Gli2调控Hedgehog通路活化对Tca8113细胞增殖、转移和上皮间充质转化的影响

目的 本研究通过在细胞水平检测Gli2对口腔癌细胞Tca8113增殖、生长、迁移和侵袭的影响,明确Gli2调控口腔癌细胞迁移和侵袭的分子机制。方法 本研究利用siRNA抑制Tca8113细胞中Gli2的表达,通过CCK-8、平板克隆以及transwell小室实验分别检测Gli2对Tca8113细胞增殖、生长、迁移与侵袭的影响。进一步利用qRT-PCR与Western blot实验探究Gli2调控Tca8113细胞恶性增殖和转移机制。结果 口腔癌细胞Tca8113中Gli2的mRNA和蛋白表达升高。干扰Gli2表达可抑制Tca8113细胞增殖、生长、迁移及侵袭。进一步研究发现干扰Gli2表达可抑制Hedgehog(Hh)通路关键因子的mRNA与蛋白表达。此外,干扰Gli2表达可显著影响上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)通路关键因子的mRNA与蛋白表达。结论 口腔癌病变过程中Gli2被异常激活,干扰Gli2表达显著抑制口腔癌细胞的增殖、生长、迁移和侵袭。Gli2通过调控Hh通路与EMT通路,进而影响口腔癌细胞的迁移和侵袭。本研究为阐明口腔癌的发病机制提供新思路,并为口腔癌的临床治疗提供新视角。

CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响

背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的：探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80μmol/L大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113，作用24、48和72 h后，并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组，通过MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用；以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周期的影响；结合Western blotting方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平的变化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示，随作用时间从24、48到72 h，大黄素对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系；由细胞周期检测结果显示，大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞；蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21表达水平明显降低，与空白对照组相比较，具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期，这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。

Cox-2在舌鳞癌细胞Tca8113增殖机制中的作用

目的:观察并探讨Cox-2在舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖机制中的作用。方法:通过免疫细胞化学检测Cox-2在Tca8113细胞中的表达;再通过建立裸鼠荷瘤模型及应用Cox-2特异性抑制剂(SC236)进行干预的方法,观察SC236对Tca8113细胞的增殖活性、致瘤性和成瘤速度的影响。结果:在Tca8113细胞中存在Cox-2的表达;将Tca8113细胞接种于裸鼠颈部皮下可成功诱导出组织学形态与人舌鳞癌基本一致、且表达Cox-2的移植瘤。SC236能够显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的生长(P<0.01),并明显延缓Tca8113细胞的成瘤速度(P<0.05)。结论:Cox-2在Tca8113细胞的增殖过程中可能发挥重要作用;Cox-2特异性抑制剂可显著抑制Tca8113细胞及其诱导的移植瘤的增殖和生长。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞周期及Fas蛋白表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞周期及Fas蛋白表达的影响。方法:用浓度为80、120和160μg/ml的野黄芩苷处理体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,用流式细胞技术观察细胞周期的变化;用蛋白印迹法定量检测Fas蛋白表达。结果:与对照组相比,加入不同浓度野黄芩苷后DNA合成前期(G1)细胞所占百分比(G1%)升高(P<0.05),160μg/ml野黄芩苷处理后DNA合成期(S)细胞所占百分比(S%)降低(P<0.05)。蛋白印迹法结果显示,随着药物浓度的增加,Fas蛋白表达量有增高趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:野黄芩苷可能通过抑制肿瘤细胞增殖,提高人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白的表达而达到抗肿瘤的作用。

加热与紫杉醇联合应用对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响

目的:探讨加热与紫杉醇联合应用对人舌癌Tca8113细胞增殖的影响,为临床热疗与紫杉醇化疗的联合应用提供依据。方法:将不同温度(39℃、41℃和43℃)及不同浓度紫杉醇(1.25μg/L、2.50μg/L、5.00μg/L、10.00μg/L和20.00μg/L)采用组内分组设计,共15个组,并设各浓度37℃对照组(5组)。在紫杉醇对人舌癌Tca8113细胞作用24h后加温40min,应用MTT比色分析法测定加热和紫杉醇联合应用对细胞增殖率的影响。结果:41℃组细胞增殖率与不同温度同剂量组比较,除与39℃1.25μg/L紫杉醇组比较差异无统计学意义外(P>0.05),与其余各组比较均降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05或0.01);39℃和43℃10μg/L紫杉醇组细胞增殖率与37℃对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:41℃时各浓度紫杉醇对Tca8113细胞均有增殖抑制作用;39℃或43℃联合10μg/L紫杉醇时Tca8113细胞增殖能力最强。

