肝癌中Tenascin-C表达及其对肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞侵袭转移影响的实验研究

目的探讨Tenascin-C在人肝细胞癌中的表达,分析其表达水平与肝癌细胞侵袭转移的关系。方法体外培养人永生化肝细胞L-02、HL-7702和不同转移潜能人肝癌细胞Hep3B、HepG2、SMMC-7721、Bel-7402、HHCC、MHCC-97H、MHCC-97L,实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹法检测Tenascin-C的表达,Transwell检测人肝癌细胞的迁移和侵袭能力。构建Tenascin-C小干扰RNA,Transwell检测肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力的变化。分析Tenascin-C表达与肝癌细胞侵袭转移的关系。结果与永生化肝细胞比较,人肝癌细胞中Tenascin-C mRNA和蛋白表达量均增高,差异均具有统计学意义(P=0.001);不同人肝癌细胞转移能力具有差异,以Hep3B最高,其次为SMMC-7721、Bel-7402,HepG2,MHCC97-L最低。沉默Tenascin-C后,与阴性对照组比较,肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力均降低,差异具有统计学意义(P=0.001)。相关性分析显示,Tenascin-C表达与肝癌细胞迁移、侵袭数目均呈正相关(P=0.001)。结论Tenascin-C在人肝癌中的高表达可能参与促进癌细胞的侵袭转移,沉默Tenascin-C能够有效抑制肝癌Hep3B、SMMC-7721细胞转移能力,有望作为肝癌进展的重要生物学指标。

TNC基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞迁移的影响

本研究旨在探究TNC(Tenascin-C)基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)迁移功能的影响及其内在信号通路,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供借鉴。在TNC外显子3和5设计和筛选高活性sgRNA,转染绵羊EECs后,通过PCR和RT-PCR鉴定出TNC 6.1 kb片段缺失的绵羊EECs,即plate 1-G3和plate 2-B5。通过划痕实验检测plate 1-G3和plate 2-B5迁移功能变化,并通过RNA-seq和生物信息学分析筛选共差异表达基因(co-Differentially Expressed Genes,co-DEGs),进行GO分析、KEGG分析以及PPI分析。结果表明,TNC基因敲除促进了绵羊EECs的迁移,通过RNAseq和生物信息学分析筛选出2326个co-DEGs,包括1304个上调co-DEGs和1022个下调co-DEGs。GO分析显示,co-DEGs富集到细胞迁移、粘附、细胞-底物连接等。KEGG分析显示,co-DEGs富集在PI3KAkt信号通路、ECM-受体相互作用、Rap1信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等。GO条目中225个迁移相关co-DEGs的KEGG分析也富集到类似信号通路。迁移相关DEGs的PPI分析显示,中心枢纽基因有PIK3R3、FN1、FGFR1、ITGB3、PDGFRA等。TNC基因敲除导致绵羊EECs的迁移功能增强并揭示了其相关通路和关键基因,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供了新思路。

约翰内斯·海德汉博士(中国)有限公司TNC7数控系统

全新TNC7数控系统为机床用户和机床制造商提供了新的编程方法和操作方式。聚焦任务并可自定义。这是因为TNC7数控系统提供多个智能功能,全面提升车间生产的操作体验。其中,TNC7数控系统可用探测功能快速和图形化地设置不同的工件,包括复杂的自由曲面工件。

基于TNC的安全认证协议的设计与实现

安全协议是保证网络安全的基础,现有安全协议为服务器和网络提供了很好的保护,但对客户终端缺乏保护。该文以可信网络连接(TNC)的终端完整性度量思想为基础,提出了一种基于TNC结构的安全认证协议。该协议在可信计算环境下将终端完整性度量技术与公钥基础设施(PKI)相结合使用,确保了终端平台的可信性。

