藤梨根乙醇提取物通过AKT/PUMA通路诱导结直肠癌细胞凋亡

目的研究藤梨根乙醇提取物(TLG)对结直肠癌细胞的作用及其抗肿瘤机制。方法利用MTT检测TLG对人结直肠腺癌细胞HCT-15、LoVo的毒性,细胞平板克隆实验检测TLG对结直肠癌细胞HCT-15、LoVo增殖的影响,Hoechst-33258染色法和流式细胞术检测TLG对结直肠癌细胞凋亡的影响,Western blot实验检测TLG对HCT-15中相关蛋白Caspase-3、PARP、P65、PUMA、AKT、GSK-3β表达的影响,双荧光素酶报告基因实验检测TLG对HCT-15中相关启动子活性的影响。结果结直肠癌细胞HCT-15、LoVo经TLG处理后,与对照组相比,细胞活力以时间及剂量依赖性下降(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β抑制剂处理后能够恢复增殖(P<0.001);不同浓度TLG处理后,细胞凋亡率提高(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后能够遏制TLG诱导的凋亡(P<0.01,P<0.001);Western blot显示HCT-15细胞中的p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达量随TLG浓度上升而减少(P<0.01),Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA蛋白表达量随TLG浓度上升而增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),同时转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β抑制剂处理后能够阻滞TLG对下游蛋白Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA的影响(P<0.05,P<0.01,P<0.001);报告基因结果显示NF-κB、PUMA启动子活性随TLG浓度上升而增强(P<0.05,P<0.01),同时转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后恢复(P<0.01,P<0.001)。结论TLG可以显著诱导结直肠癌细胞凋亡,发挥较强的抑制肿瘤作用,其机制可能与AKT/PUMA信号通路有关。

藤梨根抗癌成分及其作用机制

藤梨根是临床常用抗肿瘤中药,含有多种抗癌的活性成分,如谷甾醇、β-谷甾醇、槲皮素、表儿茶素、(+)儿茶素、芦荟大黄素、三萜类化合物、齐墩果酸、熊果酸、香草醛酸、七叶皂苷等,可用于治疗胃癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等恶性肿瘤,其抗肿瘤的作用机制主要包括抑制细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、增强放化疗疗效、抗肿瘤转移、抑制血管生成、预防作用等。

藤梨根乙醇提取物诱导小细胞肺癌凋亡的机制研究

目的:研究藤梨根乙醇提取物(TLG)对H1688、H446细胞凋亡的影响,并探究其相关的分子机制。方法:用不同浓度TLG处理H446、H1688细胞:使用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测Erk1/2、Foxo3a、PUMA、Cleaved PAr P蛋白表达量。结果:经TLG处理后,与不加药组相比,细胞的增殖抑制率以剂量依赖性形式增加;细胞凋亡率增加;Western Blot显示Erk1/2蛋白表达量随着TLG浓度的增加而降低;Foxo3a、PUMA、Cleaved PAr P蛋白表达量随着TLG浓度的增加而增加。结论:TLG可促进小细胞肺癌细胞H1688、H446的凋亡,其机制可能是通过Erk1/2-Foxo3a-PUMA轴发挥作用。

