南方红豆杉芽愈伤组织的诱导和培养

目的 为研究南方红豆杉芽愈伤组织诱导条件、最适培养基组成成分和紫杉醇含量的积累。方法 以南方红豆杉芽为外植体 ,在 MS培养基上 ,试验不同种类、不同浓度的激素及其组合对其愈伤组织诱导的影响。结果 芽诱导的最适培养基是 MS添加 2 ,4 - D2 .0 mg/L 和 NAA0 .5 mg/L;对愈伤组织的增殖、驯化和紫杉醇含量的积累则以 B5添加 2 ,4 - D 0 .5 mg/L、NAA 1.0 m g/L和 KT 0 .5 mg/L为最佳。结论 本研究为植物组织细胞培养生产紫杉醇提供实验依据。

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基组成成分进行了探讨。结果表明 ,2 ,4- D比 NAA更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适当浓度的 CA。

南方红豆杉化学成分的研究进展

南方红豆杉是我国的特有植物,在我国自然生长的5种红豆杉中分布最广,蕴藏量也最大,其化学成分研究在我国展开得最早,研究的时间最长也最彻底,到目前为止已经从我国南方红豆杉的根、茎、叶、皮、种子等不同部位中分离鉴定出147种化合物,包括二环紫杉烷类、各种三环紫杉烷类、松香烷类、9(10→20)重排的松香烷类和海松烷类二萜,以及木脂素类、黄酮类和酚类化合物。现总结过去20年南方红豆杉在化学成分方面的研究概况。

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞自由基清除系统酶的影响

目的 研究外加甲基茉莉酮酸对南方红豆杉 Taxus chinensis var.mairei细胞培养体系氧自由基清除系统中超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化物酶 (POD)和过氧化氢酶 (CAT)酶活的影响规律。方法 酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸能够诱导南方红豆杉细胞 SOD的活性 ;对 POD活性的诱导作用极为显著 (约为对照组的 10倍 )且POD活性在培养第 10天达到峰值 ;在甲基茉莉酮酸作用下 CAT活性先升高后降低 ,即在表现出较强的诱导作用之后又抑制了 CAT的酶活水平。结论 甲基茉莉酮酸的加入刺激细胞产生了防御应答反应 ,诱导了相关的自由基清除酶类 ,其中

不同产地南方红豆杉枝叶的紫杉醇含量及其指纹图谱的比较分析

采用HPLC法对来源于6个产地(陕西周至和汉中;甘肃天水;安徽胡乐、聂家山和仙寓山)的12份野生南方红豆杉〔Taxus chinensis var.mairei(Lemée et Lévl.)Cheng et L.K.Fu〕枝叶中的紫杉醇含量进行了比较分析,并对不同产地南方红豆杉指纹图谱的相似度进行了比较和特征指纹图谱的构建。结果表明:不同产地南方红豆杉枝叶中紫杉醇的含量有明显差异,来源于陕西和甘肃的枝叶样品中紫杉醇含量明显高于来源于安徽的样品,以产自陕西周至的枝叶样品中紫杉醇含量最高(0.019 3 mg.g-1)。各样品的指纹图谱均有12个共有峰,其中9号共有峰的保留时间(32.75 min)与紫杉醇标准品一致,被确定为南方红豆杉指纹图谱的参照峰(s)。各共有峰相对保留时间的RSD值均低于1%,但相对峰面积的RSD值均高于40%,说明各样品共有峰的保留时间稳定,但相对含量差异较大。除来源于安徽聂家山的2个样品外,其他样品的相似度值均在0.8以上,说明各样品间指纹图谱的相似度较高。根据12个样品的指纹图谱建立了南方红豆杉枝叶的特征指纹图谱,可用于南方红豆杉的鉴定及质量控制。由测定结果推测:不同产地南方红豆杉枝叶中紫杉醇含量的差异可能与生长环境的差异有关。

