体外循环期间Th1、Tc1/Th2Tc2细胞亚群与机体致炎/抗炎反应的关系

目的研究体外循环(CPB)中Th1、Tc1/Th2、Tc2细胞功能亚群的变化及与机体致炎/抗炎反应的关系。方法随机抽取二尖瓣瓣膜病、先天性动脉导管未闭患者各20例,设为试验组和对照组。于术前、CPB或手术开始20 min、停机前或手术结束时、术后4 h、术后24 h、术后72 h取血,分离T细胞,提取RNA,Northern blot法检测IFN-γ/IL-4mRNA表达;细胞内因子染色检测IFN-γ/IL-4蛋白表达。取血清,放射免疫检测致炎介质IL-6、抗炎介质IL-10水平。结果与术前相比,试验组CPB中IFN-γmRNA蛋白表达水平出现一过性下调,IL-4mRNA、蛋白表达水平出现一过性上调,IL-6、IL-10水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),分别于术后24 h或72 h恢复到术前水平(P>0.05);对照组各时相点IFN-γ/IL-4mRNA蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),术后72 h恢复到术前水平(P>0.05);各时相点IL-10水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CPB可致Th1、Tc1细胞数量减少、Th2、Tc2细胞数量增加,进而上调机体抗炎反应,抑制致炎反应,失控后可能成为CPB术后并发症的发病基础及影响ICU病死率的重要因素。

前列腺素E_2对Th1/Th2和Tc1/Tc2淋巴细胞免疫平衡的调节

本研究探讨前列腺素E2(PGE2)对外周血T淋巴细胞体外增殖的影响,以及对Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞的免疫平衡的调节作用。不同浓度PGE2与抗CD3和抗CD28单克隆抗体(mAb)和健康成人外周血单个核细胞(MNC)共同培养120小时,测定细胞增殖程度。ELISA方法测定24、48、72和120小时细胞培养上清液中IFN-γ和IL-4浓度变化。流式细胞仪测定CD4+IL-4+T细胞和CD4+IFN-γ+T细胞以及CD8+IL-4+T细胞和CD8+IFN-γ+T细胞比值。各实验均以不加PGE2为对照。结果表明:①随PGE2的浓度增加,T细胞体外增殖的抑制率明显增高(p=0.001);T细胞增殖抑制率与PGE2浓度之间呈明显的正相关(r=0.889,p=0.000)。②实验组培养120小时的IFN-γ浓度与第72小时的IFN-γ浓度差异无显著性(p=0.917),对照组细胞培养上清液中的IFN-γ浓度随时间持续增高(p=0.046);实验组不同时间的IFN-γ浓度均明显低于对照组(p<0.05)。实验组在不同时间产生IL-4浓度无明显变化(p=0.400);对照组24小时细胞培养上清中IL-4浓度高于48、72和120小时(p值分别为0.007、0.003和0.002);实验组细胞培养24小时时IL-4浓度明显低于对照组(p=0.037);实验组细胞培养48、72和120小时与对照组IL-4浓度差异无显著性(p>0.05)。③实验组与对照组CD4+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.767);实验组CD4+IL-4+T细胞比例略高于对照组(p=0.051);实验组CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.011)。实验组与对照组CD8+IFN-γ+T细胞的比例无明显变化(p=0.441);实验组CD8+IL-4+T细胞的比例明显高于对照组(p=0.015);实验组CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值明显高于对照组(p=0.038)。结论:PGE2体外抑制外周血T细胞的增殖;PGE2作用24小时即可抑制IFN-γ和IL-4的产生,并且明显影响T细胞IFN-γ的高峰出现,对IFN-γ具有持续性的抑制作用,对IL-4的持续性影响并不明显;PGE2使CD4+IL-4+T细胞与CD4+IFN-γ+T细胞的比值和CD8+IL-4+T细胞与CD8+IFN-γ+T细胞的比值增加,调节T细胞的免疫反应向Th2/Tc2方向发展。

天花粉蛋白通过激活CD8Tc2亚群诱导人体免疫抑制

为了探讨天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的机制,采用抗原非特异性T淋巴母细胞增殖系统,筛选了37个Tk致敏的抑制性T细胞系。分析表明,健康人体内Tk相关抑制性T细胞的频率为5.0×10-7～10.8×10-7,该细胞系属CD8+TCRαβ+,细胞因子表达格局呈现向IL-4和IL-10明显偏移和IFN-γ分泌明显下降的格局。结合我们已有关于CD8+T细胞介导Tk相关应答而不显示细胞毒性的工作,可从表型和功能分析上确认,Tk针对体外人体淋巴细胞增值的免疫抑制,由CD8Tc2细胞介导。

二期梅毒患者外周血Th1/Th2及Tc1/Tc2的研究

目的探讨CD4+T细胞(Th细胞)和CD8+T细胞(Tc细胞)亚群在梅毒发病机理中的作用及其相互关系。方法采用流式细胞术检测经三色荧光抗体染色的二期梅毒患者外周血CD4+/IFN-γ+(Th1),CD4+1/IL-4+(Th2),CD4+/IFN-γ+/IL-4+(Tho),CD8+/IFN-γ+(Tc1),CD8+/IL-4+(Tc2),CD8+/IFN-γ+/IL-4+(Tc0)细胞含量。结果梅毒组Th1细胞含量、Th1/Th2,Tc1/Tc2比值均明显低于正常对照组(P<0.01),而Tc0和Tc2细胞含量显著高于正常对照组,其他细胞两组间无显著性差异(P>0.05)。结论二期梅毒患者Th1/Th2及Tc1/Tc2比值失衡,可能是机体不能完全清除梅毒螺旋体造成其潜伏体内形成长期感染的重要因素之一。

正常人及系统性红斑狼疮患者T细胞亚群流式细胞术初步分析

目的:研究正常人及系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血(PBMCs)T淋巴细胞亚群的平衡状态。方法:采用微量全血法在样本中标记多种荧光抗体,利用三色流式细胞技术对正常人及SLE患者外周血各T细胞亚群百分率进行检测和分析。结果:与正常人相比,在未经刺激的自然状态下,SLE患者PBMCs中表达白细胞介素(IL)-10的Th2细胞及Tc2细胞的百分率均显著增高;如经植物血凝素(PHA)和佛波醇乙酯(PMA)联合刺激,正常人表达干扰素-γ(IFN-γ)的Tc1细胞百分率显著升高,而SLE患者则仍表现为Th2和Tc2细胞百分率的明显增高。结论:SLE患者体内存在高IL-10应答、低IFN-γ应答状态,从而形成T细胞亚群平衡向Th2/Tc2偏移的态势。

病毒感染相关性哮喘患者外周血Tc1/Tc2的临床研究

目的 探讨CD+ 8T淋巴细胞亚群 (Tc1、Tc2 )、及Tc1/Tc2与病毒感染相关性哮喘发病的关系。方法 建立三色流式细胞分析法对病毒感染相关性哮喘、过敏性哮喘及正常对照者 (对照组 )外周血中CD+ 8T淋巴细胞内分泌细胞因子 (INF γ、IL 4)进行检测。结果 病毒感染相关性哮喘患者和过敏性哮喘患者中产生IL 4的Tc2的比例均高于对照组 (P <0 .0 1) ,且病毒相关性哮喘的比例也高于过敏组 (P <0 .0 5 )。结论 急性发作的病毒感染相关性哮喘患者的外周血CD8+ T细胞以Tc2亚群为主 。