Th17、Tc1细胞在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的:研究宫颈鳞癌组织中Th17及Tc1细胞表达,探讨Th17及Tc1细胞在宫颈鳞癌发生发展中的作用及相互关系。方法:以早期宫颈鳞癌患者为实验组,以良性病变行子宫切除的慢性宫颈炎患者为对照组,制备宫颈组织淋巴细胞单细胞悬液后,用流式细胞术检测组织中Th17及Tc1细胞的表达。结果:实验组和对照组中Th17细胞比例分别为(3.89±1.26)%和(1.51±0.46)%,Tc1细胞比例分别为(1.45±0.71)%和(5.37±2.95)%。与对照组比较,实验组中Th17细胞比例显著升高(P<0.01),Tc1细胞比例显著降低(P<0.01)。实验组中盆腔淋巴结阳性者较阴性者Th17细胞表达降低(P=0.038);临床分期II期患者较I期患者Tc1细胞表达增高(P=0.046)。宫颈鳞癌组织中Th17与Tc1细胞表达呈负相关(r=-0.445,P=0.014)。结论:Th17及Tc1细胞在宫颈鳞癌患者肿瘤局部免疫调节反应中均起着重要作用,且Th17细胞可能通过抑制Tc1细胞的功能发挥免疫调节作用。

前列腺素E_2对Th1/Th2和Tc1/Tc2淋巴细胞免疫平衡的调节

本研究探讨前列腺素E2(PGE2)对外周血T淋巴细胞体外增殖的影响,以及对Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞的免疫平衡的调节作用。不同浓度PGE2与抗CD3和抗CD28单克隆抗体(mAb)和健康成人外周血单个核细胞(MNC)共同培养120小时,测定细胞增殖程度。ELISA方法测定24、48、72和120小时细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4浓度变化。流式细胞仪测定CD4+IL-4+T细胞和CD4+IFN-γ+T细胞以及CD8+IL-4+T细胞和CD8+IFN-γ+T细胞比值。各实验均以不加PGE2为对照。结果表明:①随PGE2的浓度增加,T细胞体外增殖的抑制率明显增高(p=0.001);T细胞增殖抑制率与PGE2浓度之间呈明显的正相关(r=0.889,p=0.000)。②实验组培养120小时的IFN-γ浓度与第72小时的IFN-γ浓度差异无显著性(p=0.917),对照组细胞培养上清液中的IFN-γ浓度随时间持续增高(p=0.046);实验组不同时间的IFN-γ浓度均明显低于对照组(p<0.05)。实验组在不同时间产生IL-4浓度无明显变化(p=0.400);对照组24小时细胞培养上清中IL-4浓度高于48、72和120小时(p值分别为0.007、0.003和0.002);实验组细胞培养24小时时IL-4浓度明显低于对照组(p=0.037);实验组细胞培养48、72和120小时与对照组IL-4浓度差异无显著性(p>0.05)。③实验组与对照组CD4+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.767);实验组CD4+IL-4+T细胞比例略高于对照组(p=0.051);实验组CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.011)。实验组与对照组CD8+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.441);实验组CD8+IL-4+T细胞的比例明显高于对照组(p=0.015);实验组CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.038)。结论:PGE2体外抑制外周血T细胞的增殖;PGE2作用24小时即可抑制IFN-γ和IL-4的产生,并且明显影响T细胞IFN-γ的高峰出现,对IFN-γ具有持续性的抑制作用,对IL-4的持续性影响并不明显;PGE2使CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值和CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值增加,调节T细胞的免疫反应向Th2/Tc2方向发展。

二期梅毒患者外周血Th1/Th2及Tc1/Tc2的研究

目的探讨CD4+T细胞(Th细胞)和CD8+T细胞(Tc细胞)亚群在梅毒发病机理中的作用及其相互关系。方法采用流式细胞术检测经三色荧光抗体染色的二期梅毒患者外周血CD4+/IFN-γ+(Th1),CD4+1/IL-4+(Th2),CD4+/IFN-γ+/IL-4+(Tho),CD8+/IFN-γ+(Tc1),CD8+/IL-4+(Tc2),CD8+/IFN-γ+/IL-4+(Tc0)细胞含量。结果梅毒组Th1细胞含量、Th1/Th2,Tc1/Tc2比值均明显低于正常对照组(P<0.01),而Tc0和Tc2细胞含量显著高于正常对照组,其他细胞两组间无显著性差异(P>0.05)。结论二期梅毒患者Th1/Th2及Tc1/Tc2比值失衡,可能是机体不能完全清除梅毒螺旋体造成其潜伏体内形成长期感染的重要因素之一。

芦荟大黄素对结肠炎小鼠模型脾脏T细胞亚群的影响

目的观察芦荟大黄素(Aloe-emodin,AE)对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎小鼠模型脾脏T细胞亚群的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为4组,即乙醇对照组、模型组、AE组及柳氮磺吡啶(SASP)组。后3组以TNBS灌肠制备小鼠结肠炎模型,8 h后给予生理盐水、AE(150 mg.kg-1)或SASP(260 mg.kg-1)灌胃治疗,连续6 d。每天进行疾病活动指数(DAI)评分,6 d后处死小鼠,评估各组结肠组织学损伤指数(TDI)及脏器指数,应用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏CD4+/CD8+T细胞及Th1、Th2、Tc1、Tc2细胞亚群的变化情况。结果 AE灌胃治疗可明显降低TNBS结肠炎小鼠的DAI评分和TDI评分(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,AE组小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞水平明显降低,而CD8+细胞比例升高,CD4+/CD8+比值降低((P<0.05或P<0.001),脾指数下降;AE组小鼠脾脏的Th1细胞、Tc1细胞水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),而Th2细胞明显升高(P<0.001),Th1/Th2比值、Tc1/Tc2比值也明显降低(P<0.01)。结论芦荟大黄素可能通过调节CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群的平衡,抑制Th1型/Tc1型细胞分化,诱导以Th2型为主的免疫反应,从而减轻TNBS结肠炎小鼠的炎症病理损伤。

