粤北南方红豆杉HPLC指纹图谱研究

目的:建立粤北南方红豆杉不同采收季节、不同采收部位的HPLC指纹图谱分析方法,为南方红豆杉的综合利用提供科学依据。方法:采用超临界CO2萃取技术提取南方红豆杉有效部位,按HPLC法建立指纹图谱,使用指纹谱图相似度软件进行评价分析。结果:建立了粤北南方红豆杉指纹图谱,对不同采收季节、不同采收部位的12批南方红豆杉样品提取物进行了指纹图谱分析,得出主要共有峰相对保留时间、相对峰面积作为南方红豆杉指纹图谱相关技术参数。结论:南方红豆杉指纹图谱可用于评价其药材质量。

香柏(变种)黄酮类成分的HPLC-ESI-MS^n分析

目的:分析香柏(变种)中的主要黄酮类化学成分.方法:采用高效液相色谱法-电喷雾-质谱联用的方法对香柏(变种)主要化学成分进行定性研究,并对香柏(变种)中黄酮类化合物的质谱裂解规律进行了初步探讨.色谱柱为C18UltimnteTMC18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-4﹪醋酸水溶液梯度洗脱;流速为0.8 mL/min;进样量10μL,负离子模式采集.结果:鉴定出香柏(变种)中4种主要黄酮类成分.结论:通过高效液相色谱法-电喷雾-质谱联用分析获得了香柏(变种)中主要黄酮类化合物,为该植物的质量控制提供了科学依据.

红豆杉提取液中紫杉醇的HPLC法测定

建立了高效液相色谱法(HPLC)测定云南红豆杉原始提取液中紫杉醇含量的方法,经比较C-(18)和氰基固定相,发现在氰基柱上,以MeOH—MeCN-H_2O(20:16:64体积分数)为流动相时,紫杉醇获得更满意的分离,流速2.0mL/min,柱温40℃,UV检测波长:227nm。方法简便、准确、适合于微量紫杉醇的测定。

改进的HPLC法测定红豆杉植物和细胞培养物中紫杉醇的含量

Taxol content from the branches and leaves of Taxus chinensis var. mairei (Lemeé et Lévl.) Cheng et L. K. Fu and its cell cultures was analyzed by using Nova-Pak C-{18}column and improving the proportion of mobile phase (methanol/acetonitrile/water) and modifing column temperature at a wavelength of 227 nm. The improved HPLC method is celerity, nicety and delicacy. The lowest detectable quantity of taxol could reach 0.005 μg.

南方红豆杉芽愈伤组织的诱导和培养

目的 为研究南方红豆杉芽愈伤组织诱导条件、最适培养基组成成分和紫杉醇含量的积累。方法 以南方红豆杉芽为外植体 ,在 MS培养基上 ,试验不同种类、不同浓度的激素及其组合对其愈伤组织诱导的影响。结果 芽诱导的最适培养基是 MS添加 2 ,4 - D2 .0 mg/L 和 NAA0 .5 mg/L;对愈伤组织的增殖、驯化和紫杉醇含量的积累则以 B5添加 2 ,4 - D 0 .5 mg/L、NAA 1.0 m g/L和 KT 0 .5 mg/L为最佳。结论 本研究为植物组织细胞培养生产紫杉醇提供实验依据。

南方红豆杉愈伤组织培养的研究

对南方红豆杉叶愈伤组织诱导条件及最适培养基组成成分进行了探讨。结果表明 ,2 ,4- D比 NAA更有利于愈伤组织的形成。培养基中添加适当浓度的 CA。

南方红豆杉化学成分的研究进展

南方红豆杉是我国的特有植物,在我国自然生长的5种红豆杉中分布最广,蕴藏量也最大,其化学成分研究在我国展开得最早,研究的时间最长也最彻底,到目前为止已经从我国南方红豆杉的根、茎、叶、皮、种子等不同部位中分离鉴定出147种化合物,包括二环紫杉烷类、各种三环紫杉烷类、松香烷类、9(10→20)重排的松香烷类和海松烷类二萜,以及木脂素类、黄酮类和酚类化合物。现总结过去20年南方红豆杉在化学成分方面的研究概况。

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞自由基清除系统酶的影响

目的 研究外加甲基茉莉酮酸对南方红豆杉 Taxus chinensis var.mairei细胞培养体系氧自由基清除系统中超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化物酶 (POD)和过氧化氢酶 (CAT)酶活的影响规律。方法 酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸能够诱导南方红豆杉细胞 SOD的活性 ;对 POD活性的诱导作用极为显著 (约为对照组的 10倍 )且POD活性在培养第 10天达到峰值 ;在甲基茉莉酮酸作用下 CAT活性先升高后降低 ,即在表现出较强的诱导作用之后又抑制了 CAT的酶活水平。结论 甲基茉莉酮酸的加入刺激细胞产生了防御应答反应 ,诱导了相关的自由基清除酶类 ,其中

