粤北南方红豆杉HPLC指纹图谱研究

目的:建立粤北南方红豆杉不同采收季节、不同采收部位的HPLC指纹图谱分析方法,为南方红豆杉的综合利用提供科学依据。方法:采用超临界CO2萃取技术提取南方红豆杉有效部位,按HPLC法建立指纹图谱,使用指纹谱图相似度软件进行评价分析。结果:建立了粤北南方红豆杉指纹图谱,对不同采收季节、不同采收部位的12批南方红豆杉样品提取物进行了指纹图谱分析,得出主要共有峰相对保留时间、相对峰面积作为南方红豆杉指纹图谱相关技术参数。结论:南方红豆杉指纹图谱可用于评价其药材质量。

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基组成成分进行了探讨。结果表明 ,2 ,4- D比 NAA更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适当浓度的 CA。

南方红豆杉芽愈伤组织的诱导和培养

目的 为研究南方红豆杉芽愈伤组织诱导条件、最适培养基组成成分和紫杉醇含量的积累。方法 以南方红豆杉芽为外植体 ,在 MS培养基上 ,试验不同种类、不同浓度的激素及其组合对其愈伤组织诱导的影响。结果 芽诱导的最适培养基是 MS添加 2 ,4 - D2 .0 mg/L 和 NAA0 .5 mg/L;对愈伤组织的增殖、驯化和紫杉醇含量的积累则以 B5添加 2 ,4 - D 0 .5 mg/L、NAA 1.0 m g/L和 KT 0 .5 mg/L为最佳。结论 本研究为植物组织细胞培养生产紫杉醇提供实验依据。

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞自由基清除系统酶的影响

目的 研究外加甲基茉莉酮酸对南方红豆杉 Taxus chinensis var.mairei细胞培养体系氧自由基清除系统中超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化物酶 (POD)和过氧化氢酶 (CAT)酶活的影响规律。方法 酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸能够诱导南方红豆杉细胞 SOD的活性 ;对 POD活性的诱导作用极为显著 (约为对照组的 10倍 )且POD活性在培养第 10天达到峰值 ;在甲基茉莉酮酸作用下 CAT活性先升高后降低 ,即在表现出较强的诱导作用之后又抑制了 CAT的酶活水平。结论 甲基茉莉酮酸的加入刺激细胞产生了防御应答反应 ,诱导了相关的自由基清除酶类 ,其中

南方红豆杉外植体母株来源与培养基成分对愈伤组织生长和紫杉醇的影响

目的建立和优化获得量大而高紫杉醇愈伤组织的培养技术和方法.方法以山西陵川县野生和在西安栽培的南方红豆杉为材料,就最佳母株、外植体种类、基本培养基、植物激素种类及浓度对愈伤组织诱导、生长和紫杉醇的影响等因素进行了系统研究.结果幼茎外植体因诱导的愈伤组织时间早、频率高而最佳;培养基Y5:MS+2,4-D 4.0 mg/L+KIN 1.0 mg/L或B5Ⅲ:B5+2,4-D 3.0 mg/L+KIN 0.1 mg/L+Phe 0.1 mol/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导频率高达100%.继代培养基中质量浓度2,4-D(0.5～3 mg/L)促进愈伤组织增殖;高质量浓度(8 mg/L)则有抑制作用.当2,4-D质量浓度适宜时,愈伤组织在B5培养基上较在MS培养基上褐化轻、生长快.HPLC分析表明紫杉醇最高的继代培养基为MSⅢ,其紫杉醇质量分数高达干重的0.004%;野生母株幼芽来源的愈伤组织,其紫杉醇普遍高于栽培母株幼茎来源的愈伤组织.结论以5月份野生红豆杉幼茎为外植体,以Y5或B5Ⅲ为诱导培养基和继代培养基,继代8～10代,每代培养30～35 d;用MSⅢ培养基再培养1～2代,收获愈伤组织或细胞培养物,并从中提取紫杉醇是获得大量高紫杉醇愈伤组织的较佳培养程序.

悬浮培养过程中碳、氮、磷的补加对南方红豆杉细胞生长影响的研究

目的 解决南方红豆杉生长缓慢的问题。方法 考察红豆杉细胞悬浮培养过程中磷的消耗 ,并研究了碳、氮、磷对细胞生长及细胞活性的影响。结果 碳源在悬浮培养中期已经消耗殆尽 ,后期碳源的缺乏限制了细胞的生长。结论 补加碳源组与对照组相比 ,细胞生长率和细胞密度明显提高 ,其中细胞生长率约提高了 83%。

南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件，在ＭＳ－培养基上，附加不同种类和浓度配比的激素，在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较，其中当２，４－Ｄ１．２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２． ８ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ或 ４ ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织诱导率和生长量最高，结果表明，不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响。为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础，为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径。

