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枯草芽孢杆菌HAS中TasA基因的克隆与分析
被引量:
3
1
作者
熊国如
赵更峰
+3 位作者
蔡文伟
伍苏然
杨本鹏
张树珍
《贵州农业科学》
CAS
2016年第12期53-57,共5页
为弄清枯草芽孢杆菌HAS对甘蔗黑穗病菌的抑制作用机理,选取可对多种植物病原真菌有抑制作用的抗菌蛋白TasA基因进行克隆与分析。结果表明:在HAS菌株中含有TasA基因,克隆编码抗菌蛋白TasA的基因全长,序列分析其有786个碱基组成,该序列与G...
为弄清枯草芽孢杆菌HAS对甘蔗黑穗病菌的抑制作用机理,选取可对多种植物病原真菌有抑制作用的抗菌蛋白TasA基因进行克隆与分析。结果表明:在HAS菌株中含有TasA基因,克隆编码抗菌蛋白TasA的基因全长,序列分析其有786个碱基组成,该序列与GenBank上登录的TasA(AJ871386.1)序列同源性达99%,推测蛋白分子量大小大约28KD,其中第104、164、169、250、399、623、627位等7个碱基发生碱基转换或颠换,而且这些变异分别发生在密码子的第2、2、3、1、3、2、3位碱基上,引起多肽链氨基酸的错义突变。经氨基酸序列比对,同Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168编码的TasA蛋白(NP_390342.1)在第150位和第209位上的氨基酸发生变化,由苏氨酸、天冬酰胺分别代替丙氨酸和谷氨酸。
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关键词
枯草芽孢杆菌HAS
黑穗病菌
抗菌蛋白
tasa基因
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职称材料
短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因克隆及功能分析
被引量:
6
2
作者
刘通
陈云鹏
+1 位作者
李琼洁
顾振芳
《上海交通大学学报(农业科学版)》
2014年第5期48-52,56,共6页
为了研究短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的抑菌相关基因的功能,采用PCR方法从DX01基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建原核表达载体pET2-TasA,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得TasA基因的融合表达蛋白...
为了研究短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的抑菌相关基因的功能,采用PCR方法从DX01基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建原核表达载体pET2-TasA,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得TasA基因的融合表达蛋白,分别利用悬滴法和平板打饼法检测融合蛋白对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)分生孢子萌发和对玉米小斑病菌及水稻稻瘟病菌菌丝体生长的抑制活性,结果表明TasA融合蛋白对这2种植物病原真菌的生长有着显著的抑制作用。TasA基因包含1个780bp的完整开放阅读框(GenBank:KC692521),编码259个氨基酸残基;该序列与B.subtilis菌株PEBS2501(GenBank::FJ713581)、B.amyloliquefaciens HF-01(GenBank:JF781312)和B.subtilis菌株BWST7003(GenBank:AP012496)同源抑菌蛋白基因序列相似性达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析检测到约32.3kDa的融合蛋白;经Ni-NTA柱纯化后的融合蛋白对供试病原菌均有显著的抑制作用。经测定发酵液的TasA融合蛋白产率为28μg/mL,短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因具有良好的抑菌效果。
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关键词
短小芽胞杆菌
tasa基因
抑菌蛋白
抑菌活性
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职称材料
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白TasA基因序列分析及蛋白质结构预测
被引量:
5
3
作者
高娃
姜威
+7 位作者
孟利强
李晶
陈靖宇
曹旭
胡基华
刘宇帅
张鹏远
张淑梅
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期313-318,共6页
本研究以解淀粉芽孢杆菌TF28为材料,采用PCR方法从基因组DNA中扩增出抗菌蛋白TasA基因,利用生物信息学方法对TasA基因序列及其编码的蛋白质结构进行分析和预测。结果表明TasA基因全长786 bp,含有一个完整的开放阅读框和一个终止密码子,...
本研究以解淀粉芽孢杆菌TF28为材料,采用PCR方法从基因组DNA中扩增出抗菌蛋白TasA基因,利用生物信息学方法对TasA基因序列及其编码的蛋白质结构进行分析和预测。结果表明TasA基因全长786 bp,含有一个完整的开放阅读框和一个终止密码子,编码261个氨基酸,经Blast比对,该基因与其它解淀粉芽孢杆菌TasA基因同源性为95%-99%,与B.amyloliquefaciens FZB42(CP 000560.1)TasA基因序列同源性最高为99%,与B.amyloliquefaciens DSM7(FN597644.1)的同源性最低为95%。预测该基因编码蛋白质分子量为28 kD,等电点为6.35,是含有信号肽和跨膜结构的亲水蛋白,蛋白结构中含有糖基化和磷酸化位点,二级结构中以琢螺旋、茁折叠和无规则卷曲为主。
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关键词
解淀粉芽孢杆菌
tasa基因
序列分析
蛋白结构预测
原文传递
芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达
被引量:
6
4
作者
龙贤梨
王中康
+1 位作者
陈玉龙
殷幼平
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期438-442,共5页
为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白...