不同产地南方红豆杉枝叶的紫杉醇含量及其指纹图谱的比较分析

采用HPLC法对来源于6个产地(陕西周至和汉中;甘肃天水;安徽胡乐、聂家山和仙寓山)的12份野生南方红豆杉〔Taxus chinensis var.mairei(Lemée et Lévl.)Cheng et L.K.Fu〕枝叶中的紫杉醇含量进行了比较分析,并对不同产地南方红豆杉指纹图谱的相似度进行了比较和特征指纹图谱的构建。结果表明:不同产地南方红豆杉枝叶中紫杉醇的含量有明显差异,来源于陕西和甘肃的枝叶样品中紫杉醇含量明显高于来源于安徽的样品,以产自陕西周至的枝叶样品中紫杉醇含量最高(0.019 3 mg.g-1)。各样品的指纹图谱均有12个共有峰,其中9号共有峰的保留时间(32.75 min)与紫杉醇标准品一致,被确定为南方红豆杉指纹图谱的参照峰(s)。各共有峰相对保留时间的RSD值均低于1%,但相对峰面积的RSD值均高于40%,说明各样品共有峰的保留时间稳定,但相对含量差异较大。除来源于安徽聂家山的2个样品外,其他样品的相似度值均在0.8以上,说明各样品间指纹图谱的相似度较高。根据12个样品的指纹图谱建立了南方红豆杉枝叶的特征指纹图谱,可用于南方红豆杉的鉴定及质量控制。由测定结果推测:不同产地南方红豆杉枝叶中紫杉醇含量的差异可能与生长环境的差异有关。

云南红豆杉中紫杉烷类化合物的分离与鉴定

目的 为了进一步研究红豆杉中的紫杉烷二萜类化合物 ,对生长在我国的云南红豆杉 Taxus yunnanensis进行深入的化学研究。方法 云南红豆杉枝叶的乙醇提取物 ,经萃取、硅胶柱层析、PTLC、制备 HPLC等方法分离 ,从乙醇提取物的二氯甲烷萃取部分分离得到 5个化合物 ,采用波谱解析 (U V,IR,ESI-MS,1 HNMR,1 3 CNMR)等方法确定了它们的结构。结果 分别为 1-acetoxy-baccatin ( ) ,7-epi-taxol( ) ,taxchinin A( ) ,cephalemannine( )和 taxol( )。结论 化合物 为新化合物 ,化合物 、

南方红豆杉冠层不同部位的光合生理研究

选择3株育龄南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei Cheng et L.K.Fu)雌性植株,采用树冠分层分区域研究法,测定上、中、下层及内、中、外区域计9个小区的光合作用,分析了南方红豆杉冠层不同部位的光能分布和光合生理。结果表明,南方红豆杉植株光合作用主要集中在上层、中层外部和下层外部;蒸腾速率在上层外、上层内和下层内较低,在其他方位都较高;南方红豆杉冠层不同部位气孔导度差异均显著;中层中、中层内和下层内胞间CO2浓度较高,响应光合作用小;树冠外部的水分利用效率都较高,内部较底;树冠内部透光率低;南方红豆杉植株蒸腾作用与气孔导度与光合有效辐射相关性不紧密;对南方红豆杉可以截取冠层上层、中层和下层外部行枝条进行扦插繁殖。

南方红豆杉外植体母株来源与培养基成分对愈伤组织生长和紫杉醇的影响

目的建立和优化获得量大而高紫杉醇愈伤组织的培养技术和方法.方法以山西陵川县野生和在西安栽培的南方红豆杉为材料,就最佳母株、外植体种类、基本培养基、植物激素种类及浓度对愈伤组织诱导、生长和紫杉醇的影响等因素进行了系统研究.结果幼茎外植体因诱导的愈伤组织时间早、频率高而最佳;培养基Y5:MS+2,4-D 4.0 mg/L+KIN 1.0 mg/L或B5Ⅲ:B5+2,4-D 3.0 mg/L+KIN 0.1 mg/L+Phe 0.1 mol/L为最佳诱导愈伤培养基,其诱导频率高达100%.继代培养基中质量浓度2,4-D(0.5～3 mg/L)促进愈伤组织增殖;高质量浓度(8 mg/L)则有抑制作用.当2,4-D质量浓度适宜时,愈伤组织在B5培养基上较在MS培养基上褐化轻、生长快.HPLC分析表明紫杉醇最高的继代培养基为MSⅢ,其紫杉醇质量分数高达干重的0.004%;野生母株幼芽来源的愈伤组织,其紫杉醇普遍高于栽培母株幼茎来源的愈伤组织.结论以5月份野生红豆杉幼茎为外植体,以Y5或B5Ⅲ为诱导培养基和继代培养基,继代8～10代,每代培养30～35 d;用MSⅢ培养基再培养1～2代,收获愈伤组织或细胞培养物,并从中提取紫杉醇是获得大量高紫杉醇愈伤组织的较佳培养程序.

