方法的有效性,为筛选出与靶蛋白相互作用的具有生物活性的药物分子提供了新的实验途径。

超滤质谱技术在药物小分子与生物靶分子相互作用研究中的应用

药物小分子与生物体内靶分子之间的相互作用,是药物发挥其药理活性的重要途径之一。因此,高通量地筛选出能够与生物靶分子相互作用且具有生物活性的药物小分子,对于新药开发研究具有重要的理论意义和实际应用价值。超滤质谱技术是超滤装置与质谱技术结合后形成的一种新的分析方法,它能够在液相条件下快速识别并鉴定出与生物靶分子结合的药物小分子配体。与其他分析方法相比,超滤质谱技术具有快速、灵敏、高通量的特点,因而被广泛应用于研究药物小分子和生物靶分子相互作用。本文综述了超滤质谱技术的原理、特点和实验操作中的一些关键问题。重点介绍了超滤质谱技术在药物小分子与生物靶分子相互作用研究中的应用进展,并对其未来的发展方向进行了展望。

靶分子亲和-质谱联用技术在中药活性成分筛选中的应用进展

中药效应成分的快速辨识是现代药物研究的重要挑战之一,本文对2005年以来适用于中药等复杂体系中活性成分筛选的靶分子亲和-质谱联用技术进行了综述。根据亲和筛选的原理,将对柱前亲和筛选(包括超滤-质谱联用技术、分子排阻色谱-质谱联用技术、涡流色谱-质谱联用技术、限制介入-质谱联用技术和固定化靶分子-质谱联用技术)和柱后亲和筛选(液相色谱柱后在线反应-质谱联用技术)的方法及其应用进行综述,为中药等复杂体系中活性成分的快速筛选提供技术参考。

药物靶标配体高通量筛选的亲和质谱技术研究

疾病相关的药物靶标蛋白与小分子化合物的亲和作用研究是当今新药研发的热点领域,基于靶蛋白与配体亲和作用的筛选技术已成为与基于靶蛋白活性高通量筛选技术高度互补的药物先导化合物发现关键技术。本文综述了亲和质谱技术用于筛选和检测指定靶蛋白的小分子配体的基本原理和主要优势,详细介绍了该技术应用于大规模化合物库筛选、分子片段库筛选、天然产物粗提物筛选和蛋白质与胞内代谢物相互作用研究领域的主要进展。