端粒重复因子2-P53信号通路在糖尿病心肌病中的作用

目的探讨端粒重复因子2-P53(TRF2-P53)信号通路在糖尿病心肌病(DCM)中的作用。方法体内研究予以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射制造1型糖尿病小鼠模型,9周后超声检测明确DCM模型构建成功。小鼠心脏样本采用免疫印迹(WB)检测TRF2表达水平,采用免疫荧光检测P53表达水平。体外研究予以高糖刺激乳鼠心肌细胞,并采用WB检测TRF2表达水平,采用免疫荧光检测P53表达水平。TRF2 siRNA降低乳鼠心肌细胞TRF2的表达后,采用TUNEL检测凋亡情况,采用衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测衰老情况,采用WB检测P53表达水平。结果体内研究发现,与WT小鼠相比,DCM小鼠TRF2表达下降,P53表达增加。体外研究发现,高糖刺激引起乳鼠心肌细胞TRF2表达下降,P53表达增加。TRF2 siRNA转染降低乳鼠心肌细胞TRF2水平后可促进凋亡和衰老,增加P53表达。结论TRF2-P53信号通路在DCM中起了重要的调控作用。

动脉灌注化疗栓塞联合放射粒子植入治疗原发性肝癌患者疗效及其对肝组织TRF1和TRF2表达的影响

目的探讨动脉灌注化疗栓塞术(TACE)联合放射粒子植入治疗原发性肝癌(PLC)患者疗效及其对肝组织端粒重复序列结合因子(TRF)1和TRF2表达的影响。方法 2012年12月～2015年12月我院诊治的108例PLC患者,采用抛硬币法随机分为观察组54例和对照组54例。对照组接受单纯TACE治疗,观察组在TACE治疗的基础上接受^(125)I放射粒子植入治疗。肝穿取得肝组织,采用SP法检测肝组织TRF1和TRF2表达情况。结果在治疗3 m末,观察组客观缓解率为79.6%,显著高于对照组的61.1%(x2=4.441,P<0.05);观察组血清CEA和AFP水平分别为(273.7±38.1) ng/ml和(820.4±130.3)μg/L,显著低于对照组的【(312.5±33.9) ng/ml和(1080.1±121.3)μg/L,P<0.01】;观察组癌旁肝组织TRF1表达量为(9.7±2.3),显著高于癌组织的【(4.2±1.8),P<0.01】,而观察组癌组织TRF2表达量为(9.2±2.2),显著高于癌旁肝组织的【(3.8±2.6),P<0.01】;观察组1 a生存率显著高于对照组[96.3%(52/54)对85.2%(46/54),x^2=3.967,P=0.046]。结论采用TACE联合放射粒子植入术治疗PLC患者安全有效,能够有效降低外周血肿瘤标志物水平,调节肝癌组织TRF1和TRF2表达,抑制肿瘤组织的生长,阻止病情进展,有利于患者康复。

端粒酶逆转录酶和端粒重复结合因子2在大鼠心肌细胞发育过程中的表达

目的:观察大鼠心肌细胞发育过程中端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒重复结合因子2(TRF2)的表达,探讨TERT活性与心肌细胞分化和发育的关系。方法:应用免疫组化方法分别检测胎鼠孕16d、出生后2、5、10、20d的大鼠心脏标本,观察TERT和TRF2的表达和分布。结果:TERT分布于胎鼠心肌细胞的胞质和细胞核中,出生后2～20d,TERT在胞质的表达呈下降趋势。TRF2主要分布在胎鼠心肌细胞的胞核中,出生后5～20d,TRF2表达阳性的心肌细胞数目逐渐减少。结论:在大鼠心肌细胞发育过程中,TERT和TRF2的表达下调促使部分细胞永久地退出细胞周期而进入终末分化;TERT活性受到了心肌细胞发育过程的调节。