丽江塔城地区云南红豆杉内生真菌的多样性研究

为了探悉云南红豆杉内生真菌的多样性,研究了云南丽江维西地区云南红豆杉(Taxus yunnanensisCheng et L.K.Fu)内生真菌的种类组成及数量。从云南红豆杉根、茎、叶中分离获得115种内生真菌,经过形态学和ITS分析结果表明,这115种内生真菌分属于21属,其中分布最广的类群是芽枝霉属(19种),其次是黑孢属(17种)和拟茎点霉属(14种),说明云南红豆杉不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存在差异,具有丰富的物种多样性。经初步检测,其中有4个菌种能够产生紫杉醇。

不同种源南方红豆杉生长差异分析及早期速生优良种源筛选

在浙江龙泉和安吉试验点,对来源于10省(区)24个种源的南方红豆杉〔Taxus wallichiana var.mairei(Lemée et Lévl.)L.K.Fu et Nan Li〕4年生幼苗的7个生长指标进行了测定及方差分析,并对生长指标间以及生长指标与地理-气候因子间的相关性进行了分析;此外,以树高和地径为标准初步筛选出一些速生优良种源。测量结果显示:2个试验点不同种源4年生幼苗的树高、地径、当年抽梢长和侧枝数以及侧枝的最大长度及最大直径的变化幅度以及安吉试验点各种源幼苗冠幅的变化幅度均在25%以上,说明各种源间生长指标的差异较大。方差分析结果表明:龙泉试验点各种源间幼苗侧枝的最大直径以及安吉试验点各种源间幼苗的树高无显著差异,其他生长指标在种源间均有显著或极显著差异,且冠幅、当年抽梢长和侧枝的最大长度具有显著或极显著的种源-地点互作效应。相关性分析结果表明:幼苗的冠幅与地径和树高呈显著或极显著的正相关,且侧枝的最大长度与树高和冠幅也呈显著或极显著的正相关;虽然2个试验点间各种源幼苗的7个生长指标与地理-气候因子的相关性有一定差异,但总体上未表现出明显的地理变异模式。根据2个试验点幼苗树高和地径的综合表现,初步筛选出湖南靖州、江西井冈山、福建沙县、江西武宁、云南石屏和贵州梵净山6个种源为南方红豆杉的早期速生优良种源。

甲基茉莉酮酸对悬浮培养南方红豆杉细胞代谢的影响

目的 探讨甲基茉莉酮酸作用下悬浮培养南方红豆杉细胞的系列生理生化反应。方法 TTC(2 ,3,5 -triphenyltetrazolium chloride)和蛋白含量测定方法以及酶活分析技术。结果 甲基茉莉酮酸不仅强烈抑制细胞活力 ,使细胞初生代谢受到显著抑制 ,并且还诱导 PAL (苯丙氨酸解氨酶 )活性增强 ,在一定程度上抑制了 PPO(多酚氧化酶 )的活性 ,使胞外酚含量增加且极大峰比对照提前约 3d出现。结论 甲基茉莉酮酸不仅促进细胞由初生代谢提前向次生代谢转化 ,并且能够增强细胞的次生代谢 ,有利于细胞相关次生代谢产物的合成。

正交试验法优化香柏(变种)中总黄酮提取工艺

研究提取香柏总黄酮的最佳工艺条件。以总黄酮的得率为考察指标,溶剂回流作为提取手段,利用单因素和正交试验,考察提取温度、提取时间、乙醇溶液体积分数、液固比以及提取次数对总黄酮得率的影响。最优工艺条件为:在80℃水浴条件下,提取时间90 min、乙醇溶液体积分数60%、液固比50∶1(mL/g)、提取次数3次。在最优工艺条件下总黄酮的提取率可达7.68 g/100 g。该方法操作方便、准确可靠,可以用于工业化生产。