不同抗病诱导剂对猕猴桃褐斑病田间防效及果实品质的影响

【目的】了解不同抗病诱导剂对猕猴桃褐斑病田间防治效果、叶片养分含量及果实产量和品质的影响情况,以筛选出防治猕猴桃褐斑病的最佳抗病诱导剂,为猕猴桃褐斑病的绿色防控提供技术支撑。【方法】以‘红阳’猕猴桃为研究对象,单施与混施不同抗病诱导剂开展田间试验,药后调查测定田间褐斑病的发病率、病情指数、防治效果及叶片养分含量,并于果实成熟期对其果实的相关指标进行了测定与综合评价。【结果】不同抗病诱导剂对褐斑病防治效果存在显著差异;处理6(阿泰灵+禾一海之星)的防治效果最好,其在药后10、20、30 d的防治效果分别为52.72%、78.39%、73.28%,其次是处理5(氨基寡糖素+禾一海之星)的防治效果。与CK(甲基托布津)相比,药后10 d抗病诱导剂各处理不同程度地提高了叶片中氮(N)、钾(K)的含量。药后10、20、30 d叶片N含量的变化较大,其含量整体呈明显的下降趋势;其中,处理6(阿泰灵+禾一海之星)的叶片N含量最高。药后10、20、30 d叶片K含量的整体变化幅度较小;药后10 d,处理5(氨基寡糖素+禾一海之星)的叶片K含量最高;药后20、30 d,处理6(阿泰灵+禾一海之星)的叶片K含量均最高。但是,诱导剂未能有效提高叶片磷(P)含量。相关性分析结果显示,叶片N含量与褐斑病的发病率、病情指数均呈显著负相关,表明抗病诱导剂主要通过诱导叶片N素的吸收来增强自身抗病能力。不同抗病诱导剂处理的猕猴桃其果实生长发育也不同,综合评价结果表明,处理5(氨基寡糖素+禾一海之星)对其果实产量和品质的提升效果均最佳,其次为处理6的,CK的提升效果最差。【结论】处理5(氨基寡糖素+禾一海之星)的免疫诱导效果及提高果实产量和改善果实品质的效果均显著,氨基寡糖素+禾一海之星可以作为猕猴桃褐斑病绿色防控中的最佳抗病诱导剂使用。

藤梨根提取物对裸鼠移植人胃癌SGC-7901细胞瘤p53基因蛋白的影响

目的研究藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法采用免疫组织化学方法检测p53基因表达。结果藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌SGC-7901细胞p53蛋白表达阳性灰度值分别为185.48±1.05,124.05±1.53,95.51±0.19。结论藤梨根提取物抑制SGC-7901 p53蛋白水平的表达有可能是促进SGC-7901凋亡的作用机制。

藤梨根与猫人参的性状鉴别及其临床应用

目的:鉴别藤梨根及猫人参,指出其资源及临床应用中的问题。方法:药材及饮片性状鉴别及商品调查。结果:列出藤梨根及猫人参的饮片性状、鉴别特征,发现临床用药中用药部位因药用资源紧张出现不同比例的茎藤。藤梨根和猫人参目前主要用于治疗各种肿瘤。结论:应加强资源保护和合理开发,药用部位的扩大应该有科学的临床依据。

藤梨根提取物通过调控miR-451干预人食管鳞癌EC9706细胞的增殖

目的探讨藤梨根提取物(RAE)对食管鳞癌细胞EC9706增殖的影响及机制。方法采用MTT法检测不同剂量的RAE对人食管鳞癌细胞EC9706的增殖抑制作用,运用RT-PCR检测食管鳞癌细胞株中miR-451表达水平并制备不同浓度的RAE干预食管鳞癌细胞株的生长,并再次运用RT-PCR检测各组食管鳞癌细胞株中miR-451表达水平。结果 RAE对食管鳞癌细胞有毒性作用,当RAE浓度≤10μg/ml时,与空白对照组相比,对于EC9706细胞的抑制率无统计学差异(P>0.05),RAE 100μg/ml和1 000μg/ml的抑制率分别为18.9%、31.1%,与空白对照组比较有显著统计学意义(P<0.05)。RT-PCR法检测两组细胞miR-451的表达程度有显著性差异(P<0.05)。结论不同浓度RAE的细胞毒性不同,在一定范围内与其浓度相关,当其浓度≤10μg/ml时,抑制率较小,为非细胞毒性浓度。RAE在一定的浓度范围内可以上调miR-451的表达水平,是藤梨根治疗食管癌的机制之一。

