蓝萼甲素对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤模型HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨蓝萼甲素(GLA)对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用以及与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的关系。方法:体外培养H9c2心肌细胞并构建H9c2细胞H/R损伤模型,实验分为6组:对照组(正常培养)、模型组(构建H/R细胞模型)、GLA-L组(细胞中加入5μmol/L的GLA后构建H/R细胞模型)、GLA-M组(细胞中加入10μmol/L的GLA后构建H/R细胞模型)、GLA-H组(细胞中加入20μmol/L的GLA后构建H/R细胞模型)、GLA-H+甘草素组(细胞中加入20μmol/L的GLA和100μg/mL的HMGB1/TLR4/NF-κB通路抑制剂甘草素后构建H/R细胞模型)。CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;试剂盒测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HMGB1、TLR4、NF-κB p65 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测HMGB1、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组H9c2细胞存活率和SOD含量明显降低,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量及HMGB1、TLR4表达与NF-κB p65磷酸化水平均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,GLA-L组、GLA-M组、GLA-H组H9c2细胞存活率和SOD含量明显升高,细胞凋亡率、LDH、ROS、MDA、TNF-α、IL-6含量及HMGB1、TLR4表达与NF-κB p65磷酸化水平明显降低,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。与GLA-H组相比,GLA-H+甘草素组H9c2细胞HMGB1、TLR4表达与NF-κB p65磷酸化水平、细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α、IL-6含量均进一步下降,细胞存活率和SOD含量进一步上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:GLA可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,降低细胞凋亡率,减少炎性因子表达,进而保护H9c2细胞免受H/R诱导损伤。

生物钟基因Bmal1对高糖高脂H9C2细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制探讨

目的:探讨生物钟基因Bmal1对高糖高脂H9C2细胞缺氧/复氧损伤的影响及分子机制。方法:采用随机数字表法将36个H9C2细胞分为低糖+常氧组(LG+N组)、低糖+缺氧/复氧组(LG+H/R组)、高糖高脂+常氧组(HG/HP+N组)、高糖高脂+缺氧/复氧组(HG/HP+H/R组)、高糖高脂+缺氧/复氧+Bmal1过表达组(HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组)、高糖高脂+缺氧/复氧+Bmal1过表达+PI3K抑制剂Wortmannin组(HG/HP+H/R+Ad-Bmal1+Wort组),每组6个。比较各组H9C2细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、细胞凋亡率、细胞存活率,Bmal1、磷酸化AKT蛋白/AKT蛋白(p-Akt/Akt)、Bax的表达水平。结果:LG+H/R组、HG/HP+N组的Bmal1表达量低于LG+N组,细胞损伤程度高于LG+N组,差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R组Bmal1表达量低于LG+H/R组,细胞损伤程度高于LG+H/R组,差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组细胞损伤程度低于HG/HP+H/R组,差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R+Ad-Bmal1+Wort组细胞损伤程度高于HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组,差异有统计学意义(P<0.05)。HG/HP+H/R组p-Akt/Akt、Bax表达量高于HG/HP+N组,Bmal1表达量低于HG/HP+N组,差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组Bax表达量低于HG/HP+H/R组,Bmal1和p-Akt/Akt表达量高于HG/HP+H/R组,差异有统计学意义(P<0.05);HG/HP+H/R+Ad-Bmal1+Wort组Bax表达量高于HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组,p-Akt/Akt表达量低于HG/HP+H/R+Ad-Bmal1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高糖高脂可降低心肌细胞中生物钟基因Bmal1的表达水平,Bmal1通过激活PI3K/Akt信号通路减少细胞凋亡,从而起到保护高糖高脂H9C2细胞缺氧/复氧损伤的作用。

丹酚酸A激活AKT/mTOR/4EBP1通路缓解脂多糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激

