PAMAM-D介导EGFP基因转染人舌鳞癌细胞的实验研究

目的:优化聚酰胺-胺型树枝状高聚物(PAMAM-D)纳米载体介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染人舌鳞癌Tca8113细胞的条件,以获得最佳的转染效率和细胞内表达。方法:采用不同的质粒DNA浓度、PAMAM-D代数、PAMAM-D∶DNA质量比以及转染时间等参数,在激光共聚焦显微镜下,观察PAMAM-D介导pEGFP-N1体外转染Tca8113细胞,检测转染效率,并应用单因素方差分析等统计学方法进行比较分析;结合细胞生长和荧光蛋白的表达情况,进一步评估和优化转染条件。结果:1.0μg质粒DNA与2.0μlG5PAMAM-D形成复合物,转染细胞2h后,可获得最佳的转染效率(42.1%);G5PAMAM-D转染效率显著高于G2PAMAM-D(42.1%比19.4%,P<0.05);PAMAM-D基因转移系统对细胞的生长增殖无显著影响(P>0.05)。结论:PAMAM-D纳米载体在优化的转染条件下,可安全高效地介导目的基因转染Tca8113细胞,是一种较理想的基因转移系统。

银杏酚酸提高Tca8113对化学治疗药物敏感性的研究

目的探讨银杏酚酸(GA)提高舌鳞状细胞癌Tca8113对化疗药物的敏感性及其机制。方法以甲噻唑四唑氮(MTT)检测单独用药与联合用药时Tca8113的生存率,蛋白质印迹技术检测不同作用时间GA对Tca8113中蛋白质激酶D(PkD)-2的表达和对其磷酸化的影响,利用shRNA干扰技术沉默Tca8113中pkD-2基因,分别用MTT和流式细胞术分析转染前后细胞的生长和程序性死亡。结果 GA可明显提高Tca8113对卡铂和紫杉醇的敏感性;与非磷酸化PkD-2蛋白质表达相比较,GA对Tca8113中磷酸化PkD-2蛋白质的表达呈时间依赖性抑制作用;shRNA技术干扰后的Tca8113与对照组细胞相比较,癌细胞内pkD-2 mRNA及其蛋白质表达均下降,癌细胞增殖率明显下降,癌细胞对化疗药物诱导的程序性细胞死亡率增高。结论 GA可能通过抑制PkD-2蛋白质磷酸化途径诱导Tca8113程序性死亡,增加癌细胞对化疗药物的敏感性。