塔里木马鹿生茸不同阶段营养物质表观消化率及瘤胃内环境变化规律的研究

本试验旨在研究塔里木马鹿生茸不同阶段营养物质表观消化率及瘤胃内环境变化规律。选择体况良好、年龄相同的雄性塔里木马鹿5只,饲养水平一致,采用单因素试验设计,分为4个生茸阶段(脱盘前期、生茸高峰期、生茸后期和锯茸后期)。每期21 d,其中预试期15 d,正试期6 d。结果表明:1)塔里木马鹿生茸高峰期的粗蛋白质(CP)表观消化率显著高于生茸后期和锯茸后期(P<0.05),生茸高峰期的有机物(OM)和酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率显著高于锯茸后期(P<0.05)。2)塔里木马鹿生茸高峰期和生茸后期的瘤胃微生物蛋白(MCP)和丙酸含量显著高于脱盘前期和锯茸后期(P<0.05),生茸高峰期的瘤胃乙酸、丁酸及总挥发性脂肪酸(TVFA)含量显著高于脱盘前期、生茸后期和锯茸后期(P<0.05),生茸后期的瘤胃异丁酸含量显著低于脱盘前期和锯茸后期(P<0.05),脱盘前期和锯茸后期的瘤胃异戊酸含量显著高于生茸高峰期和生茸后期(P<0.05)。3)在门水平上,塔里木马鹿生茸不同阶段瘤胃中拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)为优势菌门;生茸高峰期的瘤胃拟杆菌门相对丰度显著高于脱盘前期(P<0.05),脱盘前期瘤胃厚壁菌门和变形菌门(Proteobacteria)相对丰度显著高于生茸高峰期(P<0.05)。在属水平上,塔里木马鹿生茸不同阶段瘤胃中未注释的拟杆菌目(unidentified-Bacteroidales)、解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)为优势菌属;生茸后期的瘤胃未注释的瘤胃球菌科(unidentified-Ruminococcaceae)相对丰度显著高于生茸高峰期(P<0.05),脱盘前期的瘤胃未注释的毛螺菌科(unidentified-Lachnospiraceae)和厌氧弧菌属(Anaerovibrio)相对丰度显著高于生茸高峰期(P<0.05)。由此可见,塔里木马鹿在生茸高峰期表现出对蛋白质的高效利用能力,瘤胃未注释的毛螺菌科、厌氧弧菌属和未注释的瘤胃球菌科是影响塔里木马鹿生茸阶段营养物质表观消化率和发酵参数的主要菌属。

HGF及其受体c-Met基因在损伤修复的马鹿茸组织中的表达特征

为了探求鹿茸损伤修复的分子机制,本试验收集了意外折断修复50 d和65 d后的鹿茸样品,利用qRT-PCR技术和免疫组织化学技术检测HGF和c-Met基因在损伤修复的鹿茸与健康鹿茸组织中的表达。结果表明,HGF及c-Met基因在损伤茸总组织中的相对表达量显著高于健康鹿茸,在茸皮、间充质、软骨和骨四个组织中,茸皮组织相对表达量最高,间充质组织的相对表达量最低;与健康鹿茸组织相比,损伤茸茸皮组织中HGF及c-Met基因的相对表达量极显著降低(P<0.01),而在损伤茸间充质组织中的相对表达量极显著增加(P<0.01),损伤茸与健康茸的软骨和骨组织相对表达量差异不显著(P>0.05)。在损伤修复过程中,HGF及c-Met基因随损伤修复进程的继续表达量也随之上升。因此,HGF及c-Met基因对马鹿茸组织损伤修复及再发育可能具有促进作用。

增茸素对塔里木马鹿茸形态组织的影响

塔里木马鹿鹿茸组织的形态学是研究鹿茸生长发育机制的基础。本研究以增茸素处理和自然生长的生长期为30和60d的塔里木马鹿二茬鲜茸为材料,采用常规石蜡切片和HE染色等方法,对其茸皮层、未分化的间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层进行组织形态学研究。结果显示:自然生长60d的鲜茸茸皮组织切片中除了静脉数(8.56±2.66个.mm-2)外,动脉数(9.14±2.32个.mm-2)、毛囊数(15.6±6.45个.mm-2)、神经数(16.44±5.67个.mm-2)均分别高于30d的(分别为2.53±1.17、6.67±2.99、3.62±2.32个.mm-2),其中动脉和神经生长变化差异显著(P<0.05)。其它组织层附属器官生长变化无显著性差异。用增茸素处理后,茸皮仍有相类似的生长变化,神经生长变化差异仍显著(P<0.05);生长60d间充质细胞层组织切片中动脉数(3.21±1.08个.mm-2)显著高于30d的(2.47±1.17个.mm-2)(P<0.05),而生长30d的成软骨细胞层中的动脉数(10.17±2.87个.mm-2)高于60d的(8.27±2.33个.mm-2)(P<0.05)。增茸素处理组30d茸皮组织切片中的动脉数(8.74±2.90个.mm-2)和神经数(8.62±2.18个.mm-2)显著地高于自然生长组30d的(2.53±1.17、3.62±2.32个.mm-2)(P<0.05),因此增茸素对鹿茸早期生长的影响较大。马鹿茸从生长30d到60d,各组织层的变化以茸皮层最明显,以间充质细胞层的生长变化最小。