TNC基因在牛肌肉发育和前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达研究

【目的】分析TNC基因在牛背最长肌组织发育和前体脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化趋势及其与脂肪沉积之间的关系。【方法】利用qRT-PCR技术分析了3、6、12、18、24和30月龄南阳牛背最长肌组织中TNC基因的表达变化,利用索氏抽提法测定了24头牛背最长肌组织中的脂肪含量。分离了牛前体脂肪细胞,通过在培养基中添加2μmol/L柠檬苦素干扰细胞的分化,利用qRT-PCR技术分析了正常诱导分化和柠檬苦素干扰后的诱导分化过程中TNC基因的表达变化。【结果】TNC基因在18月龄之后的牛背最长肌组织中的表达水平逐渐升高。根据肌肉组织中脂肪含量的高低分为高肌内脂肪含量组和低肌内脂肪含量组,发现TNC基因的表达水平在这2组之间没有显著差异。TNC基因在牛前体脂肪细胞诱导分化开始后的第6小时表达量急剧升高,之后开始下降;在诱导分化的后期,当细胞质中有明显的脂质液滴积累时,TNC基因的表达水平再次升高。在诱导分化培养基中添加柠檬苦素能够抑制细胞的分化和脂质的积累,同时也导致TNC基因表达量显著下降。【结论】TNC基因参与了脂肪细胞的分化和脂质沉积的调控过程,该基因表达量上调有利于细胞质中脂质液滴的积累。

参芪扶正注射液对人胃癌MGC-803细胞侵袭能力及Tenascin-C表达的影响

目的:研究中药制剂参芪扶正注射液含药血清对胃癌MGC-803细胞侵袭能力及Tenascin-C(Tn-C,腱糖蛋白-C或韧粘素-C)mRNA表达的影响。方法:分别将高浓度(0.16g/ml)、中浓度(0.8g/ml)、低浓度(0.4g/ml)不同剂量的中药制剂参芪扶正注射液注射于小鼠制备含药血清及对照血清。设立空白组,对照血清组,低、中、高浓度参芪扶正注射液组,对胃癌MGC-803细胞株培养48小时,采用MatrigelTM方法观察各组细胞株的侵袭情况。然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,采用RT-PCR法检测各组胃癌细胞中Tn-C表达的影响。结果:与空白对照组比较,参芪扶正注射液能明显抑制胃癌细胞侵袭能力,且浓度越高抑制作用越强,高浓度含药血清使细胞的侵袭能力下降34.7%。中药制剂参芪扶正注射液高、中、低剂量组均能明显降低Tn-C值,且降低程度与含药血清浓度正相关。结论:中药制剂参芪扶正注射液能明显抑制胃癌MGC-803细胞株体外侵袭能力,并且下调胃癌细胞中Tn-C的表达,这可能是其抑制肿瘤侵袭的分子机制。

cTnI-linker-TnC融合蛋白基因的构建、表达及鉴定

目的重组及表达人cTnI-linker-TnC融合蛋白。方法应用PCR技术从人心脏cDNA文库分别扩增出cTnI和TnC基因,通过引物设计在两者之间加上19个中性氨基酸残基TS-(G4S)3-AC的linker编码序列,克隆PCR产物,并构建pET28a-cTnI-linker-TnC表达质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性。结果成功构建了cTnI-linker-TnC融合蛋白的基因,并在大肠杆菌中实现可溶性高表达,在摇瓶中的表达量为21 mg/L,经一步NTA树脂亲和层析纯化,获得条带单一的目的蛋白,采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实,目的蛋白有较高的免疫反应性。结论采用原核表达方法可以获得具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI-linker-TnC融合蛋白。

Tenascin-C在人原发性肝细胞癌浸润、转移和血管生成中的作用

目的研究Tenascin-C在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨Tenascin-C与HCC浸润、转移和血管生成的关系。方法采用免疫组织化学方法检测54例HCC、32例肝硬化、17例正常肝组织中Tenascin-C的表达情况以及微血管密度(MVD);采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Tenascin-C mRNA,并结合临床病理指标进行分析。结果 Tenascin-C在HCC、肝硬化和正常肝脏组织中的阳性例数分别为34、6和0,其差异具有统计学意义(χ2=14.06,P<0.01);Tenascin-C在HCC组织内的表达强度明显高于肝硬化组织[(162.15±9.77)vs.(149.24±8.25),t=2.192,P<0.05]。HCC组织Tenascin-C mRNA的表达强度明显高于肝硬化组织[(0.593±0.110)vs.(0.138±0.089),t=2.894,P<0.05]。有包膜浸润的HCC组织中Tenascin-C表达量明显高于无浸润者(t=2.248,P<0.05),Edmondson-Steiner病理分级中HCC属Ⅲ～Ⅳ级的Tenascin-C含量明显高于Ⅰ～Ⅱ级者(t=2.698,P<0.05),HCC有转移的Te-nascin-C含量明显高于无转移者(t=2.785,P<0.01)。HCC组织中Tenascin-C表达与微血管密度(MVD)呈正相关(r=0.68,P<0.05)。获随访的46例(85.2%)HCC患者在随访期间(3～30个月,平均11.5个月),Tenascin-C阴性表达的患者中位生存时间长于Tenascin-C阳性表达的患者[(22.01±6.95)月vs.(15.08±7.06)月,P<0.05,log-rank test]。结论 Tenascin-C对HCC的浸润、转移和血管生成起着重要作用。Tenascin-C和MVD可以作为预测HCC浸润、转移的生物学指标。