清热解毒法基于Bcl-2/Bax等凋亡信号通路调控结肠癌的研究

目的:观察含清热解毒中药小鼠血清对结肠癌CT-26细胞蛋白Bcl-2、Bax、P53、Caspase-3表达的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分为用药A组、用药B组、用药C组和模型D组。A、B、C组分别连续使用解毒三根汤灌胃5、7、10 d后,与D组一起通过眼球取血获得含药血清,并作用于结肠癌CT-26细胞,MTT法测细胞24h、48h、72h的抑制率,与未经鼠血清刺激的正常CT-26细胞分别裂解蛋白后,Western blot法检测Bcl-2、Bax、P53、Caspase-3蛋白的表达量。结果:MTT法结果显示解毒三根汤灌胃10天组,即C组对细胞的抑制率最高,该组Bax、P53、Caspase-3蛋白的表达较正常结肠癌细胞(E组)升高,Bcl-2蛋白表达较正常结肠癌细胞降低,且有统计学意义(P<0.05)。结论:解毒三根汤抑制结肠癌CT-26细胞的生长可能与抑制Bcl-2的表达,促进Bax、P53、Caspase-3的表达量有关。

复方壁虎藤梨根对肝癌细胞的抑制作用研究

目的:观察复方壁虎藤梨根对肝癌细胞的抑制作用。方法:采用体外抗肿瘤药物筛选的SRB法,考察壁虎粉、藤梨根及其复方对肝癌细胞的抑制作用。结果:在体外试验中,壁虎粉、藤梨根及复方壁虎藤梨根均对肝癌细胞表现出一定的生长抑制作用,在相同的条件下,复方壁虎藤梨根的抑制效果均要优于单独的壁虎粉和藤梨根。在体内的抗肿瘤药效评价中,复方壁虎藤梨根能有效抑制肿瘤生长,瘤重与肿瘤对照组比较明显降低(P<0.05),肿瘤抑制率可达37.9%,且对荷瘤小鼠体重无任何影响。结论:复方壁虎藤梨根在体外及体内的抗肝癌实验中均表现出明显的抑瘤作用。

藤梨根对胃癌细胞抑制作用的实验研究

目的 研究藤梨根对胃癌细胞的抑制作用。方法 采用MMT法观察藤梨根不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞的抑制作用。结果 藤梨根原液药物浓度 ( 5 .2mg ml)经稀释 4倍 ( 1 .3mg ml)后 ,抑瘤率最强 ( 88.1 9% ) ,随着药物浓度的降低 ,抑瘤率随之下降 ;藤梨根对胃癌细胞作用 2 4h抑制作用最强( 87.61 % ) ,48h回落 ,72h再次上升。结论 藤梨根对胃癌细胞有明显杀伤作用。

藤梨根从“痰毒”论治胃癌探析

胃癌占我国消化道恶性肿瘤第一位,明确胃癌的中医病因病机和治则治法,进而选择合适的抗胃癌中药具有重要的临床意义。藤梨根作为传统的治疗消化道肿瘤的中药,过去对其抗胃癌的功效多从清热解毒的角度认识,该文提出了藤梨根从"痰毒"论治胃癌的新思路,以期为拓宽藤梨根的抗胃癌疗效提供依据。

复方藤梨根制剂对K562/ADM多药耐药作用的体内实验研究

目的:研究复方藤梨根制剂逆转人红白血病耐药细胞株K562/ADM裸鼠移植瘤的多药耐药效应及机制。方法:建立K562/ADM裸鼠移植瘤多药耐药模型;以流式细胞仪(FCM)检测各组肿瘤细胞膜上P-gp的表达和肿瘤细胞内ADM蓄积浓度。结果:(1)ADM组P-gp的表达与NS组相比明显升高(P(0.05);不同剂量的FFTLG制剂与ADM合用时,P-gp的表达与ADM组相比显著下降(P(0.01)。单独应用FFTLG制剂,当浓度为0.8mg/mL时P-gp的表达与ADM组相比下降(P(0.05)。(2)与ADM组相比,ADM和不同剂量的FFTLG合用组肿瘤细胞内的ADM浓度均有上升(P(0.05)。结论:FFTLG制剂可以部分逆转荷瘤裸鼠的多药耐药性,其逆转效果似呈剂量依赖性。FFTLG制剂逆转荷瘤裸鼠多药耐药性的机理之一是通过下调肿瘤细胞膜上P-gp的表达或抑制P-gp的活性,增加肿瘤细胞内ADM的蓄积浓度而实现的。