急性白血病细胞端粒结合蛋白2表达的研究

目的:研究人类白血病细胞株及原代白血病细胞中人端粒结合蛋白2(TRF2)的表达。方法:应用实时定量RT-PCR,检测白血病细胞株及原代白血病细胞中TRF2 mRNA的表达,应用Western Blot,检测TRF2蛋白的表达。结果:T淋巴系白血病细胞株的TRF2表达显著高于骨髓单个核细胞和髓系白血病细胞株。在原代白血病细胞中,M0和M1亚型患者白血病细胞TRF2的表达高于其他各亚型急性髓系白血病(AML)患者。结论:预后差的AML患者和T细胞恶性肿瘤细胞株高表达TRF2,提示TRF2高表达可能和白血病的预后有关。

tRF-1:30对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达的影响

目的探讨tRF-1:30(tRF-1:30-Gln-CTG-4)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)中炎性因子表达的影响及分子机制。方法将小鼠RTECs分为Control组、HG组、HG+tRF-1:30 mimic组、HG+tRF-1:30 NC组、HG+si-IKZF2组(IKAROS家族锌指2,tRF-1:30抑制剂)、HG+si-NC组。实时荧光定量PCR检测tRF-1:30、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IKZF2 mRNA的水平。酶联免疫吸附试验检测炎性因子水平,Western blot检测IKZF2蛋白表达水平,双萤光素酶报告实验验证tRF-1:30和IKZF2的关系。结果在HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平显著升高,而tRF-1:30表达水平显著降低。过表达tRF-1:30显著降低HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平。IKZF2在HG诱导的RTECs中显著高表达,进一步敲低IKZF2可抑制炎性因子的释放,而过表达tRF-1:30后IKZF2的表达水平下调。双萤光素酶报告实验进一步验证tRF-1:30与IKZF2可能存在靶向关系。结论过表达tRF-1:30可能通过负向调控IKZF2的表达进而抑制HG诱导的RTECs炎性因子的释放。

端粒保护蛋白TRF2在肿瘤发生和治疗中作用机制的研究进展

端粒重复序列结合因子2(telomeric-repeat binding factor 2,TRF2)是一种重要的端粒保护蛋白,与端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)、端粒重复序列结合因子1(telomeric-repeat binding factor 1,TRF1)、相互作用核蛋白2(TRF1-interacting nuclear protein 2,TIN2)、阻滞活化蛋白1(repressor activator protein 1,Rap1)以及TPP1,5个核心蛋白通过一系列相互作用共同形成端粒保护蛋白复合体(shelterin)以维持端粒结构和功能的稳定性和完整性。越来越多的研究显示TRF2在多种肿瘤中异常表达并与肿瘤的发生,肿瘤细胞的耐药以及肿瘤血管的生成密切相关。因此,本文就TFR2的结构与生理功能,以及其在肿瘤发生,发展与治疗中的作用研究进展进行综述,以期为肿瘤的预防和治疗提供新的思路。

人端粒保护蛋白POT1和TRF2在喉癌中的表达

目的探讨人端粒保护蛋白1(human protection of telomeres1,POT1)和端粒重复序列结合因子2(telomeric repeat binding factor-2,TRF2)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)及声带息肉中的表达及意义。方法采用间接免疫荧光法检测20例喉癌、19例声带息肉中POT1和TRF2的表达水平。结果POT1和TRF2在喉癌中的阳性表达率为65.00%和70.00%,在声带息肉中未见POT1和TRF2的表达。POT1在低分化喉癌中的表达高于POT1在高及中分化喉癌中的表达(P<0.05),POT1的表达水平在喉癌的不同发生部位、T分级、临床分期及淋巴结转移率中的差异无统计学意义(P<0.05)。TRF2的表达程度与肿瘤的发生部位、组织病理、T分级、淋巴结转移率和临床分期均无关(P<0.05)。相关分析显示喉癌中POT1的表达与TRF2的表达无相关性(P<0.05)。结论POT1和TRF2在喉癌中高表达,两者在喉癌的发生中可能起重要作用。POT1在喉癌中的表达与肿瘤的分化程度有关。