目的探究丹酚酸A(Sal A)对脂多糖(LPS)诱导的氧化应激性损伤H9c2心肌细胞增殖、凋亡,以及蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/起始因子4E结合蛋白(4EBP1)通路相关蛋白表达的影响。方法用LPS诱导制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,分别用含Sal A 5,10和20 mg·L^-1的DMEM培养基培养细胞24 h,加LPS 1 mg·L^-1继续孵育24 h。用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色观察H9c2心肌细胞存活;采用流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡和线粒体膜电位;用试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、存活蛋白、Bax/Bcl-2,AKT、磷酸化AKT(p-AKT)、mTOR、p-mTOR、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,模型组EdU红色标记的细胞减少(P<0.05);与模型组比较,Sal A 5,10和20 mg·L^-1处理组EdU红色标记的细胞增多(P<0.05)。Sal A能降低培养液中LDH活性及细胞内MDA和GSH含量,增加胞内SOD活性(P<0.05),减少心肌细胞的凋亡率(P<0.05),降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度(P<0.05)。Sal A 10和20 mg·L^-1处理后,活化胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶9和Bax/Bcl-2蛋白水平显著下调(P<0.05),存活蛋白水平显著上调(P<0.05);与细胞对照组比较,模型组AKT/mTOR/4EBP1磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,Sal A 10和20 mg·L^-1组AKT和mTOR磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。结论Sal A通过激活AKT/mTOR/4EBP1通路、减少心肌细胞凋亡并降低心肌细胞线粒体膜电位的下降速度,减缓了LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡和氧化应激,表明Sal A对LPS造成的氧化应激损伤心肌细胞具有保护作用。

银杏内酯B对CYP2C9底物双氯芬酸在大鼠体内药动学和药效学的影响

目的:在大鼠体内,以双氯芬酸为工具药,研究银杏内酯B对双氯芬酸药动学和药效学的影响,阐明银杏内酯B对大鼠肝细胞色素P450 2C9(CYP 2C9)是否有抑制或诱导作用。方法:通过观察大鼠连续给予银杏内酯B(剂量为12 mg·kg^(-1),ip,bid,连续7 d)前后对单次给予临床等效量的双氯芬酸(15 mg·kg^(-1),iv)的药时曲线及药动学参数的改变,评价其对双氯芬酸药动学的影响,并评价银杏内酯B连续给药后对单次给予双氯芬酸抗足跖肿胀作用药效学的影响。结果:连续给予银杏内酯B后,与用药前比较,双氯芬酸及其主要代谢物4-羟基双氯芬酸的血药浓度及其药动学参数未见显著性改变;双氯芬酸抗足跖肿胀作用亦未见显著性改变。结论:多剂量给予银杏内酯B对临床等效量双氯芬酸在大鼠体内药动学和药效学无显著影响;银杏内酯B对大鼠肝CYP 2C9无明显的抑制或诱导作用。

SLO1B1和CYP2C9联合突变对那格列奈降血糖效果的影响

目的：研究SL0181521T〉C变异以及SL0181521T〉C和CYP2C9}3的联合突变对口服降糖药那格列奈的降血糖效果的影响。方法：对48名健康志愿者（12例SLC0181521TT／CYP2C9＊1基因型，14例SLC0181521TT／CYP2C9＊3基因型．12例SLC0181521TC／CC／CYP2C9＊1基因型．10例SLC0181521TC／CYP2C9＊3基因型）单次口服120mg那格列奈，分别在给药前和给药后0．25、0．5、O，75、1、1．5、2、3、4、6、8h采血．用自动生化分析仪进行血糖浓度分析。结果：单一的SL0181521T〉C多态和CYP2C9{3多态对于那格列奈的降血糖效果与野生型对照组比较差异无显著性。联合突变组在最大血糖升高值，0～4h和0．8h的血糖浓度平均变化值与野生型组比较差异无显著性，但是在最大血糖降低值与野生型对照组和SL0181521T〉C突变组比较差异有显著性意义（P=0．027，P=0．048）。结论：在健康受试者，单一及联合的SL0181和CYP2C9多态性对那格列奈降血糖效果没有显著影响：但是在2型糖尿病患者中，有关影响需要进一步的研究。

