TdT介导dUTP缺口末端标记技术检测肝细胞癌凋亡

应用ＴｄＴ介导ｄＵＴＰ末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测了３０例肝细胞凋亡病变，均见不同范围的阳性：单个癌细胞阳性１４例；点状阳性７例；小片状阳性６例；大片状阳性３例。偶见胞浆阳性。该技术快速、简便、灵敏、特异。

脑膜瘤细胞凋亡的意义及其检测方法的比较

目的 探讨脑膜瘤细胞凋亡的意义,分析TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、流式细胞术(FCM)和透射电镜3种检测方法的优缺点。方法 应用TUNEL、FCM检测47例脑膜瘤的凋亡指数(AI),同时用透射电镜观察其中15例凋亡细胞的超微结构改变。结果 经TUNEL和FCM检测,不典型及恶性脑膜瘤的AI高于良性脑膜瘤,复发组AI高于非复发组。经FCM检测的凋亡指数高于TUNEL法检测结果,二者呈正相关。透射电镜也证实了凋亡细胞的超微结构改变。结论 细胞凋亡是脑膜瘤的一种重要生物学特征,它与肿瘤的不典型或恶性改变以及预后有关,检测AI有助于判断脑膜瘤的复发倾向。TUNEL和FCM用于凋亡的定量检测,FCM的敏感性高于TUNEL,而透射电镜是凋亡定性的可靠方法。

大鼠肺移植供肺保存过程中细胞死亡类型的动态变化

目的通过对供肺保存过程中细胞凋亡和细胞坏死的动态变化的研究,探讨建立一种可以准确评估供肺保存质量的实验模型。方法清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠42只,体重250～300g,预先分为7组,每组6只。整体获取心肺,置于4℃的新鲜制备的低钾右旋糖酐（LPD）溶液中保存。保存不同的时间（0、2、4、6、12、18、24h）后,通过主肺动脉向肺内灌注20mL的500mmol/L锥虫蓝、20mL生理盐水和10mL4%的多聚甲醛后固定,蜡块包埋后按4μm层厚切片。在光学显微镜下观察锥虫蓝染色情况;另一方面作TUNEL染色和Hoechst染色,在荧光显微镜下观察,严格按照盲法原则由两位研究者对死亡细胞进行分类计数。结果随着供肺低温保存时间的延长,细胞死亡数量上逐渐增加,而且细胞的死亡类型上发生动态变化。在低温保存的条件下,4h组才开始有少量的坏死细胞出现,随着保存时间的逐渐延长,细胞坏死也逐渐增加,在供肺保存18h以上组,坏死细胞显著增加;而细胞的凋亡开始于供肺保存2h组,在供肺保存12h组达到高峰,约占所有细胞的9%,在供肺保存18h组基本消失。结论通过对不同保存时间的供肺进行锥虫蓝、TUNEL、Hoechst三染色的方法,能很好的显示供肺保存后的细胞凋亡和坏死的情况。

玉米CMS-S小孢子败育过程中的细胞程序性死亡

以玉米(Zea maysL.)S型细胞质雄性不育系(CMS-S)的1对近等基因系S-Mo17Rf3Rf3和S-Mo17rf3rf3为材料,采用TdT介导的dUTP DNA末端标记(TUNEL)、细胞色素C免疫原位杂交和DNA寡聚核小体片段电泳等方法,分别在细胞学水平和DNA水平上研究了玉米CMS-S小孢子败育的细胞程序性死亡(PCD)过程。结果表明,在花粉母细胞减数分裂后的四分体解离时期,不育花药的绒粘层细胞较可育花药提前裂解;在不育系S-Mo17rf3rf3花药和花粉S-rf3中均明显出现PCD过程的DNA片段化以及线粒体细胞色素C外渗的现象,证明玉米CMS-S的花粉败育与花药绒粘层细胞的提前凋亡和小孢子细胞的程序性死亡有关。

乳腺癌组织中p51基因的表达及其意义

背景与目的:研究p51基因与乳腺癌的关系。材料与方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(Terminaldeoxynucleotidyltransferasebiotin-dUTPnickendlabeling,TUNEL)、RT-PCR等技术检测乳腺癌组织p51基因的表达及其与细胞凋亡、激素受体的关系。结果:乳腺癌(45例)组织p51基因表达(46.7%)高于良性乳腺病变(35例)组织(11.4%);淋巴结转移阳性者p51基因表达(90.5%)明显高于阴性者(8.3%);p51基因表达与雌激素、孕激素受体无相关性(P>0.05);p51基因表达阳性的肿瘤细胞凋亡率与阴性细胞差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P51基因表达增多可能与乳腺癌发病及转移有关。