南方红豆杉外植体母株来源与培养基成分对愈伤组织生长和紫杉醇的影响

目的建立和优化获得量大而高紫杉醇愈伤组织的培养技术和方法.方法以山西陵川县野生和在西安栽培的南方红豆杉为材料,就最佳母株、外植体种类、基本培养基、植物激素种类及浓度对愈伤组织诱导、生长和紫杉醇的影响等因素进行了系统研究.结果幼茎外植体因诱导的愈伤组织时间早、频率高而最佳;培养基Y5:MS+2,4-D 4.0 mg/L+KIN 1.0 mg/L或B5Ⅲ:B5+2,4-D 3.0 mg/L+KIN 0.1 mg/L+Phe 0.1 mol/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导频率高达100%.继代培养基中质量浓度2,4-D(0.5～3 mg/L)促进愈伤组织增殖;高质量浓度(8 mg/L)则有抑制作用.当2,4-D质量浓度适宜时,愈伤组织在B5培养基上较在MS培养基上褐化轻、生长快.HPLC分析表明紫杉醇最高的继代培养基为MSⅢ,其紫杉醇质量分数高达干重的0.004%;野生母株幼芽来源的愈伤组织,其紫杉醇普遍高于栽培母株幼茎来源的愈伤组织.结论以5月份野生红豆杉幼茎为外植体,以Y5或B5Ⅲ为诱导培养基和继代培养基,继代8～10代,每代培养30～35 d;用MSⅢ培养基再培养1～2代,收获愈伤组织或细胞培养物,并从中提取紫杉醇是获得大量高紫杉醇愈伤组织的较佳培养程序.

南方红豆杉冠层不同部位的光合生理研究

选择3株育龄南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei Cheng et L.K.Fu)雌性植株,采用树冠分层分区域研究法,测定上、中、下层及内、中、外区域计9个小区的光合作用,分析了南方红豆杉冠层不同部位的光能分布和光合生理。结果表明,南方红豆杉植株光合作用主要集中在上层、中层外部和下层外部;蒸腾速率在上层外、上层内和下层内较低,在其他方位都较高;南方红豆杉冠层不同部位气孔导度差异均显著;中层中、中层内和下层内胞间CO2浓度较高,响应光合作用小;树冠外部的水分利用效率都较高,内部较底;树冠内部透光率低;南方红豆杉植株蒸腾作用与气孔导度与光合有效辐射相关性不紧密;对南方红豆杉可以截取冠层上层、中层和下层外部行枝条进行扦插繁殖。

不同种源南方红豆杉生长差异分析及早期速生优良种源筛选

在浙江龙泉和安吉试验点,对来源于10省(区)24个种源的南方红豆杉〔Taxus wallichiana var.mairei(Lemée et Lévl.)L.K.Fu et Nan Li〕4年生幼苗的7个生长指标进行了测定及方差分析,并对生长指标间以及生长指标与地理-气候因子间的相关性进行了分析;此外,以树高和地径为标准初步筛选出一些速生优良种源。测量结果显示:2个试验点不同种源4年生幼苗的树高、地径、当年抽梢长和侧枝数以及侧枝的最大长度及最大直径的变化幅度以及安吉试验点各种源幼苗冠幅的变化幅度均在25%以上,说明各种源间生长指标的差异较大。方差分析结果表明:龙泉试验点各种源间幼苗侧枝的最大直径以及安吉试验点各种源间幼苗的树高无显著差异,其他生长指标在种源间均有显著或极显著差异,且冠幅、当年抽梢长和侧枝的最大长度具有显著或极显著的种源-地点互作效应。相关性分析结果表明:幼苗的冠幅与地径和树高呈显著或极显著的正相关,且侧枝的最大长度与树高和冠幅也呈显著或极显著的正相关;虽然2个试验点间各种源幼苗的7个生长指标与地理-气候因子的相关性有一定差异,但总体上未表现出明显的地理变异模式。根据2个试验点幼苗树高和地径的综合表现,初步筛选出湖南靖州、江西井冈山、福建沙县、江西武宁、云南石屏和贵州梵净山6个种源为南方红豆杉的早期速生优良种源。