小分子干扰RNA抑制TNC基因的表达并逆转卵巢癌紫杉醇耐药

目的研究小分子干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰(RNAi)对卵巢癌紫杉醇耐药细胞TNC基因表达的影响,探讨TNC基因在紫杉醇耐药中的功能。方法用脂质体转染剂LipofectamineTM2000将针对TNC基因特异性合成的siRNA转染SKOV3/TAX30细胞,分别在转染后24、48、72 h收集细胞,检测各组细胞TNC mRNA和TNC蛋白的表达水平。siRNA转染SKOV3/TAX30细胞后,采用MTT法检测细胞对紫杉醇的半数抑制浓度(IC50)。Western Blot检测SKOV3/TAX30及SKOV3/TAX300两种耐药细胞Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D、E-cadherin蛋白的表达。结果 siRNA转染SKOV3/TAX30细胞24、48、72 h后,TNC mRNA和TNC蛋白表达水平均下降,SKOV3/TAX30细胞对紫杉醇药物的IC50下降。TNC表达升高的耐药细胞中,Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin及下游Cyclin D蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调。结论针对TNC基因特异性合成的siRNA可激发RNAi介导的TNC沉默,并且逆转了紫杉醇化疗耐药,TNC表达上调与紫杉醇耐药相关,TNC可能通过Wnt信号通路的激活参与了化疗耐药。

非小细胞肺癌中TNC、USP22和Ki-67的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中TNC、USP22和Ki-67的表达及与临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和免疫组化SP法联合检测46例非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织中TNC、USP22和Ki-67的表达。结果TNC蛋白主要表达于非小细胞肺癌巢周围细胞外基质、基膜,且与非小细胞肺癌淋巴结转移、分化程度和临床分期相关(P<0.05);USP22和Ki-67蛋白主要表达于非小细胞肺癌细胞胞核,且与非小细胞肺癌淋巴结转移、分化程度和临床分期呈正相关(P<0.05)。非小细胞肺癌中TNC、USP22和Ki-67 mRNA表达均增强(P<0.01)。结论TNC可抑制非小细胞肺癌的浸润、转移,USP22和Ki-67可作为非小细胞肺癌患者预后指标,联合检测TNC、USP22和Ki-67的表达,可为临床治疗非小细胞肺癌及预后判断等提供参考。

乙醇对斑马鱼胚胎发育中tenascin-c基因表达的影响

目的探讨tenascin-c(tnc)基因在斑马鱼胚胎异常发育过程中表达的变化,从而揭示该基因在斑马鱼胚胎发育中可能存在的作用。方法不同水平乙醇(100、200、300、400、500mmol/L)持续处理斑马鱼胚胎,制备斑马鱼异常发育模型,收集受精后24、48h斑马鱼胚胎并固定,用原位杂交和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察tnc在斑马鱼异常发育时表达的变化。组间比较采用SPSS11.5软件进行统计学处理。结果200mmol/L乙醇处理的斑马鱼胚胎在受精72h其他系统未发现发育异常,而心脏已出现畸形。100、200mmol/L乙醇处理后,RT-PCR结果示tnc在斑马鱼胚胎发育中的表达上调,而原位杂交信号变化不明显;300mmol/L及以上乙醇处理的胚胎,原位杂交结果示tnc在体节处表达下降;100～400mmol/L乙醇处理的胚胎,在受精48htnc在斑马鱼心脏部位均有表达。结论tnc在低水平乙醇处理时表达即上调,对胚胎正常发育有保护作用;在心脏异常发育时表达,促进心脏的正常发育;tnc在病理状态下的表达模式不仅在脊椎动物中具有保守性,而且在胚胎和成体时期也具有保守性。

