穿膜肽Tat以脂筏介导的巨胞饮方式进入骨髓间充质干细胞

艾滋病病毒的一个富含精氨酸的Tat多肽具有穿膜转导蛋白功能并能介导多种外源性物质进入细胞甚至细胞核.本研究的目的是探讨Tat多肽进入骨髓间充质干细胞的机制.将FITC标记的Tat分别和Alexa Fluor 546-标记的转铁蛋白(笼形蛋白介导的受体内吞方式入胞)、Alexa Fluor 594-标记的霍乱毒素B(脂筏介导的巨胞饮内化方式入胞)同兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)共孵育.用激光共聚焦扫描显微镜可观察到在BMSCs中穿膜肽Tat和霍乱毒素B呈点状叠加而与转铁蛋白几乎无叠加,同时在细胞核部位观察到有绿色荧光的Tat,初步表明穿膜肽Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs而非受体介导的内吞方式.另外,低温(4℃)、破坏ATP、β-环式糊精和诺考达唑内吞抑制剂的使用均可观察到BMSCs内吞Tat的量降低,也间接验证Tat以脂筏介导的内化方式进入BMSCs.

TAT-N24穿膜融合多肽对白血病细胞系HL60分化的影响

目的:观察TAT-N24穿膜融合多肽对急性髓系白血病细胞株HL60分化的影响。方法:TAT-N24作用于HL60细胞后,采用流式细胞术检测白血病分化指标CD11b及CD14,并观察HL60细胞经TAT-N24处理后的形态学变化,及BrdU/PI双掺入法测定DNA的合成。结果:HL60细胞在TAT-N24处理后,CD11b和CD14表达增高,且增高的趋势呈现TAT-N24浓度依赖性,同时形态学观察呈分化趋势,而且TAT-N24可以协同全反式维甲酸,增强其促进分化的作用。与此同时,BrdU/PI双掺入法显示TAT-N24使HL60细胞的增殖发生抑制。结论:TAT-N24穿膜融合多肽可促进急性髓系白血病细胞株HL60的分化,抑制其增殖,联合应用TAT-N24和全反式维甲酸具有明显的协同作用;TAT-N24有望被开发为有效的白血病分化治疗药物。

水/油/水双乳化技术制备高效性神经生长因子

背景:神经生长因子是大分子蛋白类物质,很难透过血脑屏障,基因治疗可以有效地将神经营养因子投递到脑内。目的:探索制备高效性神经生长因子基因纳米粒子的方法。方法:利用水/油/水(W/O/W)双乳化技术制备神经生长因子基因纳米粒子,用壳聚糖对其进行表面修饰,同时偶联Tat多肽。切断穹隆-海马伞诱使基底前脑胆碱能神经元溃变。16只SD雄性大鼠随机数字表均分成损伤组和基底前脑显微注射神经生长因子基因的纳米粒子组。结果与结论:制备的纳米粒子粒径分布为110～150nm。壳聚糖可明显提高其表面正电荷和包封率,但对其粒径大小影响不大。偶联Tat多肽则明显提高其转染效率。说明利用水/油/水技术可以成功制备神经生长因子基因纳米粒子。该粒子移植后对基底前脑有明显的保护作用。