为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框(GenBank登录号为JQ309841),编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。
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关键词
芽胞杆菌CQBS03
柑桔溃疡病菌
tasa基因
抑菌蛋白
基因
克隆
原文传递
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达
被引量:
2
5
作者
张淑梅
姜威
+5 位作者
孟利强
刘宇帅
曹旭
胡基华
李晶
高娃
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期130-135,共6页
[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑...
[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑菌活性。[结果]从解淀粉芽孢杆菌TF28中克隆了抗菌蛋白基因Tas A,以p ET22b为表达载体构建高效表达抗菌蛋白Tas A的基因工程菌株,该菌株在0.05 mmol/L IPTG 15℃诱导4 h,Tas A蛋白表达率为34.2%,经His柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带的纯化Tas A蛋白,其含量为67.8 mg/L,收率为90.8%。该蛋白抑制番茄灰霉病和叶霉病、玉米茎基腐病和水稻稻曲病菌生长。[结论]实现抗菌蛋白基因Tas A的原核表达,表达率34.2%,表达蛋白具有广谱抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。
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关键词
BACILLUS
amyloliquefaciens
TF28
抗菌蛋白
基因
tasa
表达纯化
抑菌活性
原文传递
题名
枯草芽孢杆菌HAS中TasA基因的克隆与分析
被引量:
3
1
作者
熊国如
赵更峰
蔡文伟
伍苏然
杨本鹏
张树珍
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所/甘蔗研究中心
海南医学院理学院
出处
《贵州农业科学》
CAS
2016年第12期53-57,共5页
基金
国家自然科学基金(面上项目)"甘蔗黑穗病拮抗菌株HAS抑菌机理研究"(31471555)
海南省自然科学基金项目"甘蔗黑穗病拮抗菌株HAS防病机制研究"(314120)
现代农业产业技术体系建设专项资金甘蔗植保岗位科学家经费(nycytx-24)
文摘
为弄清枯草芽孢杆菌HAS对甘蔗黑穗病菌的抑制作用机理,选取可对多种植物病原真菌有抑制作用的抗菌蛋白TasA基因进行克隆与分析。结果表明:在HAS菌株中含有TasA基因,克隆编码抗菌蛋白TasA的基因全长,序列分析其有786个碱基组成,该序列与GenBank上登录的TasA(AJ871386.1)序列同源性达99%,推测蛋白分子量大小大约28KD,其中第104、164、169、250、399、623、627位等7个碱基发生碱基转换或颠换,而且这些变异分别发生在密码子的第2、2、3、1、3、2、3位碱基上,引起多肽链氨基酸的错义突变。经氨基酸序列比对,同Bacillus subtilis subsp.subtilis str.168编码的TasA蛋白(NP_390342.1)在第150位和第209位上的氨基酸发生变化,由苏氨酸、天冬酰胺分别代替丙氨酸和谷氨酸。
关键词
枯草芽孢杆菌HAS
黑穗病菌
抗菌蛋白
tasa基因
Keywords
Bacillus subtilis HAS
Sporisorium scitaminea Syd.
antifungal protein
tasa
分类号
S432.23 [农业科学—植物病理学]
下载PDF
职称材料
题名
短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因克隆及功能分析
被引量:
6
2
作者
刘通
陈云鹏
李琼洁
顾振芳
机构
上海交通大学农业与生物学院
出处
《上海交通大学学报(农业科学版)》
2014年第5期48-52,56,共6页
基金
国家自然科学基金面上项目(31071721)
文摘
为了研究短小芽胞杆菌Bacillus pumilus DX01菌株的抑菌相关基因的功能,采用PCR方法从DX01基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建原核表达载体pET2-TasA,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达获得TasA基因的融合表达蛋白,分别利用悬滴法和平板打饼法检测融合蛋白对玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)分生孢子萌发和对玉米小斑病菌及水稻稻瘟病菌菌丝体生长的抑制活性,结果表明TasA融合蛋白对这2种植物病原真菌的生长有着显著的抑制作用。TasA基因包含1个780bp的完整开放阅读框(GenBank:KC692521),编码259个氨基酸残基;该序列与B.subtilis菌株PEBS2501(GenBank::FJ713581)、B.amyloliquefaciens HF-01(GenBank:JF781312)和B.subtilis菌株BWST7003(GenBank:AP012496)同源抑菌蛋白基因序列相似性达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析检测到约32.3kDa的融合蛋白;经Ni-NTA柱纯化后的融合蛋白对供试病原菌均有显著的抑制作用。经测定发酵液的TasA融合蛋白产率为28μg/mL,短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因具有良好的抑菌效果。
关键词
短小芽胞杆菌
tasa基因
抑菌蛋白
抑菌活性
Keywords
Bacillus pumilus
tasa
gene
antimicrobial protein
antimicrobial activity
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
下载PDF
职称材料
题名
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白TasA基因序列分析及蛋白质结构预测
被引量:
5
3
作者
高娃
姜威
孟利强