mAb2G4/ODN/lip在H9C2心肌细胞缺氧复氧模型中的保护作用

目的探讨抗肌球蛋白单克隆抗体2G4/寡核苷酸/阳离子脂质体复合物(mAb2G4/ODN/lip)在H9C2心肌细胞缺氧复氧模型中的作用及机制。方法将培养的心肌细胞按随机数字表法分为五组:正常对照组(C组)、单纯缺氧-复氧组(IR组)、mAb2G4/ODN/lip 2μg处理组(L组)、mAb2G4/ODN/lip 4μg处理组(M组)和mAb2G4/ODN/lip 6μg处理组(H组)。C组不作任何处理;IR组细胞孔加入生理盐水;其余三组加入不同剂量mAb2G4/ODN/lip处理细胞4h,更换普通培养基继续培养20h。各实验组再进行缺氧2h复氧1h处理。MTT法测五组心肌细胞活力;ELISA法测TNF-α、IL-6、IL-8、AST、CK及SOD的浓度。结果与C组比较,其余四组细胞活力明显下降,TNF-α、IL-6、IL-8、AST、CK浓度明显升高,SOD浓度明显降低(P<0.01);与IR组比较,L组和M组细胞活力明显上升,TNF-α、IL-6、IL-8、SOD浓度明显升高,AST、CK浓度明显降低(P<0.01)。与L组比较,M组和H组TNF-α、IL-6、IL-8和SOD浓度明显升高,AST、CK浓度明显降低(P<0.01)。结论 mAb2G4/ODN/lip 2μg、4μg处理能够通过特异性的结合受损心肌细胞,抑制炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达,降低AST、CK表达,升高SOD浓度,对缺氧复氧心肌细胞起到保护作用。

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P<0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P<0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01),Bax mRNA表达显著下调(P<0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P<0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法将对数生长期的H9c2心肌细胞随机分为5组:空白对照组、H_2O_2干预组、GB(50、100和200μmol/L)干预组。检测细胞存活率、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)含量、细胞中氧自由基(ROS)含量和抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量;检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,检测NF-k B蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高;培养液中AST、CPK、LDH含量和细胞中ROS、MDA含量显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,NF-k B蛋白表达显著下调;其中GB(200μmol/L)干预组GSH-Px活性显著降低。结论 GB能够有效提高细胞存活率,改善抗氧化酶活性、降低ROS含量、降低氧化应激损伤,下调NF-k B蛋白表达、降低细胞凋亡率,提示GB对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞氧化应激具有抑制作用。

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤保护作用研究

目的研究银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为4组:空白对照、H_2O_2(200μmol/L)干预、GB(100μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预、GB(200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预,每组设10个复孔。经药物干预16h后观察各组细胞形态,采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;测定细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;酶联免疫法(ELISA)测定培养液中炎性因子(CRP、TNF-α、IL-1、IL-6)含量水平;采用流氏细胞术检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测细胞中bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞中NF-κB蛋白表达并进行半定量分析。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞培养液中AST、CPK活性和TNF-α、IL-6、CRP、MDA含量均显著降低,SOD、CAT活性显著升高,细胞凋亡率显著降低;bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax表达比值显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);其中GB(200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞生存状态明显改善、存活率显著升高,LDH活性、IL-1含量以及NF-κB蛋白表达量显著降低,细胞中GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞具有保护作用,作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,上调抑凋亡基因bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高bcl-2/Bax表达比值,下调NF-κB蛋白表达,降低炎性因子含量相关。

H9c2细胞对B组柯萨奇病毒3型重组株的易感性

H9c2细胞是来源于大鼠胚胎心脏组织的成肌细胞系,B组柯萨奇病毒(group B Coxsackievirus,CVB)是心肌炎和扩张型心肌病的主要病原。本研究观察了CVB3在H9c2细胞中的感染性,探讨H9c2细胞是否可用于CVB致心肌疾病的实验研究。用整合了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或海肾荧光素酶(RLuc)的CVB3重组株EGFP-CVB3、RLuc-CVB3攻击H9c2细胞及大、小鼠原代心肌细胞和骨骼肌细胞,应用荧光显微镜、流式细胞术和化学发光技术观察感染细胞的EGFP和RLuc表达,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测病毒在核酸水平的表达。结果显示,在病毒攻击的H9c2细胞未检测到EGFP和RLuc表达;RT-PCR显示在CVB3感染9 d后检测不到CVB3 RNA;CVB3毒株可感染小鼠心肌细胞、骨骼肌细胞和大鼠心肌细胞,但不感染大鼠骨骼肌细胞和H9c2细胞。本研究结果表明,H9c2细胞不是CVB3易感细胞,不能用于CVB3致心肌疾病的研究;该结果从病毒感染方面也支持H9c2具有大鼠骨骼肌细胞表型。