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞代谢的影响

目的 探讨甲基茉莉酮酸作用下悬浮培养南方红豆杉细胞的系列生理生化反应。方法 TTC(2 ,3,5 -triphenyltetrazolium chloride)和蛋白含量测定方法以及酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸不仅强烈抑制细胞活力 ,使细胞初生代谢受到显著抑制 ,并且还诱导 PAL (苯丙氨酸解氨酶 )活性增强 ,在一定程度上抑制了 PPO(多酚氧化酶 )的活性 ,使胞外酚含量增加且极大峰比对照提前约 3d出现。结论 甲基茉莉酮酸不仅促进细胞由初生代谢提前向次生代谢转化 ,并且能够增强细胞的次生代谢 ,有利于细胞相关次生代谢产物的合成。

不同生境及采样部位对南方红豆杉活性成分含量的影响

采用HPLC法,对采自浙江、福建和江西7个产地以及不同坡向(阴坡和阳坡)、不同坡位(高、中、低坡位)的野生南方红豆杉〔Taxus wallichiana var.mairei(Lemée et Lévl.)L.K.Fu et Nan Li〕枝叶中紫杉醇、7-木糖紫杉醇和三尖杉宁碱含量进行了分析,并比较了南方红豆杉不同部位(茎皮和枝叶)和不同冠层中3种成分的含量;在此基础上对3种成分含量与环境因子(包括地理、气候及土壤因子)的相关性进行了分析。结果表明:采自阳坡的枝叶中3种成分的含量明显高于阴坡,不同坡向间紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量差异显著(P<0.05)。采自不同坡位的枝叶中3种成分的含量均有一定差异,其中采自低坡位的枝叶中3种成分的含量均最高。不同产地间紫杉醇含量有极显著差异(P<0.01)、7-木糖紫杉醇和三尖杉宁碱含量则有显著差异(P<0.05);总体上看,采自福建建阳和江西景德镇的枝叶中3种成分的含量相对较高。南方红豆杉茎皮中3种成分的含量显著高于其枝叶;高冠层枝叶中3种成分的含量均高于低冠层枝叶,不同冠层间紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量差异显著(P<0.05)。相关性分析结果表明:南方红豆杉中三尖杉宁碱含量与土壤中全N和土壤有机质含量呈极显著或显著的负相关性,与其他因子的相关性均不显著;而紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量与所有因子均无显著的相关性;海拔与3种成分的含量均呈不显著的负相关性,提示低海拔可能有利于南方红豆杉中3种成分的合成及积累。

悬浮培养过程中碳、氮、磷的补加对南方红豆杉细胞生长影响的研究

目的 解决南方红豆杉生长缓慢的问题。方法 考察红豆杉细胞悬浮培养过程中磷的消耗 ,并研究了碳、氮、磷对细胞生长及细胞活性的影响。结果 碳源在悬浮培养中期已经消耗殆尽 ,后期碳源的缺乏限制了细胞的生长。结论 补加碳源组与对照组相比 ,细胞生长率和细胞密度明显提高 ,其中细胞生长率约提高了 83%。

南方铁杉和长苞铁杉枝叶的挥发油成分

The volatile oil constituents in leaves of \%Tsuga chinensis \%(Franch.) Pritz. var. \%tchekiangensis \%(Flous) Cheng et L. K. Fu and leaves and shoots of \%T. longibracteata \%Cheng are reported first time. Seventy\|three, ninety\|one and fifty\|five of volatile oil components were identified with GC/MC, respectively in the leaves of \%T. chinensis \%var. \%tchekiangensis \%and \%T. longibracteata \%and in the shoots of \%T. longibracteata. \%Of which, monoterpines and sesquiterpines are the main components. The results of analyses showed the difference of the volatile oil constituents between the two species.