TRF2小干扰RNA载体的构建及表达

目的:构建TRF2小干扰RNA载体,观察其在胃癌细胞中的表达．方法:根据pSilencer3．1-H1载体要求设计两对小干扰RNA,退火后连接入载体相应位点．经双酶切及测序鉴定后分别转染多药耐药衍生胃癌细胞SGC7901／ADR和SGC7901/VCR． G418选择培养液培养2 mo选取转染组及对照组细胞克隆．MTT法检测转染对细胞生长增殖速度的影响．细胞用阿霉素和足叶乙甙处理 6h后Western blot法检测TRF2表达．结果:成功构建TRF2小干扰RNA载体,建立稳定转染细胞株,转染后TRF2表达明显降低,对细胞的生长增殖速度无明显影响(P>0．05)．结论:成功构建TRF2小干扰RNA载体及稳定转染细胞株．

脐血铅对端粒长度影响及其与TRF1和TRF2相关性

目的研究低水平脐血铅对新生儿端粒长度的影响及其与端粒重复序列结合因子1(TRF1)、端粒重复序列结合因子2(TRF2)的相关性。方法收集孕期无急慢性疾病的足月顺产儿脐血88例,采用原子吸收光谱法测定脐血铅浓度,以脐血铅浓度30μg/L为界分为安全浓度组(脐血铅浓度<30μg/L)48例、中毒浓度组(脐血铅浓度≥30μg/L)40例,采用全血提取基因组法提取两组脐血DNA,荧光定量PCR法测定基因组DNA的端粒长度,ELISA法测定TRF1、TRF2的浓度。结果安全浓度组端粒长度长于中毒浓度组,差异有显著性(t=2.479,P<0.05)。端粒长度与脐血铅浓度呈负相关(r=-0.301,P<0.05),TRF1与脐血铅浓度呈正相关(r=0.528,P<0.05),TRF2与脐血铅浓度呈负相关(r=-0.361,P<0.05)。结论脐血铅可通过增加TRF1表达、减少TRF2的表达来干扰新生儿端粒长度的延长,进而导致端粒长度的缩短。

胎儿心肌细胞端粒相关蛋白的表达

目的探讨端粒酶逆转录酶(TERT)、端粒酶相关蛋白1(TP1)和端粒重复结合因子2(TRF2)表达与心肌细胞分化和发育的关系。方法应用S-P免疫组化方法分别对不同月份胎儿心肌细胞TERT、TP1和TRF2蛋白表达进行检测。结果胎儿心肌细胞核中TERT的表达随胎龄增加而减少;胎儿心肌细胞胞浆TP1和TRF2的表达随胎龄增加而增加。结论TERT、TP1和TRF2表达方式可能促使部分心肌细胞永久退出细胞周期而进入终末分化和肥大阶段。

胶质瘤细胞端粒结合因子与ING1基因表达关系的研究

端粒结合因子(TRF1和TRF2)及抑癌基因ING1表达异常减少与多种颅外肿瘤的发生、发展密切相关。本研究是为了探讨胶质瘤细胞TRF1、TRF2和ING1基因表达变化的相互关系及其在胶质瘤发生、发展中的作用。方法:采用mRNA原位杂交和免疫组化染色等方法观察了70例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果:本组70例胶质瘤INGl mRNA、P33^(ING1)蛋白、TRF1蛋白和TRF2蛋白的阳性表达率分别为94.3%、88.6%、100.0%和98.6%,I～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较它们的阳性表达率均无显著性差异(P>0.05)。表达INGl mRNA、P33^(ING1)蛋白、TRF1蛋白和TRF2蛋白的四种阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.739～0.847,P<0.001),并均随肿瘤级别升高而相应减少,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:以上指标对评价胶质瘤的生物学行为均有重要参考价值,胶质瘤细胞中TRF1蛋白及TRF2蛋白表达异常减少可能是导致其ING1基因表达下调的重要因素,它们的表达异常减少可能在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。

