人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;

c-myc转染对舌鳞癌细胞系Tca8113fas表达和凋亡的影响

背景与目的:恶性肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖有关,还与细胞的凋亡异常有关。本实验目的在于研究原癌基因c-myc(cellularavianmyelocytomavirus)介导舌鳞癌细胞凋亡的可能性和分子机制。方法:脂质体法将含c-myc的重组质粒转染到舌鳞癌细胞Tca8113,G418筛选阳性克隆,RT-PCR检测转染前后fas(fattyacidsynthase)表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡水平。结果:转染后fasmRNA表达上调。正常培养条件下,转染前后细胞凋亡指数无明显改变,低浓度血清条件下细胞凋亡指数增加。结论:低营养状态下c-myc可以介导舌鳞癌细胞凋亡,凋亡机制可能与上调fasmRNA表达有关。

舌鳞癌细胞系Tca8113 Fas表达水平与凋亡的关系

目的研究舌鳞癌Tca8113细胞Fas表达水平与细胞凋亡的关系,了解细胞凋亡的相关机制。方法采用脂质体法将含Fas基因片段的真核表达重组质粒pBK-Fas导入舌鳞癌Tca8113细胞,检测转染前后FasmRNA表达水平、Fas蛋白阳性表达率和阳性表达强度。以及细胞凋亡指数,分析细胞凋亡的相关因素。结果Fas转染不提高舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白阳性表达率(P>0.05),但能提高FasmRNA表达水平、Fas蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数。各项指标分别由转染前的0.201±0.015,31.02±4.63,0.88%±0.16%上升到0.399±0.073,54.32±6.38和10.21%±1.46%,统计分析均有显著性差异(P<0.01)。结论Fas介导Tca8113凋亡与Fas蛋白阳性率可能无关,而与Fas蛋白阳性强度有关。Fas蛋白激活细胞凋亡可能存在阈值。只有Fas表达达到一定强度,细胞凋亡才被激活。

甘草甜素促进口腔鳞状细胞癌细胞系Tca8113的凋亡

目的探讨甘草甜素(GL)对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞系凋亡的作用及相关机制。方法用不同浓度甘草甜素(0、10、20、40与80μmol/L)孵育Tca8113细胞后,MTT法检测细胞存活率;流式细胞计量术Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡; JC-1染色法观察线粒体膜电位;免疫印迹检测线粒体及胞质中cytochrome C (cyt C)蛋白表达。结果与对照组相比,甘草甜素成浓度依赖性抑制Tca8113存活率(P<0. 05);诱导Tca8113细胞的凋亡(P<0. 05); Tca8113细胞的线粒体膜电位显著下降(P<0. 05);细胞中的Cyt C由线粒体向胞质转移(P<0. 05)。结论甘草甜素可能通过线粒体凋亡通路促进Tca8113细胞的凋亡。

E-Cadherin和CD44v6对Tca8113细胞系侵袭性影响的实验研究

目的通过检测粘附分子在立体胶原凝胶培养系统中对口腔黏膜鳞状细胞癌(SCC)细胞侵袭性的影响,加深了解口腔癌细胞侵袭和转移的可能机制,并评估其作为口腔癌预后判断指标的可行性。方法应用免疫组织化学方法检测粘附分子E-cadherin(E-cad)和CD44v6在舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的表达;同时在体外建立鼠尾胶原凝胶三维立体侵袭系统,在此系统中观察粘附分子对Tca8113细胞侵袭胶原能力的影响。结果免疫组织化学检测显示,E-cad在Tca8113细胞有阳性表达,而CD44v6表达阴性;胶原凝胶侵袭实验表明:E-cad可以有效地减少Tca8113细胞在胶原凝胶中的浸润细胞数和程度(0.01<P<0.05)。结论虽然粘附分子只是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素之一,但体外实验表明:E-cad具有抑制肿瘤细胞胶原侵袭的作用,提示E-cad有可能成为一种较好的临床评判口腔黏膜鳞癌预后的有用指标。

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的 观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法 脂质体介导真核表达载体PBBS2 12 -hTR转染Tca8113细胞系 ,运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡 ,并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化。结果 转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓 ,群体倍增时间较未转染组和转染空质粒组明显延长 ,流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降 ,有亚二倍体凋亡峰出现 ,转染后细胞 p2 1基因表达水平显著增高 ,裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱。 结论 反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长 ,同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡 。