南方红豆杉组织培养研究Ⅰ.愈伤组织诱导和培养条件优化

介绍了南方红豆杉植物愈伤组织诱导和继代培养条件，在ＭＳ－培养基上，附加不同种类和浓度配比的激素，在光照条件下对植物愈伤组织的诱导率和生长量等进行了比较，其中当２，４－Ｄ１．２ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ ２． ８ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ３ ｍｇ／Ｌ或 ４ ｍｇ／Ｌ时，愈伤组织诱导率和生长量最高，结果表明，不同激素组合对愈伤组织诱导率、生长量和发生的性状有明显的影响。为南方红豆杉植物细胞悬浮培养建立了基础，为解决红豆杉的资源贫乏提供了新途径。

粤北南方红豆杉HPLC指纹图谱研究

目的:建立粤北南方红豆杉不同采收季节、不同采收部位的HPLC指纹图谱分析方法,为南方红豆杉的综合利用提供科学依据。方法:采用超临界CO2萃取技术提取南方红豆杉有效部位,按HPLC法建立指纹图谱,使用指纹谱图相似度软件进行评价分析。结果:建立了粤北南方红豆杉指纹图谱,对不同采收季节、不同采收部位的12批南方红豆杉样品提取物进行了指纹图谱分析,得出主要共有峰相对保留时间、相对峰面积作为南方红豆杉指纹图谱相关技术参数。结论:南方红豆杉指纹图谱可用于评价其药材质量。

南方红豆杉组织培养育苗试验

以南方红豆杉(Taxes chinensisvar.mairei Cheng et L.K.Fu)的幼叶、幼嫩茎段、花蕾为外植体进行组织培养育苗试验,结果表明:①外植体诱导愈伤组织的容易程度为幼嫩茎段>幼叶>花蕾;②诱导南方红豆杉产生愈伤组织的最佳培养基配方是:MS+6-BA 0.5 mg.L-1+2,4-D 1.0 mg.L-1;③BA、ZT和KT均能诱导愈伤组织分化不定芽,其中以0.1 mg.L-1ZT效果最佳,诱导率达58%;④生根培养阶段,以附加NAA1.0 mg.L-1+0.1%活性碳的1/2 MS培养基效果最好,生根率达96%;⑤试管苗移栽在河沙+泥炭的基质上,成活率可达95%。

南方红豆杉扦插繁殖技术研究

2003～2004年应用2年生南方红豆杉幼苗进行扦插试验研究,结果表明：不同时间扦插的插穗生根时间最多相差2个月,2月中旬至3月中旬为最适宜扦插季节,扦插后3～5个月的生根率高于其它月份.用河沙与红泥作基质扦插,在不同季节扦插中以河沙作基质的生根效果比红泥的好.用生根剂处理有利于插穗提早生根及增加生根数量,以冬季及早春应用的效果较为明显,应用生根剂的插穗在扦插3～5个月后的生根率和生根数量与对照比有显著差异.不同类型插穗的扦插生根率在不同月份扦插的结果不同,但其差异不显著.

南方红豆杉的愈伤组织培养研究

以南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei Cheng et L.K.Fu)的营养器官嫩茎、叶和叶柄等为外植体进行愈伤组织诱导研究,试验结果表明:(1)各外植体中诱导愈伤组织的难易程度为叶柄处>叶片>茎段;(2)2,4-D比NAA更有利于愈伤组织的形成;(3)B5比MS培养基更有利于愈伤组织的形成,因此诱导南方红豆杉产生愈伤组织的最佳培养基配方是:B5+2,4-D4.0mg·L^(-1)+ABT生根粉0.3 g·L^(-1),愈伤组织的诱导率达93%;(4)继代增殖培养的配方B5+2,4-D0.1 mg·L^(-1)+ABT生根粉0.1 g·L^(-1),增殖系数可达3.6.