斑马鱼体内氧化损伤标志物筛选

目的:探讨以端粒为靶点的氧化损伤标志物的筛选,进而可能可以用来临床上早期发现或预报氧化损伤。方法:采用端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因敲除(TRF2-/-)斑马鱼胚胎作为氧化损伤模型,RT-q PCR法检测野生型和TRF2-/-斑马鱼胚胎中TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达情况。构建pCS2-PUM3、pCS2-PACSIN3质粒并体外转录后,将mRNA分别显微注射至TRF2-/-斑马鱼受精卵中,比较注射组与未注射组斑马鱼畸形率。结果:RT-q PCR结果表明,与野生型斑马鱼胚胎相比,TRF2-/-斑马鱼胚胎TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达量下降(P<0.05)。显微注射PUM3 mRNA至TRF2-/-斑马鱼受精卵后斑马鱼胚胎畸形率下降(P<0.05)。结论:TRF2能影响氧化应激相关基因PUM3、PACSIN3的表达,且PUM3能补救TRF2缺失造成的氧化损伤相关器官畸形。

端粒重复序列结合蛋白1与2在系统性红斑狼疮患者中的表达变化及其临床意义

目的探讨端粒重复序列结合蛋白（TRF）1和TRF2在SLE发病中可能的作用。方法①收集107例SLE患者（根据病情是否活动分为活动期组40例与稳定期组67例，根据是否合并肾脏损害分为肾损组46例及无肾损组61例）、41名健康体检者为健康对照组的外周血、实验室资料及临床资料。②采用实时荧光定量多聚酶链反应（RT-qPCR）及蛋白质印迹法检测不同组别TRF1、TRF2转录水平和蛋白表达水平。③采用SPSS19．0软件行独立样本t检验、单因素方差分析及Kruskal．Wallis非参数检验，Speannan相关分析进行统计分析。结果①TRF1、TRF2转录及蛋白水平在SLE活动期组（TRF1：0．0031±0．0033；TRF2：0．0105±0．0648）、肾损组（TRF1：0．0023±0．0026；TRF2：0．0043±0．0033）分别高于稳定期组（TRF1：0．0012±0．0011；TRF2：0．0042±0．0086）、无肾损组（TRF1：0．0013±0．0018；TRF2：0．0034±0．0072）及健康对照组（TRF1：0．0012±0．0030；TRF2：0．0034±0．0027）比较差异有统计学意义（P均〈0．05），健康对照组与稳定期组、无肾损组分别比较差异无统计学意义；②Spearman相关性分析发现在SLE患者中TRF1转录水平与TRF2（r=0.356，P〈0.01）、ESR（r=0.365，P〈0.05）正相关，TRF2转录水平与TRF1（r=0．356，P〈0．01）、SLEDAI评分值（r=0．270，P〈0．05）、ESR（r=0.304，P〈0．05）、肌酐（r=0．258，P〈0.05）及尿蛋白定量（24h）（r=0.344，P〈0.05）正相关。结论TRF1、TRF2在SLE患者异常表达，提示其可能参与了SLE的发生发展；TRF2与SLEDAI评分、尿蛋白定量（24h）呈正相关，提示TRF2可能可作为SLE病情活动及肾脏榻害的生物标记。

端粒重复序列结合因子1和2及端粒保护蛋白1基因在食管癌中的表达研究

目的检测端粒保护蛋白TRF1、TRF2和POT1基因mRNA在食管癌组织中的表达。方法收集33例明确诊断的食管癌中心组织及其相应癌旁组织,提取总RNA并逆转录成cDNA,采用SBYRGreen适时荧光定量PCR方法检测TRF1、TRF2和POT1基因在食管癌中心组织和癌旁组织mRNA水平的表达。结果 TRF1mRNA在食管癌中心和癌旁表达所得CT值与β-actinmRNA所得CT值之差(即ΔCT值)分别为1.42±2.31和1.02±1.04,差异有统计学意义(P<0.05,n=33);POT1在两者中的表达分别为4.72±1.47和3.80±1.06,两者差异有统计学意义(P=0.001,n=33);TRF2为8.53±2.57和8.38±1.50,两者差异无统计学意义(P>0.05,n=33)。结论虽然TRF2mRNA在食管癌组织中和肿瘤旁表达没有差异,但TRF1和POT1mRNA在食管癌组织中表达异常降低,提示TRF1和POT1可能与食管癌的发生、发展有密切关系。