云南红豆杉中的非紫杉烷类化合物

从怒江产云南红豆杉 Taxus yunnanensis中分得 5个非紫杉烷类化合物 :3β- hydroxy- 5 α,8α- epidioxyergosta-6 ,2 2 diene( ) ,β-谷甾醇 (β- sitosterol, ) ,pluviatilol( ) ,α- conidendrin( )和 secoisolariciresinol( )。其中 是首次从红豆杉科植物中得到。我们利用核磁共振波谱与质谱等技术确定了它们的结构。

云南红豆杉心木的化学成分研究

目的进一步了解云南红豆杉心木部位的化学成分。方法云南红豆杉心木的乙醇提取物,经用萃取、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等方法分离,从其氯仿萃取部位分离鉴定得18个化合物,采用波谱解析(UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR)等方法确定其结构。结果这18个化合物分别为12个紫杉烷:2α,5α,7β,9α,10β,13α-六乙酰氧基-4(20),11-紫杉二烯(Ⅰ)、紫杉素(Ⅱ)、紫杉-4(20),11-二烯-2A,5A,10β-三乙酰氧基-14β,2-甲基丁基(Ⅲ)、10B-羟基-2A,5A,14β-三乙酰氧基-4(20),11-紫杉二烯(Ⅳ)、1-去羟基巴卡亭Ⅳ(Ⅴ)、巴卡亭Ⅳ(Ⅵ)、巴卡亭Ⅵ(Ⅶ)、7,9-去乙酰基巴卡亭Ⅵ(Ⅷ)、10-去乙酰基云南红豆杉素(Ⅸ)、1B-乙酰氧-5-去乙酰基巴卡亭Ⅰ(Ⅹ)、巴卡亭Ⅰ(Ⅺ)、taxuchinA(ⅩⅡ);4个木脂素:开环异落叶松树脂素(ⅩⅢ)、A-conidendrin(ⅩⅣ)、异紫杉脂素(ⅩⅤ)、落叶松脂醇(ⅩⅥ);2个其它化合物:肌醇甲醚(ⅩⅦ)、β-谷甾醇(ⅩⅧ)。其中化合物Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅺ、ⅩⅡ、ⅩⅥ为心木部位首次分得的成分。结论云南红豆杉心木部位的化学成分同云南红豆杉其他部位有一定的差异,但就红豆杉属而言没有什么差异。

不同生境及采样部位对南方红豆杉活性成分含量的影响

采用HPLC法,对采自浙江、福建和江西7个产地以及不同坡向(阴坡和阳坡)、不同坡位(高、中、低坡位)的野生南方红豆杉〔Taxus wallichiana var.mairei(Lemée et Lévl.)L.K.Fu et Nan Li〕枝叶中紫杉醇、7-木糖紫杉醇和三尖杉宁碱含量进行了分析,并比较了南方红豆杉不同部位(茎皮和枝叶)和不同冠层中3种成分的含量;在此基础上对3种成分含量与环境因子(包括地理、气候及土壤因子)的相关性进行了分析。结果表明:采自阳坡的枝叶中3种成分的含量明显高于阴坡,不同坡向间紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量差异显著(P<0.05)。采自不同坡位的枝叶中3种成分的含量均有一定差异,其中采自低坡位的枝叶中3种成分的含量均最高。不同产地间紫杉醇含量有极显著差异(P<0.01)、7-木糖紫杉醇和三尖杉宁碱含量则有显著差异(P<0.05);总体上看,采自福建建阳和江西景德镇的枝叶中3种成分的含量相对较高。南方红豆杉茎皮中3种成分的含量显著高于其枝叶;高冠层枝叶中3种成分的含量均高于低冠层枝叶,不同冠层间紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量差异显著(P<0.05)。相关性分析结果表明:南方红豆杉中三尖杉宁碱含量与土壤中全N和土壤有机质含量呈极显著或显著的负相关性,与其他因子的相关性均不显著;而紫杉醇和7-木糖紫杉醇含量与所有因子均无显著的相关性;海拔与3种成分的含量均呈不显著的负相关性,提示低海拔可能有利于南方红豆杉中3种成分的合成及积累。

悬浮培养过程中碳、氮、磷的补加对南方红豆杉细胞生长影响的研究

目的 解决南方红豆杉生长缓慢的问题。方法 考察红豆杉细胞悬浮培养过程中磷的消耗 ,并研究了碳、氮、磷对细胞生长及细胞活性的影响。结果 碳源在悬浮培养中期已经消耗殆尽 ,后期碳源的缺乏限制了细胞的生长。结论 补加碳源组与对照组相比 ,细胞生长率和细胞密度明显提高 ,其中细胞生长率约提高了 83%。