李晶
陈靖宇
曹旭
胡基华
刘宇帅
张鹏远
张淑梅
机构
黑龙江省科学院微生物研究所
黑龙江省科学院高技术研究院
东北农业大学资环学院
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期313-318,共6页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(31301780)
黑龙江省科学院学科专项和学科团队项目(2014sw09)共同资助
文摘
本研究以解淀粉芽孢杆菌TF28为材料,采用PCR方法从基因组DNA中扩增出抗菌蛋白TasA基因,利用生物信息学方法对TasA基因序列及其编码的蛋白质结构进行分析和预测。结果表明TasA基因全长786 bp,含有一个完整的开放阅读框和一个终止密码子,编码261个氨基酸,经Blast比对,该基因与其它解淀粉芽孢杆菌TasA基因同源性为95%-99%,与B.amyloliquefaciens FZB42(CP 000560.1)TasA基因序列同源性最高为99%,与B.amyloliquefaciens DSM7(FN597644.1)的同源性最低为95%。预测该基因编码蛋白质分子量为28 kD,等电点为6.35,是含有信号肽和跨膜结构的亲水蛋白,蛋白结构中含有糖基化和磷酸化位点,二级结构中以琢螺旋、茁折叠和无规则卷曲为主。
关键词
解淀粉芽孢杆菌
tasa基因
序列分析
蛋白结构预测
Keywords
Bacillus amyloliquefaciens
Tas A gene
Sequence analysis
Protein structure prediction
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达
被引量:
6
4
作者
龙贤梨
王中康
陈玉龙
殷幼平
机构
重庆大学生物工程学院重庆市杀虫真菌生物农药工程技术中心重庆市基因功能与调控重点实验室
出处
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第5期438-442,共5页
基金
公益性行业(农业)科研专项(201003067-02-5)
农业部专项(农财发【2009】137号)
文摘
为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框(GenBank登录号为JQ309841),编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。
关键词
芽胞杆菌CQBS03
柑桔溃疡病菌
tasa基因
抑菌蛋白
基因
克隆
Keywords
Bacillus CQBS03
Xanthomonas citri cirri
tasa
gene
antagonistic protein
gene cloning
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
原文传递
题名
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达
被引量:
2
5
作者
张淑梅
姜威
孟利强
刘宇帅
曹旭
胡基华
李晶
高娃
机构
黑龙江省科学院微生物研究所
黑龙江省科学院高技术研究院
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期130-135,共6页
基金
黑龙江省科学院学科专项(“生防芽孢杆菌抗菌蛋白基因TasA的克隆与表达”,No.YXK14ZSM15)
黑龙江省科学院学科团队创新能力提升专项(“芽孢杆菌抗菌蛋白相关基因克隆与表达”,No.2014sw09)
文摘
[目的]克隆解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因Tas A并进行原核表达和抑菌活性研究。[方法]采用PCR方法扩增抗菌蛋白基因Tas A,连接p ET22b载体,导入E.coli BL21(DE3)菌株,进行IPTG低温诱导表达,用His柱纯化表达产物,采用纸片方法测定其抑菌活性。[结果]从解淀粉芽孢杆菌TF28中克隆了抗菌蛋白基因Tas A,以p ET22b为表达载体构建高效表达抗菌蛋白Tas A的基因工程菌株,该菌株在0.05 mmol/L IPTG 15℃诱导4 h,Tas A蛋白表达率为34.2%,经His柱纯化后获得SDS-PAGE电泳一条带的纯化Tas A蛋白,其含量为67.8 mg/L,收率为90.8%。该蛋白抑制番茄灰霉病和叶霉病、玉米茎基腐病和水稻稻曲病菌生长。[结论]实现抗菌蛋白基因Tas A的原核表达,表达率34.2%,表达蛋白具有广谱抑菌活性,在植病生防方面具有应用潜力。
关键词
BACILLUS
amyloliquefaciens
TF28
抗菌蛋白
基因
tasa
表达纯化
抑菌活性
Keywords
Bacillus amyloliquefaciens TF28
antifungal protein
tasa
expression and purification
antifungal activity
分类号
S476 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
Q786 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
枯草芽孢杆菌HAS中TasA基因的克隆与分析
熊国如
赵更峰
蔡文伟
伍苏然
杨本鹏
张树珍
《贵州农业科学》
CAS
2016
3
下载PDF
职称材料
2
短小芽胞杆菌抑菌蛋白TasA基因克隆及功能分析
刘通
陈云鹏
李琼洁
顾振芳
《上海交通大学学报(农业科学版)》
2014
6
下载PDF
职称材料
3
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白TasA基因序列分析及蛋白质结构预测
高娃
姜威
孟利强
李晶
陈靖宇
曹旭
胡基华
刘宇帅
张鹏远
张淑梅
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2015
5
原文传递
4
芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达
龙贤梨
王中康
陈玉龙
殷幼平
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
6
原文传递
5
解淀粉芽孢杆菌TF28抗菌蛋白基因TasA克隆与表达
张淑梅
姜威
孟利强
刘宇帅
曹旭
胡基华
李晶
高娃
《生物技术》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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