嘌呤霉素敏感的氨肽酶对Tau^(P301L)诱导细胞凋亡的影响

目的探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶(PSA)对TauP301L诱导的细胞凋亡的影响。方法将TauP301L表达载体转入SH-SY5Y和PC12细胞24、48和72 h后,采用MTT法检测两种细胞增殖率的变化,Hoechst33342染色检测细胞核形态学的变化,确定TauP301L的最佳作用时间;在PC12细胞中转染TauP301L和PSA载体,在SH-SY5Y细胞中转染TauP301L和PSA-siRNA载体,Western blotting法检测Caspase-3的表达,酶标仪检测Caspase-3的活性变化,流式细胞法检测细胞凋亡率。结果 TauP301L诱导细胞凋亡具有时间依赖性。TauP301L转染细胞48 h后,PC12细胞、SH-SY5Y细胞存活率明显下降(P<0.01),细胞核出现凋亡的形态学变化;流式检测细胞凋亡率增加(P<0.01)。在PC12细胞中,与TauP301L组相比,PSA和TauP301L共同作用组Caspase-3的活性形式表达量及酶活性明显下降(P<0.01),细胞凋亡率显著下降(P<0.01);而在SH-SY5Y细胞中,与TauP301L组相比,TauP301L和PSA-siRNA共同作用组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Caspase-3的活性形式表达量和活性均升高(P<0.01)。结论 TauP301L能够诱导细胞凋亡,而PSA能够下调TauP301L所诱导的这种凋亡,对神经细胞起到保护作用。