南方红豆杉树皮的化学成分研究

目的：研究生长在中国东南部的南方红豆杉树皮的化学成分.方法：采用硅胶柱色谱、制备薄层色谱和HPLC制备色谱法分离、纯化化学成分,用核磁共振技术鉴定化合物结构.结果：从生长在中国东南部的南方红豆杉树皮中分离得到了12个紫杉烷二萜类化合物,分别鉴定为：紫杉吉酚（1）、decinnamoyltaxagifine（2）、19-debenzoyl-19-acetyltaxinine M（3）、9-二氢-13-乙酰基-巴卡亭Ⅲ（4）、7,9-dideacetylbaccatinⅣ（5）、1,3-二氢紫杉宁（6）、南方红豆杉醇C（7）、紫杉佐匹定J（8）、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇A（9）、10-deacetyltaxol（10）、taxicinⅡ（11）、2α,7β,10β-triacetoxy-5α,13α-dihydroxy-2（3→20）abeotaxa-4（20）,11-dien-9-one（12）.结论：其中,化合物1、2、4～6、8、9、11和12为首次从南方红豆杉中分离得到,化合物7为首次从南方红豆杉树皮中分离得到.

广东连州自然分布的3种植物体内及根际环境中稳定性碳和氮同位素的分析

以广东连州自然分布的3种国家重点保护野生植物南方红豆杉[Taxus chinensis var.mairei(Lemée et Lévl.)Cheng et L.K.Fu]、半枫荷(Semiliquidambar cathayensis Chang)和金荞麦[Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara]为研究对象,分析了根、茎和叶片及根际土壤和岩石的C、N含量和C∶N比以及δ^(13)C和δ^(15)N值的差异;在此基础上,通过δ^(13)C和δ^(15)N值的散点图比较了3种植物生态位的差异。结果表明:在同种植物中,根、茎和叶片的C和N含量及C∶N比总体高于根际土壤和岩石,其中,叶片中C和N含量均最高,茎的C∶N比最高;而根际土壤和岩石的δ^(13)C和δ^(15)N值总体高于根、茎和叶片。在供试的3种植物间,根际土壤和岩石中C和N含量总体上无明显差异,但根、茎和叶片中C和N含量以及根、茎和叶片及根际土壤和岩石的C∶N比、δ^(13)C和δ^(15)N值均有一定差异;其中,金荞麦根中C含量显著(P<0.05)低于南方红豆杉和半枫荷,其根、茎和叶片中N含量和δ^(15)N值均极显著(P<0.01)高于后二者,其根、茎和叶片的C∶N比和δ^(13)C值均极显著低于后二者,其根际土壤和岩石的C∶N比和δ^(13)C值总体上也低于后二者;南方红豆杉和半枫荷的叶片中C和N含量以及茎和叶片的δ^(13)C值、根际土壤和岩石的δ^(13)C和δ^(15)N值均存在显著差异,但二者的整体差异相对较小。从散点图上看,金荞麦的生态位远离南方红豆杉和半枫荷,而后二者的生态位有交集。综合分析结果显示:草本植物金荞麦与木本植物南方红豆杉和半枫荷的C和N含量以及δ^(13)C和δ^(15)N值的差异不仅与植物自身的生活型有关,而且与各自生境中的光照和土壤因子等相关。另外,供试3种植物的根、茎和叶片的δ^(13)C值变幅为-31.69‰^-26.46‰,符合C3植物的δ^(13)C值范畴。

不同湿度贮藏条件下南方红豆杉多糖含量动态变化的研究

目的：研究研究南方红豆杉枝条在不同湿度贮藏环境下多糖的含量变化,确定南方红豆杉多糖最佳贮藏湿度环境。方法：设置了65%RH、75%RH和85%RH三个贮藏湿度,通过测量不同湿度贮藏环境下南方红豆杉总多糖的含量变化,以确定最佳湿度贮藏条件。结果：南方红豆杉总多糖含量呈先升高后又开始下降的迹象,总多糖在0~3个月中65%RH﹥75%RH﹥85%RH。结论：南方红豆杉多糖成分最佳的贮藏环境是65%RH低湿环境。