黄精多糖通过TLR4-MyD88-NF-κB通路抑制缺氧/复氧H9c2心肌细胞炎性因子释放

目的探讨黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)诱导H9c2心肌细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)-髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)-核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的调节作用。方法体外培养H9c2心肌细胞并随机分组:正常对照组(C组)、模型组(H/R组)、黄精多糖组(PSP组)、TLR4抑制剂(TAK-242组)和PSP+TAK-242组。C组细胞用正常培养液常规培养27 h;H/R组细胞进行缺氧21 h/复氧6 h处理;TAK-242组、PSP组和PSP+TAK-242组的细胞在缺氧培养21 h前分别加入含TAK-242、PSP和PSP+TAK-242的培养基培养12 h,在常规条件下复氧6 h。PSP和TAK-242的终浓度分别是1.5 g·L^(-1)和1μmol·L^(-1)。处理结束后,采用MTT法检测细胞活力,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白介素(interleukin,IL)-1β含量,Western blot检测NF-κB和inhibitorκBα(IκBα)的蛋白表达,荧光定量PCR法检测H9c2心肌细胞中TLR4、MyD88的mRNA表达。结果与H/R组比较,PSP组、TAK-242组和PSP+TAK-242组均能明显提高H/R损伤后心肌细胞的存活率,减轻其炎性因子渗出,明显下调NF-κB的表达,抑制H/R诱导的IκBα蛋白的降解,降低TLR4和MyD88基因的表达。结论 PSP保护H9c2心肌细胞H/R损伤的机制可能与抑制TLR4-MyD88-NF-κB信号通路有关。

柯萨奇病毒B3调控CAPN总体活性促进H9c2细胞凋亡的机制

目的探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)调控进H9c2细胞凋亡的潜在机制。方法 CVB3感染大鼠心肌细胞H9c2后,通过Annexin-PI染色和流式细胞仪检测H9c2的凋亡水平。抽取感染CVB3和未感染的H9c2细胞的总RNA后进行高通量测序。使用siRNA敲低测序结果中差异较大的基因,并检测H9c2细胞的凋亡水平。结果CVB3感染大鼠心肌细胞H9c2后,细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。高通量测序发现感染CVB3和未感染的H9c2细胞表达差异大于5倍的基因有40个。siRNA敲低这些基因后,发现当敲低CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10时,H9c2细胞凋亡水平下降(P<0.05)。感染CVB3后,H9c2细胞中CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10的蛋白水平上升。感染CVB3后12 h、24 h、48 h H9c2细胞中总体Calpain活性上升(P<0.05)。感染CVB3的同时使用Calpain抑制剂Z-LLY-FMK处理,Calpain总体活性和H9c2细胞凋亡水平无显著变化(P>0.05)。结论 CVB3通过上调CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10的表达水平提高了Calpain的总体活性来诱导大鼠心肌细胞H9c2凋亡。

miR-19b对H_2O_2诱导的大鼠心肌细胞H9c2氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的研究microRNA(miR)-19b是否在H2O2诱导的心肌细胞的氧化应激损伤中具有保护作用。方法将大鼠H9c2心肌细胞株分为6组,空白对照组(L1),H2O2组(L2),H2O2+miR-19b mimic阴性对照(NC)组(L3),H2O2+miR-19b mimic组(L4),H2O2+miR-19b inhibitor组(L5),H2O2+miR-19b inhibitor NC组(L6)。NC组细胞转染随机合成的miRNA片段作为阴性对照。采用CCK8和流式细胞术检测细胞活性和凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测miR-19b的表达量,并利用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot法检测核因子相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)表达水平。结果与L1组比较,L2组和L3组中miR-19b表达量、H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著增加(P<0.01)。与L2组及L3组比较,L4组中miR-19b表达量、H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著增加(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平均显著降低(P<0.01),L5组中miR-19b表达量和H9c2细胞活性和细胞内SOD、GSH水平、Nrf2和HO-1表达水平均显著降低(P<0.01),细胞凋亡率和细胞内LDH、MDA水平均显著增加(P<0.01),L6组miR-19b表达量、H9c2细胞活性、细胞凋亡率、细胞内SOD、GSH、LDH、MDA水平以及Nrf2和HO-1表达水平均未见统计学差异(P>0.05)。结论miR-19b高表达可显著抑制H9c2细胞的氧化应激损伤,发挥心肌细胞保护作用。