超声加热诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的机制探讨

目的:通过检测超声加热处理后Tca8113细胞凋亡的主要相关参数变化,探讨超声加热诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:应用超声热辐射系统,分别对Tca8113细胞进行不同温度、时间的加热处理,流式细胞仪连续检测42℃超声加热10min后Tca8113细胞早期凋亡和继发性坏死的动态变化,以及不同处理组的线粒体跨膜电位(ΔΨm)、Caspase-3活性的变化。采用SAS6.12统计软件包进行方差分析,比较各组均数间的显著性水平。结果:42℃超声加热(10min)Tca8113细胞后1h,即检测到细胞早期凋亡,6～8h达到高峰,以后迅速下降,12h后保持在较低水平,细胞的继发性坏死伴随着凋亡出现,在高水平保持一段时间,10h后开始下降。其与早期凋亡呈正相关(r=0.7909,P=0.0064);无论温度梯度(38℃～44℃,10min)还是时间梯度(42℃,10min～60min)的超声加热,均能导致ΔΨm显著降低(P<0.01)、Caspase-3活性显著升高(P<0.01),且两者具有显著相关性(温度梯度组r=0.89189,P=0.0029,时间梯度组r=0.9679,P=0.0003)。结论:超声加热能诱导Tca8113细胞凋亡,导致ΔΨm降低、Caspase-3活性水平升高。说明超声加热通过线粒体-Caspase途径,诱导Tca8113细胞凋亡。

染料木黄酮通过抑制VEGF表达抑制人口腔癌TCA8113细胞增殖

目的:观察染料木黄酮对人口腔癌TCA8113细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法、细胞计数法及集落形成实验检测细胞增殖;蛋白质免疫印迹检测血管内皮生长因子(VEGF)、细胞外信号调节激酶(ERK)及p-ERK的蛋白水平。结果:染料木黄酮能显著抑制TCA8113细胞的增殖,其抗增殖活性具有浓度依赖性;染料木黄酮还可剂量依赖性地降低VEGF、ERK及p-ERK的蛋白水平;VEGF的表达可被ERK特异性抑制剂U0126所抑制;VEGF受体拮抗剂阿西替尼及U0126均显著抑制TCA8113细胞的增殖。结论:染料木黄酮可抑制人口腔癌TCA8113细胞的增殖,其机制可能与其抑制ERK表达及活化,进而抑制VEGF的表达有关。

人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响。方法:分别用80、120、160μg/ml的野黄芩苷培养液处理体外培养的Tca8113细胞48 h后,采用免疫细胞化学法、RT-PCR技术观察野黄芩苷对Tca8113细胞Bcl-2、Bax表达的影响。结果:免疫细胞化学染色结果:随着野黄芩苷浓度的增高,Tca8113细胞中Bcl-2的阳性信号减弱,Bax的阳性信号增强(P<0.05)。RT-PCR检测结果:随野黄芩苷浓度的不断增高,Bcl-2 mRNA表达水平逐渐降低,Bax mRNA表达水平逐渐增高(P<0.05)。结论:野黄芩苷可以下调Tca8113细胞Bcl-2表达,上调Bax的表达,达到抗肿瘤的作用。

体外短期化疗诱导Tca8113细胞株产生耐药性的研究

目的 探讨短期接触化疗药物后肿瘤细胞耐药性的产生情况及与化疗药物的关系。方法 将Tca8113细胞株在体外与化疗药物短期接触后 ,采用RT_PCR法检测其在mRNA水平上多药耐药基因 (MDR1)及多药耐药相关蛋白基因 (MRP)的表达情况 ,采用荧光分光光度计检测细胞内药物浓度的变化 ,以耐药的白血病细胞株K5 6 2 ADM作为对照。结果 化疗对敏感的Tca8113细胞株有明显的抑制作用 ,而对K5 6 2 ADM抑制作用不明显 ;Tca8113细胞株短期接触化疗药物后 ,在mRNA水平可检测到微量的MDR1和MRP的表达 ;耐药的K5 6 2 ADM细胞内药物浓度明显低于敏感的Tca8113细胞株。结论 耐药性的产生与MDR1和MRP表达水平密切相关。Tca8113细胞株短期接触化疗后即有微量的MDR1mRNA和MRPmRNA的表达 。

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的:恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关。本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellularavianmyelocytomavirus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法:脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT-PCR检测转染前后fas(fattyacidsynthase)表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染后fasmRNA表达上调。正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加。结论:低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fasmRNA表达有关。

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用。方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响。结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析。结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05)。结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长。

不同浓度苦丁茶对TCA8113人舌鳞癌细胞的体外抗癌效果

对一种市售苦丁茶进行TCA8113人舌鳞癌细胞体外抗癌效果评价。通过MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)比色法实验、DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)荧光染色分析、RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)和Westernblot分析,研究其抗癌效果。通过MTT法测定苦丁茶对癌细胞体外生长抑制效果时发现,200μg/mL浓度的苦丁茶(75%癌细胞生长抑制率)对TCA8113人舌鳞癌细胞生长有相对最强的抑制效果。DAPI染色分析显示,与100、50μg/mL苦丁茶相比,使用200μg/mL浓度的苦丁茶,对TCA8113细胞有较强的诱其凋亡的能力。在RT-PCR和Westernblot分析结果中,凋亡因子Bax(B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x)、caspase-3(半胱天冬氨酸酶-3)、caspase-9(半胱天冬氨酸酶-9)的mRNA和蛋白质表达得到增强,Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病基因-2)表达减弱。综合分析得出,一定浓度的苦丁茶具有良好的防癌抗癌效果。