Tenascin-C在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的:分析Tenascin-C(TN-C)在肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理因素间的关系。方法:应用免疫组化方法检测肾透明细胞癌中TN-C蛋白表达情况。结果:免疫组化结果显示40.63%(39/96)的病例存在肿瘤间质TN-C蛋白的过表达,且过表达与肿瘤组织核分级负相关(P=0.022);18.75%(18/96)的病例存在肿瘤细胞胞质TN-C蛋白的过表达,且过表达与肿瘤组织核分级、p-TNM分期正相关,分别为(P<0.001;P=0.038)。肿瘤间质及肿瘤细胞胞质的过表达与RCCC患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显相关性。结论:肾透明细胞癌中存在TN-C蛋白肿瘤间质及肿瘤细胞的过表达,并与肿瘤分化和p-TNM分期相关。

Tenascin-C基因在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:研究Tenascin-C在子宫内膜正常组织、子宫内膜增生组织及子宫内膜癌组织中的表达,探讨Tenascin-C基因与子宫内膜癌发生、发展及预后的关系。方法:采用免疫组化SP法,分别检测14例正常子宫内膜组织、18例子宫内膜增生组织和78例子宫内膜癌组织中Tenascin-C的表达情况,并分析子宫内膜癌组织中Tenascin-C的表达和临床病理特征之间的关系。结果:Tenascin-C在子宫内膜癌组织阳性率明显高于正常子宫内膜组织、子宫内膜增生组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Tenascin-C在子宫内膜癌中的表达与浸润肌层深度、分化程度、FIGO分期和淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:Tenascin-C基因的表达与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关,因此对Tenascin-C基因的检测可用于判断子宫内膜癌恶性程度及评估其预后的生物学指标。

增强的无线TNC证实模型及协议设计

可信计算技术为解决无线安全问题提供了一个新的思路,无线可信接入是无线网络安全领域的研究热点。目前的可信网络连接(TNC)架构并不能够很好适应无线接入环境。通过分析TNC架构的不足,提出一种增强的无线TNC证实模型并设计模型下的相关协议。通过分析,该模型有较高安全性和效率,具有一定的匿名性,适合于无线接入环境,同时能够兼容不含可信芯片的无线终端接入。

致动脉粥样硬化不同因素对大鼠腹腔巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞分泌表达Tenascin-C的影响

目的 观察一些致动脉粥样硬化因素对培养的大鼠腹腔巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞分泌表达Tenascin C的影响。方法 体外分离培养大鼠腹腔巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞 ,同步后分别加入不同刺激因子采用Westernbolt及逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测Tenascin C蛋白和mRNA水平表达。结果 Tenascin C在两种细胞的对照组中均不表达 ,低密度脂蛋白刺激组只有少量表达 ,其余各刺激组均呈高水平表达。加入氧化修饰低密度脂蛋白 (oxLDL) 2h后即有Tenascin C的表达 ,6h时达高峰 ,可持续到 2 4h。oxLDL与Tenascin C蛋白的表达呈明显的浓度依赖性。结论 oxLDL等致动脉粥样硬化刺激因子可在转录水平上调Tenascin C基因的表达 ,从而促进血管平滑肌细胞和巨噬细胞分泌表达高水平的Tenascin C ,这可能是动脉粥样硬化中Tenascin

Tenascin-C在椎间盘退行性病变中的作用及机制研究

目的通过观察Tenascin-C(TNC)在椎间盘退行性病变(DDD)中的表达变化,探讨TNC在椎间盘退行性病变中的作用及机制。方法实时PCR和Western blotting检测人髓核细胞和小鼠椎间盘细胞在炎性条件下TNC、胶原蛋白Ⅱ和蛋白聚糖的变化,酶谱法及基质金属蛋白酶(MMP)活性检测MMP活性的变化。加入外源性TNC,研究TNC对DDD是否起到保护作用。体内实验验证TNC的表达情况及位置。结果在椎间盘发生退行性病变时,TNC表达增高,胶原蛋白Ⅱ和蛋白聚糖表达降低,MMP活性增高。加入外源性TNC后,胶原蛋白Ⅱ和蛋白聚糖表达增高,MMP活性降低。结论TNC能够调节MMP活性,对椎间盘细胞起保护作用。