藤梨根诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的调节机制

目的研究藤梨根(Actinidia arguta)抑制人食管癌Eca-109细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法采用MTT比色法,检测藤梨根正丁醇药液在不同浓度(1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml等)及不同时间(24 h、48 h、72 h等)对Eca-109细胞生长抑制作用;采用免疫组化SP法,检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase的表达。结果藤梨根正丁醇药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%。瘤细胞作用24 h﹑48 h﹑72 h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强(P<0.01);同时伴有Bcl-2表达减弱7,2 h后最明显,差异有显著意义(P<0.01)。藤梨根正丁醇药液促进Caspase-3、Caspase-9表达明显增强,而对Caspase-8表达影响较小。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达,激活Caspase-9、Caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。

复方藤梨根制剂对胃癌细胞乙酰肝素酶、基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨复方藤梨根制剂抑制胃癌转移机制。方法:建立裸鼠胃癌腹腔移植瘤模型24只,随机分成生理盐水组、复方藤梨根制剂低剂量、中剂量和高剂量组;18天后,给予复方藤梨根制剂灌胃21天。随后观察裸鼠生存天数和死亡后肿瘤转移浸润情况;用RT-PCR方法检测各组肿瘤组织中HPA、MMP-9 mRNA的表达。结果:对照组与低剂量治疗组转移部位的赋值评分显著高于中、高剂量组;对照组胃癌细胞的HPA mRNA表达高于中、高剂量组(P<0.05);对照组胃癌细胞的MMP-9 mRNA表达明显高于各给药组(P<0.05)。结论复方藤梨根制剂可能通过下调HPA、MMP-9基因的表达而抑制胃癌转移并延长生存时间。

猕猴桃果实发育中内源激素水平变化的研究

应用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定了美味猕猴桃‘Ｈａｙｗａｒｄ’受精和果实发育中内源生长素（ＩＡＡ）、玉米素（ＺＲｓ）和脱落酸（ＡＢＡ）水平的变化，以及未受精果实对这些激素变化的影响。结果表明，在花前子房中三类激素已有一定的水平。花后２天完成受精作用，初生胚乳核开始分裂。花后５－７天，合子分裂，果实中ＩＡＡ、ＡＢＡ含量达到高峰。花后１０－４０天和８０－１００天，果实各有一次快速膨大期，前期与果肉中ＺＲｓ、ＩＡＡ含量提高和ＡＢＡ含量降低密切相关；后期与果肉中ＺＲｓ含量提高有关，此时果心中ＡＢＡ含量大幅度提高对调节果实物质转化、淀粉积累和种子成熟起重要作用。讨论了果心和果肉的内源激素分布、未受精果实内源激素水平的变化及果实生长模式。

复方藤梨根制剂对小鼠CT26移植瘤生长及对MVD影响的研究

目的:通过建立Balb/c小鼠CT26人工种植模型,研究复方藤梨根制剂对肿瘤抑制效果及对MVD表达的影响。方法:①100只7周龄雌雄各半Balb/c小鼠随机分为5组,即空白对照组、荷瘤对照组、低剂量给药组、中剂量给药组、高剂量给药组。各组分别皮下接种造模。②造模后第2 d开始连续灌胃3周。给药组予低浓度0.5 g/mL、中浓度1 g/mL、高浓度2 g/mL复方藤梨根制剂灌胃,空白对照组、荷瘤对照组每天以生理盐水灌胃。③所有小鼠第22 d处死,观察各组的瘤重、抑瘤率,免疫组化检测各组小鼠肿瘤CD34标记的MVD。结果:FFTLG低、中、高剂量组抑瘤率分别为-7.05%、23.03%、32.91%;中、高剂量给药组的瘤重与低剂量组和荷瘤组有明显差异(P<0.05),中、高剂量给药组的MVD对比荷瘤对照组有显著性差异(P<0.05)。结论:复方藤梨根制剂能抑制肿瘤生长,减少CT26瘤体中MVD,具有抗肿瘤血管生成作用。