水蛭素联合阿霉素对TCA8113细胞株作用机制的研究

目的研究水蛭素与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌细胞株TCA8113生长的影响。方法通过MTT法测定其对TCA8113细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测凋亡及分析细胞周期的变化;利用吖啶橙-溴化乙啶(Ao-EB)染色观察水蛭素作用前后细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果水蛭素、ADM对TCA 8113有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈时间-剂量效应(P<0.05);水蛭素(15ATU/mL)与ADM(0.39～3.125 mg/L)联合给药可对TCA 8113产生增强的联合杀伤效果(P<0.05);流式细胞术检测提示水蛭素可促使细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集,并出现凋亡小体。结论水蛭素和阿霉素均对TCA8113有抑制作用,水蛭素的作用机制可能为诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于G0/G1期。水蛭素可增强TCA8113对ADM的敏感性,对于阿霉素化疗有增效减毒作用。

细胞外基质对舌鳞癌Tca8113细胞黏附性及迁移性的影响

目的 :观察细胞外基质成分在体外对舌鳞癌Tca8113细胞黏附和迁移的影响。方法 :运用细胞黏附实验和细胞迁移实验进行观察。结果 :显示随着纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原浓度升高 ,Tca8113细胞在相应的基质上黏附及迁移能力有所升高 ,低浓度时增强幅度更大 ,I、III型胶原在低浓度 ( <5mg/L)时表现为轻微促进黏附作用 ,高浓度时 ( >5mg/L)抑制黏附和迁移且随着浓度加大抑制作用更明显。结论 :纤连蛋白、层连蛋白、IV型胶原可通过诱导肿瘤细胞黏附和迁移 ,从而促进肿瘤细胞浸润和转移 ;而I、III型胶原则相反 ,可抑制肿瘤细胞的浸润和转移。

维生素E琥珀酸酯诱导舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对人舌鳞癌Tca8113细胞的凋亡诱导作用及其可能的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测VES对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用;应用流式细胞仪分析不同质量浓度VES处理后舌鳞癌细胞的凋亡率;Fas中和抗体进行阻断实验;以细胞免疫化学法和流式细胞仪检测VES处理后肿瘤细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达的变化。结果不同质量浓度的VES处理后,舌鳞癌细胞的生长受到明显的抑制,肿瘤细胞的凋亡率显著上升,呈现时间依赖性和剂量依赖性;Fas中和抗体进行阻断后,细胞凋亡率显著下降;VES处理后细胞Fas蛋白表达增强;流式细胞仪检测细胞表面Fas平均荧光强度也显著升高。结论VES对舌鳞癌细胞具有凋亡诱导作用,其作用机制与肿瘤细胞表面Fas蛋白表达的上调有关。

X线对舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度影响的动态观察

【目的】探讨放射线对人舌鳞癌细胞系Tca8113端粒长度变化的影响。【方法】采用流式原位杂交法(FLOW-FISH)检测Tca8113细胞的端粒相对长度(RTL)。【结果】与未照射细胞相比,经X线处理后,Tca8113细胞RTL值明显下降(P<0.05);在照射后1h至3h间,不同照射剂量的细胞RTL值均有一定程度上升;5h时,除2Gy组外,其它各照射剂量组的RTL值均下降。【结论】经X线照射后,Tca8113细胞端粒明显缩短。端粒缩短可能是放射损伤的机制之一。

土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞凋亡及其对细胞周期的影响

目的探讨土贝母制剂联合热疗诱导Tca8113细胞(人舌癌细胞株)增殖抑制率及其对细胞周期各时相的影响,以确定联合方案是否具有协同效应。方法应用MTT比色法检测Tca8113细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期各时相的变化,电子显微镜观察亚细胞结构改变。结果单纯土贝母组与联合热疗组相比,Tca8113细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01),且Tca8113细胞周期进程发生明显改变(G1期细胞增多,S期细胞减少,凋亡率升高);电子显微镜下可见细胞染色质趋边凝集、线粒体肿胀,可见凋亡小体。结论土贝母制剂联合热疗可提高Tca8113细胞增殖抑制率,抑制Tca8113细胞G1期向S期转化进程,细胞凋亡率升高及亚细胞结构改变。

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡及caspase-8表达的影响

目的探讨野黄芩苷诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的可能机制。方法将体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞分成对照组和不同浓度野黄芩苷组(浓度分别为80、120、160 mg/L),每组设3个复孔。采用Tunel检测细胞凋亡情况;采用免疫细胞化学法和Western blot法检测caspase-8蛋白表达情况。结果 (1)80、120、160mg/L野黄芩苷组Tca8113细胞凋亡率高于对照组[(17.63±0.25)%、(36.23±0.36)%、(51.84±0.58)%vs(4.45±0.27)%,P<0.05]。(2)与对照组相比,80、120、160 mg/L野黄芩苷组caspase-8蛋白的表达增加(0.283±0.040 vs0.474±0.031、0.592±0.077、0.781±0.020,P<0.05)。结论野黄芩苷能明显诱导舌鳞癌细胞Tca8113的凋亡,可能与上调caspase-8蛋白表达有关。