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。

TGF-β_1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖和凋亡影响的研究

目的 研究TGF β1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖与凋亡的影响。方法 以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113诱导产生的耐药细胞系Tca8113/CDDP为研究对象。应用ELISA法检测转化生长因子TGF β1在Tca8113/CDDP细胞中的表达水平。另在体外用不同浓度的TGF β1对Tca8113/CDDP细胞进行作用 ,通过吉姆萨(Giemsa)染色、MTT比色法和DNA琼脂糖凝胶电泳 ,观察Tca8113/CDDP细胞的凋亡情况。结果 ELISA检测可知Tca8113/CDDP细胞内和无血清培养液中的TGF β1的表达水平均低于Tca8113(P <0 .0 1)。体外诱导凋亡实验 ,TGF β1的浓度高于 0 .1ng/ml时 ,Tca8113/CDDP即有显著的凋亡特征出现 ,细胞皱缩脱落。Geimsa染色可见凋亡小体形成 ;MTT法显示Tca8113/CDDP细胞的凋亡与TGF β1的浓度有一定的相关性 ;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯状条带。结论 Tca8113/CDDP自身的TGF β1的表达水平与其增殖状态有关 ;外源TGF β1(0 .1ng/ml)可以显著的诱导Tca8113/CDDP凋亡。

高表达CD151细胞系的构建

目的构建高表达CD151细胞系Tca8113CD151,为研究CD151在肿瘤细胞迁移及肿瘤转移中的作用和相关机制提供实验模型。方法构建pcDNA31CD151HA重组体,采用磷酸钙共沉淀法转染Tca8113细胞,经G418筛选抗性克隆。通过RTPCR和Westernblot分别检测这些克隆CD151基因的转录和翻译。结果成功构建真核表达重组体pcDNA31CD151HA;Tca8113CD151细胞系在mRNA和蛋白质水平高表达外源CD151。结论构建了稳定高表达CD151的细胞系Tca8113CD151,为探讨CD151基因在肿瘤转移中的作用及其相关机制奠定了实验基础。

MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究

目的构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系。方法采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达。结果通过PCR技术获取了MICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的基因MICA在转染细胞中为过表达。结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础。

超声热疗联合顺铂治疗口腔鳞癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的通过观察超声加热及联合顺铂对人舌癌裸鼠移植瘤的疗效及其对正常组织的影响,评价超声热疗与化疗药物联合应用的效应。方法裸鼠背部皮下接种Tca8113细胞后,随机分为4组,分别进行以下处理:(1)局部超声热疗;(2)顺铂(CDDP)化疗;(3)超声热疗联合CDDP化疗;(4)平行对照。治疗结束后观察4周,评价指标为:(1)肿瘤体积的动态观察;(2)按肿瘤体积、瘤重计算抑瘤率;(3)计算热增比,评价热疗与化疗联合应用的效应。结果根据肿瘤体积动态观察,单独应用超声热疗或顺铂化疗均可导致肿瘤生长抑制,瘤重抑瘤率分别为78.11%和18.43%。超声热疗联合顺铂化疗取得了明显的治疗效果,瘤重抑瘤率为97.86%,热增比为1.2。结论超声加热技术温度控制准确、可靠,适合个体化治疗的要求。超声热疗联合CDDP具有明显的抑瘤效应,两者具有协同作用。

《口腔颌面外科杂志》参考文献书写要求示例

（1）连续出版物（期刊）按照以下格式,注意写明卷（期）号和起-止页码,并注意英文期刊名的正确缩写（同PUBMED）。[1]Motamed M,Laughame D,Bradley PJ,et al.Mangement of chronic parotitis：a review[J].J laryngol Otol,2003,117（7）：521-526.[2]余杨,邱蔚六,吕燕,等.Tca8113细胞系下颌下淋巴结转移动物模型的建立[J].口腔颌面外科杂志,2009,19（3）：159-163.

《口腔颌面外科杂志》参考文献书写要求示例

①连续出版物（期刊）按照以下格式,注意写明卷（期）号和起-止页码,并注意英文期刊名的正确缩写（同PUBMED）。 [1]Motamed M,Laughame D,Bradley PJ,et al.Mangement of chronic parotitis：a review[J].J laryngol Otol,2003,117（7）：521-526. [2]余杨,邱蔚六,吕燕,等.Tca8113细胞系下颌下淋巴结转移动物模型的建立[J].口腔颌面外科杂志,2009，19（3）：159-163．