塔里木马鹿再生茸组织中原癌基因c-myc、c-fos的表达

为进一步确定原癌基因c-myc、c-fos对马鹿茸生长的作用,实验收集231头2至4岁公鹿产茸量的生产信息,并采用3头成年马鹿生长期为30天、60天的头茬鲜茸和3头成年马鹿割后生长30天、60天的再生鲜茸,通过荧光定量PCR技术对不同组织基因的表达定量分析。结果表明,在鹿茸生长早期c-myc在再生茸茸皮的表达量显著低于头茬茸(P<0.01)。c-myc基因在割后再生的60天鹿茸茸皮和软骨组织表达下调,与头茬茸60天的相比,表达有显著差异(P<0.05)。间充质细胞层和成软骨层c-myc基因的表达量很低,且表达没有差异。从30天到60天,c-fos基因割后再生的马鹿茸茸皮中的表达下调,而在软骨组织中表达上调。与头茬60天茸相比,表达均有显著差异(P<0.05)。而在间充质细胞层和成软骨层没有差异。c-fos基因头茬与割后再生的60天马鹿茸的表达趋势与生长期为30天的相同。与头茬茸比较,再生茸成软骨层组织c-fos基因表达有上调趋势。结论:原癌基因c-myc、c-fos对茸皮的生长主要是促进其表皮干细胞的增殖分化;而对软骨组织c-myc基因高表达有阻碍茸软骨骨化,减缓骨化进程的作用,c-fos基因低表达有抑制生茸期骨膜内生骨的过程。

原癌基因c-fos在塔里木马鹿茸组织中表达特性的研究

为探讨原癌基因c-fos对鹿茸生长的调控作用,采用3头成年塔里木马鹿Cervus elaphus生长期为30、60d的新鲜鹿茸,剖分成茸皮层、间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层。首先用2种免疫组化的方法进行基因表达定位,然后通过荧光定量PCR技术对不同组织基因的表达进行定量分析。免疫组化分析结果表明,该基因在茸皮的毛囊内根鞘和毛母质及皮脂腺、动脉血管的环形平滑肌处呈阳性反应;真皮乳头层与表皮基部连接的基底层呈阳性反应。在静脉血管、神经和其他附属器反应均未观察到阳性细胞。在间充质细胞层、成软骨层和软骨层2种方法均没有观察到c-fos的阳性表达细胞。定量分析发现,c-fos基因在不同生长阶段不同组织层均有表达,且在茸皮的表达量显著的高于间充质细胞层,成软骨层和软骨层(P<0.05)。在同一生长期间充质细胞层、成软骨层和软骨层c-fos的表达量很低;生长30与60d比较,c-fos在间充质细胞层和成软骨层变化不大,在茸皮层和软骨层表现为下调表达。本研究表明c-fos基因在鹿茸快速生长期参与了茸皮干细胞的增殖与分化,并对成骨细胞的分化起着调控作用。

原癌基因c-myc在塔里木马鹿茸不同生长期的表达

为探讨原癌基因c-myc对鹿茸生长的调控作用,选择3头成年塔里木马鹿生长期为30、60d的新鲜鹿茸,剖分成茸皮层、间充质细胞层、成软骨细胞层和软骨细胞层。首先用2种免疫组化的方法进行基因表达定位,然后通过荧光定量PCR技术对不同组织基因表达定量进行分析。结果显示:该基因在茸皮的毛囊内根鞘、毛母质和皮脂腺呈阳性反应,在动脉血管的环形平滑肌、真皮乳头层与表皮基部连接的基底层呈阳性反应。在静脉血管、神经和其他附属器反应均呈阴性。定量分析结果表明c-myc基因在不同生长阶段不同组织层均有表达。茸皮层从生长期30～60d,c-myc表达下调,而在其他3个组织中均上调表达;同一生长期茸皮和软骨层的表达量均高于间充质细胞层和成软骨层(P<0.05);不同生长期30、60d组织间基因的表达没有显著的变化。研究结果表明,c-myc基因在鹿茸快速生长期参与了茸皮的增殖与分化;在软骨组织中高表达特别是生长后期,说明原癌基因c-myc对马鹿茸软骨发育及骨形成有着一定调控作用。

鹿茸Ca^(2+)含量与塔里木马鹿收茸期的关系研究

为了确定不同年龄段塔里木马鹿鹿茸的最佳收茸时间,保证鹿茸的药用价值,试验选取老、中、青3个年龄段的塔里木马鹿各6头,采用火焰原子吸收分光光度法,分别测定不同生茸时期鹿茸中Ca2+的含量。结果表明:青年组至6月17日鹿茸上段Ca2+含量增加显著,确定其最佳收茸时间以6月17日为宜;中年、老年组的最佳收茸时期在6月3日左右,三者存在时间差异。