应用基因芯片研究藤梨根对胃癌细胞的作用

目的研究藤梨根作用于人胃低分化腺癌BGC-823细胞株24 h时基因表达谱的改变。方法应用包含105条在肿瘤转化和发生过程密切相关的人类基因cDNA表达谱芯片,检测藤梨根作用于胃癌细胞后基因表达的调控。结果胃癌细胞在藤梨根作用后24 h,21条与胃癌发生和转化相关的基因有差异改变,其中4条基因上调,17条基因下调。结论ERBB2、TRAILR2、p53、TNF、Cyclin E基因的表达改变可能与藤梨根杀伤和诱导胃癌细胞调亡有关。

藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及Bcl-2的影响

目的研究藤梨根提取物对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其部分作用机理。方法采用不同浓度的藤梨根提取物作用于人胃癌SGC-7901细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫组织化学方法检测Bcl-2基因表达。结果藤梨根作用于SGC-7901,在(8～32)mg/mL时促进该细胞呈不同程度的凋亡;藤梨根提取物大、中、小剂量组对人胃癌SGC-7901细胞Bcl-2蛋白表达阳性灰度值分别为103.41±1.01,104.05±1.239,0.52±1.09。结论藤梨根提取物对SGC-7901有明显促凋亡作用;藤梨根提取物抑制SGC-7901 Bcl-2蛋白水平的表达有可能是促进SGC-7901凋亡的作用机制。

复方藤梨根制剂下调乙酰肝素酶表达抑制胃癌细胞转移

目的:研究探讨复方藤梨根制剂抑制胃癌细胞转移的机制。方法:以SGC-7901胃癌细胞株建立胃癌裸鼠原位移植瘤模型,将裸鼠随机分为生理盐水组,复方藤梨根制剂低剂量、中剂量及高剂量组,接受连续21天口服灌注治疗。根据胃癌细胞转移的部位进行赋值评分,观察复方藤梨根制剂对裸鼠胃癌移植瘤转移的影响,并用荧光定量PCR仪(FQ-PCR)检测胃癌细胞乙酰肝素酶mRNA表达的影响。结果:根据胃癌细胞转移部位的赋值评分,生理盐水组与低剂量治疗组评分显著高于中、高剂量组;经FQ-PCR法检测,生理盐水组与低剂量治疗组的胃癌组织乙酰肝素酶mRNA表达显著高于中、高剂量治疗组。结论:在裸鼠动物模型,复方藤梨根制剂可能是通过下调乙酰肝素酶mRNA表达来抑制胃癌细胞的远处转移,发挥其抗肿瘤作用。

两种藤梨根制剂促凋亡作用的实验研究

目的研究两种藤梨根制剂促进人食管癌Eca-109细胞凋亡的机制及差异。方法采用MTT比色法检测藤梨根正丁醇药液及乙酸乙酯药液在不同浓度(1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL等)及不同时间(24h、48h、72h等)对Eca-109细胞生长的抑制作用;采用TUNEL法检测其对癌细胞生长的诱导凋亡效应;采用免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及caspase的表达。结果藤梨根正丁醇药液对人食管癌Eca-109细胞的生长抑制作用,随着药物浓度的升高和作用时间的延长而增强,其生长抑制率可达87.2%。两种藤梨根制剂对瘤细胞有明显的凋亡效应,而在对照组未见有明显凋亡现象。瘤细胞作用24h、48h、72h后分别与对照组比较,用药组Bax蛋白表达明显增强(P<0.01);同时伴有Bcl-2表达减弱,72h后最明显,差异有显著意义(P<0.01)。藤梨根正丁醇药液促进caspase-3、caspase-9表达明显增强,而对caspase-8表达影响较小。藤梨根乙酸乙酯药液作用于肿瘤细胞时也可观察到类似的效应,且正丁醇药液对肿瘤细胞生长的抑制率高于乙酸乙酯药液。结论藤梨根可通过下调Bcl-2表达,激活caspase-9、caspase-3诱导Eca-109细胞凋亡。