正常人及系统性红斑狼疮患者T细胞亚群流式细胞术初步分析

目的:研究正常人及系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血(PBMCs)T淋巴细胞亚群的平衡状态。方法:采用微量全血法在样本中标记多种荧光抗体,利用三色流式细胞技术对正常人及SLE患者外周血各T细胞亚群百分率进行检测和分析。结果:与正常人相比,在未经刺激的自然状态下,SLE患者PBMCs中表达白细胞介素(IL)-10的Th2细胞及Tc2细胞的百分率均显著增高;如经植物血凝素(PHA)和佛波醇乙酯(PMA)联合刺激,正常人表达干扰素-γ(IFN-γ)的Tc1细胞百分率显著升高,而SLE患者则仍表现为Th2和Tc2细胞百分率的明显增高。结论:SLE患者体内存在高IL-10应答、低IFN-γ应答状态,从而形成T细胞亚群平衡向Th2/Tc2偏移的态势。

青钱柳三萜酸对高糖所致的胰岛α细胞胰岛素抵抗的影响

为探究青钱柳三萜酸(TAE)对胰岛素抵抗胰岛α细胞胰高血糖素分泌的影响及其可能的干预机制,采用长期高糖诱导小鼠胰高糖素瘤细胞株(αTC1-6)建立胰岛α细胞胰岛素抵抗细胞模型。实验分组为:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖),模型组(25 mmol/L葡萄糖),青钱柳三萜酸组(TAE,1、5、10μg/mL),TAE+PI3K抑制剂渥曼青霉素组(10μg/mL TAE+10 nmol/L wortmannin)。给药后收集上清液,裂解细胞。采用ELISA试剂盒检测αTC1-6细胞上清液的胰高血糖素含量,q PCR和Western blot检测细胞裂解液中的胰岛素受体-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)及其胰岛素信号通路中下游蛋白激B(Akt)的m RNA和蛋白表达水平。结果显示,TAE可以浓度依赖性降低高糖诱导的αTC1-6细胞的胰高血糖素分泌量,并可增加胞内IRS-1、PI3K和Akt的基因表达和磷酸化水平,而给予渥曼青霉素后能够逆转其作用。研究表明,TAE对高糖所致的胰岛α细胞胰岛素抵抗具有一定的改善作用,并可能与激活IRS/PI3K/Akt信号通路有关。

Tc1、Th17细胞在宫颈鳞癌组织中表达的意义及相关性研究

目的 通过检测细胞表达,探讨Tc1及Th17细胞在宫颈鳞癌发生发展中的作用及相关性。方法 选取该院2012年5月~2014年10月收治的45例早期宫颈鳞癌患者为研究组,并以良性病变行子宫切除的慢性宫颈炎患者26例为对照组,对比两组患者组织标本中Tc1、Th17细胞的表达。结果 研究组中Tc1细胞比例较对照组显著降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;研究组中Th17细胞比例较对照组显著升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。研究组盆腔淋巴结阳性者Th17细胞低于阴性者,差异有统计学意义（P〈0.05）;较Ⅰ期患者、Ⅱ期患者Tc1细胞表达显著增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。Tc1与Th17细胞在宫颈鳞癌组织中的表达呈负相关（r=-0.388,P=0.012）。结论 在宫颈鳞癌患者肿瘤局部免疫中,Tc1、Th17细胞起重要作用;Th17细胞可借助抑制Tc1细胞功能而进行免疫调节。

地塞米松对系统性红斑狼疮患者外周血T细胞亚群的影响

研究地塞米松对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中Th17、Tc17、Th1、Tc1等T细胞亚群表达的影响。收集30例确诊的SLE患者和22例健康志愿者作为对照组。SLE患者和正常对照者的PBMC分空白孔、佛波酯(PMA)/离子霉素(Ionomycin)孔、PMA/Ionomycin+地塞米松(DEX)孔行体外培养,运用四色流式细胞术检测PBMC表达Th17、Tc17、Th1、Tc1、IL-17/IFN-γ双阳细胞等T细胞亚群的百分比。未经刺激的状态下,SLE患者PBMC中各群T细胞的百分比较正常人无差异;经PMA刺激后,SLE患者外周血Th17、Tc1、CD3+CD8-IL-17+IFN-γ+细胞的比例显著高于对照组,SLE患者Th1、Tc17细胞百分比与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);地塞米松能明显抑制活化状态下的PBMC中表达Th17、Tc17、Th1、Tc1细胞的比例(P<0.05),还可降低SLE患者PBMC培养中CD4+T细胞表达IL-17、IFN-γ的平均荧光强度。SLE患者体内T细胞亚群的表达水平存在明显异常,地塞米松能干扰SLE患者体内细胞因子网络失衡的免疫病理过程,且对表达IL-17、IFN-γ的T细胞均有明显的抑制作用,为临床使用糖皮质激素治疗SLE提供新的理论依据和实验室基础。