重组人心肌TnI-TnC复合物的特性及其初步应用

目的:从含有人cTnI-TnC基因的表达菌中抽取目的蛋白,并对其进行纯化、鉴定及稳定性的初步研究。方法:取表达菌株BL21(DE3)-pET28a-cTnI-TnC,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,NTA树脂亲和层析纯化后,检测其免疫反应性和稳定性,并试验了在4种不同液体基质中cTnI-TnC复合物的稳定性。结果:cTnI-TnC表达水平高,可溶性好。免疫分析显示较高的特异免疫反应性和稳定性。筛选到了能使cTnI-TnC复合物在液态下保持稳定的基质。结论:cTnI-TnC复合物能通过基因工程手段大量获取,并具有较高的免疫反应性和稳定性。含EDTA的10%BSA磷酸缓冲液或含10%小牛血清的磷酸缓冲液是其合适的基质。初步认为cTnI-TnC复合物可以作为cTnI免疫测定用的参考标准品或质控品。

TnC基因在小鼠正常腭突发育和腭裂形成中的作用

目的观察TnC基因在正常小鼠腭突发育和全反式视黄酸诱导的小鼠腭裂形成过程中的表达变化,探讨TnC基因的表达在腭裂发生中的作用。方法利用real-time PCR和原位杂交方法动态检测TnC基因在正常腭突组织和全反式视黄酸诱导的腭裂组织中的表达情况。结果real-time PCR结果表明,TnC在GD11-16正常腭突和腭裂组织中均有表达,在正常腭中第16天TnC表达丰度最高,与其他胚龄相比较差异有统计学意义。在腭裂组中的表达丰度明显低于正常腭,差异有统计学意义;而在腭裂组织中各胚龄TnC的表达丰度差异无统计学意义。原位杂交结果显示,TnC在GD13、GD14天正常腭组织的腭板前部上皮细胞和间充质细胞中均有表达,而在GD14天腭板后部上皮细胞和间充质中虽有表达,量较少;TnC在GD13天腭裂前部间充质细胞中的表达量明显下降,在GD14天的腭裂腭板前部和后部的间充质细胞和上皮细胞中均未检测到TnC的表达。结论TnC基因在维持小鼠腭突组织的生长发育中起重要作用,而在腭突组织中的抑制表达与腭裂的发生有关。

CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(TnC)基因及序列分析

本文结合生物信息学资源和生物软件的使用,针对特定的氨基酸序列设计简并引物,利用CODEHOP法设计简并引物克隆鲫鱼肌钙蛋白C(Tn C)基因,并构建系统进化树。证明该基因片段与其他鱼类Tn C基因具有较高的同源性,其中与斑马鱼同源性最高达到96%,与大西洋鲑、白斑狗鱼、虹鳟、斜带石斑鱼、斑点叉尾鮰的同源性分别为92%、92%、91%、91%、85%。研究表明,应用此种方法设计出的引物简并度相对较低,Tm值的修改较为灵活,产物特异性强。

Tenascin-C在慢性免疫性心肌炎小鼠心室重构中的作用

目的探讨基质细胞蛋白Tenascin-C在慢性免疫性心肌炎小鼠心室重构中的作用。方法SPF级BALB/c小鼠75只,随机分为实验组(45只)和对照组(30只)。以心肌肌球蛋白重链614-629位多肽与完全弗氏佐剂的混合液免疫实验组小鼠建立实验性自身免疫性心肌炎(EAM)模型,对照组注射相同量磷酸盐缓冲液与完全弗氏佐剂的混合液。分别在不同时间点(21、75、120d)观察小鼠心肌的病理性重构情况,采用Western blotting检测心肌Tenascin-C的表达,放射免疫法测定血清Ⅲ型胶原氨基末端肽(PⅢNP)含量,并分析两者之间的相关性。结果21d时,实验组小鼠心肌炎性浸润明显,间质出现少量胶原沉积;至75、120d时,实验组小鼠心肌炎性浸润显著减少,间质胶原沉积更加明显。实验组在各时间点血清PⅢNP含量及心肌Tenascin-C蛋白表达均显著高于对照组(P<0.01),且随着病程进展而增加(P<0.01)。心肌Tenascin-C蛋白的表达与血清PⅢNP含量呈正相关(r=0.893,P<0.01)。结论Tenascin-C参与了心肌炎小鼠心肌纤维化及心室重构的进展,可能在心肌疾病的发生发展中具有重要作用。