一株南方红豆杉内生菌HDSW的抗肿瘤活性研究

[目的]鉴定南方红豆杉抗肿瘤内生菌HDSW,并初步研究其抗肿瘤机制。[方法]基于16S rDNA测序鉴定菌株HDSW的种属,通过MTT试验、平板细胞集落形成试验、细胞黏附试验、划痕试验和流式细胞术检测HDSW发酵液的有机溶剂提取物对胃癌细胞MGC-803的抑制活性,利用实时定量PCR方法探索其抗肿瘤的分子机制。[结果]菌株HDSW被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus pumilus),其发酵液的乙酸乙酯提取物作用于胃癌细胞MGC-803可有效降低其存活率,减弱其黏附能力,抑制迁移能力,诱导细胞凋亡。菌株HDSW发酵液的乙酸乙酯提取物可显著增强促细胞凋亡基因p53、Bax和Caspase 3的表达水平,抑制细胞凋亡拮抗基因Bcl-2的表达。[结论]南方红豆杉内生菌HDSW可产生具有显著抗胃癌细胞MGC-803活性的次级代谢产物,且乙酸乙酯可将其提取出来,具有潜在的开发价值。

中国红豆杉内生细菌的分离鉴定及活性研究

从中国红豆杉的茎中分离得到两株内生细菌G18、F19,通过生物学特性和16SrDNA序列分析,初步鉴定这两株菌分别为假单胞菌属(Psudomonas)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)细菌。活性研究表明,G18、F19发酵液均对3种病原细菌有抑制作用,分别对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)和柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)有较强的抑制作用。G18和F19分别能降解水杨酸和敌敌畏。

2株中国红豆杉内生细菌代谢产抑菌活性物质的研究

自秦巴山区野生中国红豆杉(Taxus chinensis)中分离的25株内生细菌中筛选出2株具有较广抑菌活性的菌株TC-3和TC-2,通过生物学特征研究和16S rDNA序列分析,初步鉴定为Bacillus sp.和Bacillus subtilis。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,TC-3和TC-2菌株发酵上清液对金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等革兰氏阳性菌和大肠杆菌(Escherichia coli)等革兰氏阴性菌具有较好的抑菌作用,而且对部分真菌也有抑菌作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性略有下降,表明该活性物质为非蛋白成分,或起抑菌作用的非单一物质。该活性物质不同于一般细菌素,属于类细菌素。它具有很好的热稳定性,在酸性条件下稳定且活性高,对蛋白酶敏感性低,且具有较广的抗菌谱。

2株南方红豆杉内生细菌的分离鉴定及其抑菌活性

为了解2株南方红豆杉内生细菌TB02和TB03的特性,采用传统微生物学与现代分子生物学相结合的方法对其进行鉴定和系统发育分析,混交平板法进行抗菌活性的测定。结果表明:TB02为肠杆菌属(Enterobacter),TB03为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);2株内生细菌的发酵液对5株供试植物病原真菌有较强的抑制活性,尤其对罗氏小核菌的抑菌活性最强,菌落直径分别减小29.5mm和37.5mm。发酵液经高温加热处理后,TB02和TB03引起的罗氏小核菌菌落直径分别减小28mm和18mm。发酵液经胃蛋白酶处理后,TB02和TB03引起的罗氏小核菌菌落直径分别减小50mm和18mm,说明其可能还有蛋白质成分存在。紫外扫描分析发现,TB02最大吸收峰在300nm处,TB03在305nm处,推测可能是大环内酯类,但在分子结构上有差异。

红豆杉内生细菌的分离及促生效应

从健康红豆杉根、茎、叶组织中分离出31株内生细菌,对其有益生物学特性进行评价.结果显示:31株菌均能合成植物生长素IAA.其中,HG12,HY23,HY24,HY41具有溶磷特性,有13株菌表现出不同程度的固氮和合成铁体的活性;将HG12,HY23混合培养,发现菌株合成IAA能力下降,其他生物活性则变化不大.经16S r DNA测序分析可知,HG12属于西地西菌属(Cedecea sp.),HY23属于伊查德布丘氏菌属(Buttiauxella izardii).

南方红豆杉内生细菌分离鉴定及系统发育分析

目的:了解南方红豆杉内生细菌类群及其系统发育关系;方法:对分离菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定,并做系统发育分析。结果:从南方红豆杉茎、皮和叶中共分离到内生细菌52株。对12株内生细菌16S rDNA进行PCR扩增,扩增产物大小约为1 400 bp,对11株内生细菌16S rDNA测序结果,用BLAST软件进行相似性比对,发现TB02株为Enterobacter属,相似性99%;9株为Bacillus属,相似性99%～100%;TB13株为Lysinibacillus,相似性97%。通过构建系统发育树发现这11株内生细菌明显聚为两大支。结论:11株内生细菌分别鉴定为肠杆菌、芽孢杆菌和Lysinibacillus,芽孢杆菌为南方红豆杉内生细菌优势菌属。芽孢杆菌和Lysinibacillus亲缘关系较近,二者和肠杆菌之间亲缘关系较远。