果子狸苦味受体Tas2R2基因的克隆与序列分析

采用PCR和克隆测序方法首次从果子狸基因组中获得一全长为1 037 bp的苦味受体Tas2R2基因DNA序列。该序列含有完整的1个外显子(无内含子),大小为915 bp,编码304个氨基酸残基。其蛋白质等电点为9.84,分子量为34.87 ku。高级结构预测显示果子狸Tas2R2蛋白由4个胞外区、7个跨膜区和4个胞内区组成,该蛋白上含有N糖基化位点、丝氨酸磷酸化位点、色氨酸磷酸化位点各3个和酪氨酸磷酸化位点1个。亲水性/疏水性分析表明,果子狸Tas2R2蛋白质为疏水性蛋白,其亲水性区段所占比例较小。种间同源性比较显示,果子狸Tas2R2基因与猫、犬、大熊猫、牛、马、黑猩猩和小鼠的cDNA序列同源性分别为93.0%、89.4%、89.9%、85.4%、85.9%、84.6%、72.2%;氨基酸序列同源性分别为88.8%、81.1%、83.2%、75.9%、77.8%、75.5%、61.3%。果子狸、猫、犬、大熊猫、牛、马、黑猩猩和小鼠的Tas2R2基因编码序列构建的进化树表明果子狸与猫的亲缘关系最近。

黑熊苦味受体Tas2R2基因的分子克隆与序列分析

实验采用PCR和克隆测序方法首次从黑熊基因组中获得一全长为1 019 bp的苦味受体Tas2R2基因DNA序列(GenBank登录号:JQ239035)。该序列含有完整的1个外显子(无内含子),大小为915 bp,编码304个氨基酸残基。其蛋白质等电点为9.49,分子量为34.80 kDa。拓扑结构预测显示黑熊Tas2R2蛋白上含有3个N糖基化位点、4个丝氨酸磷酸化位点、3个色氨酸磷酸化位点和1个酪氨酸磷酸化位点。整个蛋白质多肽链含有7个跨膜螺旋区,细胞外区和内区均为4个。亲水性/疏水性分析表明,黑熊Tas2R2蛋白质为疏水性蛋白,其亲水性区段所占比例较小。种间同源性比较显示,黑熊Tas2R2基因与大熊猫、猫、犬、马和小鼠的cDNA序列同源性分别为98.3%、91.5%、62.9%、58.7%、52.6%;氨基酸序列同源性分别为96.7%、85.5%、49.3%、44.7%、36.1%。黑熊、大熊猫、犬、猫、马和小鼠的Tas2R2基因外显子核苷酸序列构建的基因树与其物种树的拓扑结构是相一致的,表明Tas2R2基因适合于构建不同物种间的系统进化树。