TdT法分析羟基喜树碱对人大肠癌细胞凋亡的影响

目的：喜树碱（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ，ＣＰＴ）是从植物喜树中分离得到的一种生物碱，在６０年代就作为一种抗肿瘤药物用于临床。近年来，又从喜树中分离到比其更具抗癌活性的羟基喜树碱（ＨＣＰＴ），且无论从基础实验研究，抑或从临床应用上均发现ＨＣＰＴ是一种有效的抗癌药物。随着分子生物学理论和技术的不断发展，目前得知许多抗肿瘤药物是通过诱导肿瘤细胞凋亡来发挥其治疗作用的。

放射线和加热诱导CNE-2细胞系发生凋亡:几种检测方法的比较

比较了荧光显微镜观察法，流式细胞仪检测法及ＴｄＴ末端标记法检测高能Ｘ线及加热诱导人鼻咽癌细胞系的凋亡指数。结果发现ＣＮＥ－２细胞系受照２、４、８、１２及２０Ｇｙ后三种检测方法的凋亡指数荧光法分别为１５％、２０％、３１％、３８％及４８％；流式法为１６．５％、２０．１％、３３％、４２．３％及４７．５％；ＴｄＴ法为２４．６％、３０．０％、４０．６％、５０．１％及５８．７％。我们使用ＴｄＴ法作为加热诱导凋亡的检测方法，发现于４１℃培养０．５、１、１．５、２．５ｈ后凋亡指数分别为１６．７％、２４．５％、３０．７％及４３％。结果提示ＴｄＴ末端标记法是比较敏感的检测方法，ＣＮＥ－２细胞系是对放。

DNA末端定量及其应用的研究

为定量DNA断裂末端评价DNA的降解程度 ,以饱和标记 (TdT)法定量DNA末端最大标记量 (Lmax) ;并用流式细胞分析 (FCA)、原位DNA末端标记 (TUNEL)和琼脂糖电泳检测或标记DNA降解片段 .结果发现 :a TdT法最低检测限 5ngDNA ,线性范围为 5～ 5 0 0 0ng ,较检测DNA降解片段的琼脂糖电泳敏感 2 0 0倍以上 ;b 地塞米松 (DEX)诱导淋巴瘤 (Raji)细胞凋亡产生的Lmax呈DEX剂量与诱导时间依赖性增加 ;c 自发性高血压大鼠 (SHR)心肌的Lmax呈年龄依赖性增加并与正常对照鼠 (WKY)相比差异非常显著 (P <0 0 1) ;d TdT法定量Lmax与FCA、TUNEL或电泳分析的相关性良好 (r >0 98) .TdT法定量Lmax敏感、特异、准确 ,可应用于分子生物学、细胞生物学 。

应用DNA3'末端转移推测死亡时间

目的根据机体死后组织细胞DNA降解规律,研究其与死亡时间之间的关系。方法SD大鼠处死后,在不同死亡时间段取肝、肾、脾组织提取DNA。根据DNA3'末端转移的方法(TdT法)将dUTP结合到DNA的3'末端,检测反应剩余的dUTP量,从而推测机体死后不同时间段DNA的降解情况。结果经对剩余dUTP检测发现,dUTP的剩余量随死亡时间延长而减少,说明DNA降解与死亡时间存在一定的关系。结论根据机体死后DNA降解规律可用于早期死亡时间的推测。

磷烯菌素诱导HL-60细胞凋亡及其与增殖周期的关系

目的 探讨一种新型的DNA拓扑酶 Ⅱ抑制剂磷烯菌素 (FST)对人急性粒细胞白血病细胞株HL 60的杀伤机理。方法 采用流式细胞术 (FCM )、TdT联合FCM及LadderDNA三种方法研究FST对HL 60细胞凋亡的诱导作用及其与增殖周期的关系。结果 :FCM (乙醇抽提法 )显示 :1 0 μmolFST作用 6h未引起HL 60凋亡 ,1 0 0 μmol/L时出现明显“亚G1 峰” ,但1 0 0 0 μmol/L诱导时 ,却不出现凋亡而呈“冰冻”现象。TdT联合FCM表明 :1 0 μmol/LFST作用 6h ,即有明显细胞凋亡 ,且凋亡发生在整个细胞周期。LadderDNA测定提示 :1 0 0 μmol/LFST作用HL 60细胞 6h ,其DNA凝胶电泳出现典型梯状图谱。结论 1 FST诱导HL 60细胞死亡具有异质性 :低剂量触发凋亡 ,高剂量诱导坏死。 2 TdT联合FCM是一种灵敏的凋亡检测手段 ,它能同时测定细胞DNA含量及断裂 ,故能用以研究细胞凋亡及其与增殖周期的关系 ;3