原花青素B2通过抑制NLRP3活性减轻过氧化氢对H9c2细胞的损伤

目的研究原花青素B2(procyanidin B2,PCB2)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2心肌细胞损伤的作用和机制。方法将H9c2细胞分为5组,分别是对照(control)组,H2O2组,H2O2+PCB2(5 mg·kg^-1)组,H2O2+PCB2(15 mg·kg^-1)和H 2O 2+PCB2(45 mg·kg^-1)组。测定细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β和IL-18蛋白表达。测定细胞活性氧(ROS)含量,丙二醛(MDA)含量,乳酸脱氢酶(LDH)、总抗氧化酶(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果与Control组相比,H2O2组H9c2细胞活力下降,LDH释放增加。与H2O2组相比,PCB2能够增加细胞活力和降低LDH释放,且作用具有剂量依赖性。PCB2还能够剂量依赖性地下调H2O2作用后细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达水平,减少MDA和ROS含量,增加T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px活性。结论PCB2能够减轻H2O2引起的H9c2细胞损伤,该作用与其抑制氧化应激介导的NLRP3活化有关。

姜黄素对H2O2致H9c2心肌细胞损伤的抗凋亡作用及对NF-κB信号通路的调节作用研究

目的:探讨姜黄素对H2O2致H9c2心肌细胞损伤的抗凋亡作用及对核因子κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法:将大鼠H9c2心肌细胞随机分为正常对照组、损伤模型组和姜黄素低、中、高剂量组(25、50、100μmol/L)。正常对照组不作任何干预;损伤模型组细胞以50μmol/L H2O2诱导12 h以建立损伤模型;姜黄素各剂量组经相应浓度药物预处理24 h后,再以50μmol/L H2O2诱导12 h。继续培养24 h后,采用MTT法和TUNEL法分别检测细胞的存活率和凋亡率;采用WTS-8法和显色法分别检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用免疫荧光法检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)阳性表达的相对荧光强度;采用实时定量聚合酶链式反应法检测细胞中NF-κB p65 mRNA的表达水平;采用Western blotting法检测细胞中NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达水平。结果:与正常对照组比较,损伤模型组细胞的存活率和SOD活性均显著降低,细胞凋亡率、MDA含量、LC3阳性表达相对荧光强度以及NF-κB p65 mRNA和NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平以及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P<0.05)。与损伤模型组比较,姜黄素各剂量组细胞存活率和SOD活性均显著升高,细胞凋亡率、MDA含量、LC3阳性表达相对荧光强度以及NF-κB p65 mRNA和NF-κB/p65、p-NF-κB p65蛋白的表达水平以及p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显著降低(P<0.05)。结论:姜黄素能够提高H2O2致损伤H9c2心肌细胞的存活率、降低其凋亡率,提高心肌细胞中SOD活性并降低MDA含量;上述作用可能与调节心肌细胞NF-κB信号通路有关。

LEF1介导的microRNA-26b抑制H9C2心肌细胞肥大机制研究

目的:探讨microRNA-26b(miR-26b)调控H9C2心肌细胞肥大的作用靶基因及其分子机制。方法:传代培养H9C2心肌细胞,分别转染miR-26b模拟物(miR-26b mimic)和淋巴样增强因子1(LEF1)siRNA(si-LEF1),以增加H9C2心肌细胞中miR-26b水平或抑制LEF1的表达水平。采用FITC-鬼笔环肽染色检测H9C2心肌细胞表面积,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-26b与潜在靶基因LEF13′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-26b、LEF1及心肌细胞肥大相关基因表达。结果:过表达miR-26b可明显增加H9C2心肌细胞中肥厚相关基因ANP,β-MHC的表达水平,缩小H9C2心肌细胞表面积;双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-26b与LEF13′UTR具有相互结合作用,miR-26b在转录水平抑制LEF1的表达;miR-26b mimic和si-LEF1均能抑制H9C2心肌细胞肥大基因的表达。结论:LEF1是miR-26b的作用靶基因,LEF1参与miR-26b抑制H9C2心肌细胞肥大的作用。