端粒重复序列结合蛋白质1与2在原发性干燥综合征患者外周血单个核细胞中的表达及其临床意义

目的端粒重复序列结合蛋白质1(telomeric-repeat binding factor-1,TRF1)和端粒重复序列结合蛋白质2(telomeric-repeat binding factor-2,TRF2)基因表达异常在原发性干燥综合征(primary Sjogren's,pSS)发病中可能的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测55例pSS患者和41例健康对照者(healthy control,HC)外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中TRF1和TRF2转录水平,并与临床指标进行相关性分析。结果 (1)PBMCs TRF2转录水平在SS组显著高于HC组(0.0047±0.0107 vs.0.0026±0.0049,P=0.001),而TRF1转录水平在两组表达差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Spearman相关性分析发现在SS组中TRF2与白细胞计数(WBC)(r=0.309,P<0.05)、中性粒细胞计数(GR)(r=0.312,P<0.05)、补体3(C3)(r=0.470,P<0.05)、抗核抗体(ANA)(r=0.339,P<0.05)呈显著正相关,TRF1转录水平与TRF2(r=1,P<0.01)、WBC(r=0.316,P<0.05)、GR(r=0.313,P<0.05)、ANA(r=0.421,P<0.05)呈显著正相关。结论 TRF2转录水平在SS患者的增高提示其可能参与了SS患者端粒酶激活和端粒缩短的调节;TRF2、TRF1表达水平与WBC、GR、C3、ANA呈显著正相关,提示TRF2、TRF1可能参与了SS炎症免疫调节,且与SS的发病机制有关。加强端粒保护蛋白在SS等自身免疫性疾病的研究有利于进一步阐明这类疾病的发病机制。

端粒重复序列结合因子2与细胞功能

端粒重复序列结合因子2(telomere repeat binding factor 2,TRF2)是一种端粒结合蛋白,为保卫端粒蛋白复合体(shelterin)的一个组分,它通过羧基端与端粒DNA结合,在维持端粒DNA结构稳定、防止染色体端-端融合、参与DNA损伤响应方面发挥着重要作用。近年的研究发现,TRF2还参与细胞增殖、分化、衰老及凋亡过程,并在大脑发育早期的神经元增殖、分化中起选择性作用。本文综述了TRF2的最新研究进展。

小鼠大脑皮层端粒重复序列结合因子2的表达及神经元保护作用

目的 观察小鼠大脑皮层端粒重复序列结合因子2（telomeric repeat binding factor 2,TRF2）表达的增龄性改变,探讨TRF2基因转染对体外培养皮层神经元的保护作用及TRF2在神经元衰老中的作用. 方法 将C57BL/6J小鼠分为青年组（2月龄）和老年组（20月龄）,分别采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）和实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测小鼠大脑皮层TRF2表达;pcDNA-TRF2质粒转染孕18 d胎鼠皮层神经元细胞,喜树碱作用16h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测神经元细胞存活率. 结果 与2个月龄组小鼠比较,20个月龄组小鼠大脑皮层TRF2表达明显降低;喜树碱作用16h后,转染pcDNA-TRF2的神经元存活率为（75.4±2.6）％,明显高于与转染空载体质粒组（32.6±9.3）％（t=22.85,P＜0.05）. 结论 TFR2表达降低参与神经元衰老,TRF2过表达可能是治疗神经退行性变的新靶点.

醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤的作用及对TRF2表达的影响

目的探讨不同剂量的醋酸丙氨瑞林对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制及端粒重复因子2(telomeric repeat binding factor-2,TRF2)表达的影响。方法选取雌性裸鼠34只,无菌条件下饲养。体外培养人子宫内膜癌HEC-1B细胞株,制成悬液接种于裸鼠皮下组织以建立人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。选取32只合格的荷瘤裸鼠随机分为4组:对照组(生理盐水肌内注射),低、中、高剂量丙氨瑞林干预组(20μg/kg、40μg/kg、80μg/kg醋酸丙氨瑞林肌内注射),每组8只。观察裸鼠生长发育情况,每7天测量皮下移植瘤体积,4周后处死裸鼠,取出移植瘤,测量肿瘤体积,并绘制生长曲线、计算抑瘤率。移植瘤组织石蜡包埋行HE染色,镜下观察瘤细胞形态变化;免疫组织化学法检测瘤组织中TRF2蛋白的表达情况。结果与对照组比较,丙氨瑞林干预组随药物剂量增加移植瘤体积依次减小(P<0.05);丙氨瑞林低、中、高剂量干预组抑瘤率分别为10.01%、19.80%、44.98%,高剂量组抑瘤率大于低、中剂量组(P<0.05或P<0.01)。HE染色光镜观察见丙氨瑞林干预组瘤细胞排列较对照组稀疏,瘤细胞核深染、固缩。免疫组织化学检测显示,随着药物剂量增加,瘤组织中TRF2蛋白表达逐渐下调(P<0.05)。结论醋酸丙氨瑞林对荷瘤裸鼠子宫内膜癌细胞株HEC-1B皮下移植瘤生长有抑制作用,可能与TRF2蛋白表达下调有关。

端粒重复序列结合蛋白1与2在原发性痛风性关节炎患者中的变化及其临床意义

目的 探讨端粒重复序列结合蛋白（TRF）1和TRF2在原发性痛风性关节炎（GA）发病中可能的作用.方法 将研究对象分为急性期GA（AGA）组77例、非急性期（NAGA）组49例及健康对照组79名.实时荧光定量多聚合酶链反应（RT-qPCR）及蛋白质印迹法分别检测TRF1和TRF2在3组PBMCs中转录水平及蛋白水平的表达.采用单因素方差分析,LSD法两两比较和Spearman相关分析行统计学处理.结果 ①TRF1、TRF2转录水平及蛋白水平在AGA组（0.012 6±0.005 3和0.017 6±0.007 8）和NAGA组（0.009 5±0.003 6和0.014 0±0.004 1）均显著高于健康对照组（0.004 2±0.001 2和0.005 8±0.0019,F=10.818,F=8.869,P均＜0.01）.②在AGA组中TRF2转录水平均与淋巴细胞（LY）呈正相关（r=0.289,P＜0.05）,TRF1转录水平与TRF2（r=0.935,P＜0.01）、LY（r=0.256,P＜0.05）、TG （r=0.281,P＜0.05）、极低密度脂蛋白（VLDL-C）（r=0.291,P＜0.05）均呈正相关.结论 端TRF1、TRF2在原发性GA患者的异常表达及与LY呈正相关,提示其可能参与了痛风的发生发展及免疫与炎症调节.

放射线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响

目的:研究X线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响。方法:采用Western Blot检测X线照射前后端粒重复序列结合因子2蛋白的含量变化,采用AnnexinⅤ-FITC/PI联合染色检测细胞早期凋亡。结果:与照射前相比,细胞早期凋亡率显著升高(P<0.05);经不同剂量X线照射后0.5 h,各组端粒重复序列结合因子2蛋白含量均上升(P<0.05),1 h后,2 Gy组的TRF2蛋白含量降至与未照射时水平相当,3 h和5 h时降至比未照射时更低(P<0.05),其它照射剂量组的TRF2蛋白在照射后1 h时均已降至不可测得的水平。结论:端粒重复序列结合因子2被激活,端粒重复序列结合因子2蛋白含量应激性地短暂升高是经X线照射后的早期事件。