南方红豆杉组织培养育苗试验

以南方红豆杉(Taxes chinensisvar.mairei Cheng et L.K.Fu)的幼叶、幼嫩茎段、花蕾为外植体进行组织培养育苗试验,结果表明:①外植体诱导愈伤组织的容易程度为幼嫩茎段>幼叶>花蕾;②诱导南方红豆杉产生愈伤组织的最佳培养基配方是:MS+6-BA 0.5 mg.L-1+2,4-D 1.0 mg.L-1;③BA、ZT和KT均能诱导愈伤组织分化不定芽,其中以0.1 mg.L-1ZT效果最佳,诱导率达58%;④生根培养阶段,以附加NAA1.0 mg.L-1+0.1%活性碳的1/2 MS培养基效果最好,生根率达96%;⑤试管苗移栽在河沙+泥炭的基质上,成活率可达95%。

南方红豆杉扦插繁殖技术研究

2003～2004年应用2年生南方红豆杉幼苗进行扦插试验研究,结果表明：不同时间扦插的插穗生根时间最多相差2个月,2月中旬至3月中旬为最适宜扦插季节,扦插后3～5个月的生根率高于其它月份.用河沙与红泥作基质扦插,在不同季节扦插中以河沙作基质的生根效果比红泥的好.用生根剂处理有利于插穗提早生根及增加生根数量,以冬季及早春应用的效果较为明显,应用生根剂的插穗在扦插3～5个月后的生根率和生根数量与对照比有显著差异.不同类型插穗的扦插生根率在不同月份扦插的结果不同,但其差异不显著.

南方红豆杉树皮的化学成分研究

目的：研究生长在中国东南部的南方红豆杉树皮的化学成分.方法：采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱和HPLC制备色谱法分离、纯化化学成分,用核磁共振技术鉴定化合物结构.结果：从生长在中国东南部的南方红豆杉树皮中分离得到了12个紫杉烷二萜类化合物,分别鉴定为：紫杉吉酚（1）、decinnamoyltaxagifine（2）、19-debenzoyl-19-acetyltaxinine M（3）、9-二氢-13-乙酰基-巴卡亭Ⅲ（4）、7,9-dideacetylbaccatinⅣ（5）、1,3-二氢紫杉宁（6）、南方红豆杉醇C（7）、紫杉佐匹定J（8）、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇A（9）、10-deacetyltaxol（10）、taxicinⅡ（11）、2α,7β,10β-triacetoxy-5α,13α-dihydroxy-2（3→20）abeotaxa-4（20）,11-dien-9-one（12）.结论：其中,化合物1、2、4～6、8、9、11和12为首次从南方红豆杉中分离得到,化合物7为首次从南方红豆杉树皮中分离得到.

不同湿度贮藏条件下南方红豆杉多糖含量动态变化的研究

目的：研究研究南方红豆杉枝条在不同湿度贮藏环境下多糖的含量变化,确定南方红豆杉多糖最佳贮藏湿度环境。方法：设置了65%RH、75%RH和85%RH三个贮藏湿度,通过测量不同湿度贮藏环境下南方红豆杉总多糖的含量变化,以确定最佳湿度贮藏条件。结果：南方红豆杉总多糖含量呈先升高后又开始下降的迹象,总多糖在0~3个月中65%RH﹥75%RH﹥85%RH。结论：南方红豆杉多糖成分最佳的贮藏环境是65%RH低湿环境。

南方红豆杉果实特征研究

通过对贵州省剑河县和榕江县的南方红豆杉果实特征进行分析,结果表明:南方红豆杉果实为椭圆形至近球形,果实平均长为0.942 cm,平均宽0.849 cm,平均高0.767 cm;不同产地南方红豆杉种子大小差异不大,种子平均大小为长0.684 cm,宽0.543 cm,高0.458 cm;果实重为10.43 g/30粒,种子重为4.87 g/30粒,千粒重为128.9 g;出种率为46.65%。这为南方红豆杉的播种繁殖及资源的开发利用提供一定的基础数据。

南方红豆杉愈伤组织培养及其紫杉烷二萜类成分的分析

目的研究南方红豆杉愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长率、生长状态、褐变程度,比较愈伤组织中紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的量。方法采用单因素比较、正交试验设计,研究影响南方红豆杉愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用HPLC法测定不同来源愈伤组织中10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-DAB)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和东北红豆杉素5种紫杉烷二萜类成分的量;采用加权评分综合考虑以上各因素优选组织培养条件。结果外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以完整叶片及茎段最好;暗培养有利于紫杉醇等5种萜类成分的富集;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。结论南方红豆杉愈伤组织诱导、培养与外植体种类、培养基种类、光照有较大关联,紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的富集受植物生长调节剂种类及浓度影响显著。