花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨花旗松素通过抑制核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9c2细胞分为A组、B组、C组、D组、E组,A组于37℃、5%CO2恒温箱中培养30 h;B组缺氧(O2浓度<6%的厌氧培养箱)培养24 h,再复氧(37℃、5%CO2恒温箱)培养6 h;C组加入1μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h;D组加入10μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h;E组加入100μmol/L花旗松素,缺氧培养24 h,复氧培养6 h。比较各组H9c2细胞形态学变化、存活率、凋亡率、NF-κB蛋白表达量、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果HE染色显示,A组细胞形态结构正常,B组H9c2细胞形态结构异常,横纹模糊,可见大量点状坏死灶,间质水肿明显,炎性细胞浸润明显;C、D、E组H9c2细胞病理改变较B组显著改善,随着花旗松素剂量增大,H9c2细胞病理改善越明显。B组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较A组明显下降(P<0.05);C、D、E组H9c2细胞存活率、IκB-α蛋白表达量较B组明显升高(P<0.05),呈剂量依赖性。B组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较A组明显升高(P<0.05);C、D、E组H9c2细胞凋亡率、NF-κB蛋白表达量较B组明显下降(P<0.05),呈剂量依赖性。结论花旗松素通过抑制NF-κB信号通路对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤起到保护作用,并这种作用呈剂量依赖性,这可为心肌缺血再灌注损伤的防治提供新的方向。

microRNA-26b靶向CDK6抑制H9C2心肌细胞肥大

目的已证实microRNA-26b(miR-26b)参与心肌肥厚的过程,然而其潜在分子机制仍有待研究,本文旨在研究microRNA-26b(miR-26b)调控H9C2心肌细胞肥大的作用的分子机制。方法FITC-鬼笔环肽染色检测H9C2心肌细胞面积;双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-26b与细胞周期素依赖性激酶6(Cyclin-dependent kinase 6,CDK6)3′UTR的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-26b和肥大标志基因ANP及β-MHC的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测相关肥大标志基因ANP及β-MHC的蛋白表达。结果过表达miR-26b可有效抑制H9C2心肌细胞的肥大表型;CDK6被证实是miR-26b作用的靶基因,miR-26b可抑制CDK6的蛋白表达;miR-26b及si-CDK6均能抑制H9C2心肌细胞的肥大标志基因ANP及β-MHC的mRNA及蛋白表达。结论CDK6是miR-26b的作用靶基因,CDK6参与miR-26b抑制H9C2心肌细胞肥大的作用。

白藜芦醇对脂多糖诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究白藜芦醇(RSV)对脂多糖(LPS)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及其机制。方法用LPS 10μg/m L处理大鼠H9c2心肌细胞0、5、10、20、30、60 min,评估LPS在不同时间点对H9c2细胞核因子κB抑制蛋白(IκBα)、p-p65、p65和β-肌动蛋白(β-actin)表达的诱导作用;用不同浓度RSV预处理H9c2细胞后再用LPS刺激,观察RSV对LPS诱导的H9c2细胞损伤的影响。MTT法检测H9c2细胞增殖能力;荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blotting检测IκBα、p-p65、p65和β-actin的表达。结果 LPS抑制H9c2细胞增殖,使细胞内ROS产生量明显增加;LPS使IκBα表达水平显著降低,使p65磷酸化水平显著升高。RSV预处理能明显降低LPS对H9c2细胞的损伤,使细胞内ROS产生明显减少;RSV可上调IκBα表达,下调p-p65的表达。结论 RSV可能通过下调p-p65及上调IκBα抑制LPS诱导的H9c2细胞损伤。

LM-2C Used in SJ-9A/B Mission

At 11:25 a.m. on October 14, China successfully sent the SJ-9A/B satellites into their preset transfer orbits with one LM-2C launch vehicle from the Taiyuan Satellite Launch Center. The LM-2C launch vehicle used for the mission was manufactured by China Academy of Launch Vehicle Technology (CALT) of China Aerospace Science and Technology Corporation (CASC). The launch marked the 169th launch of the Long March series launch vehicle. The launch vehicle used for the mission differs not much