PTEN与P-AKT在胃癌中的表达及意义

目的:检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)与磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(P-AKT)在胃癌和癌旁组织中的表达,探讨它们在胃癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EliVision法,检测68例胃癌及其癌旁组织中PTEN和P-AKT蛋白表达水平,同时对68例胃癌和癌旁组织采用反转录-聚合酶链反应检测其中PTEN mRNA的表达。结果:PTEN蛋白在胃癌组织中表达低于癌旁组织(P<0.01),P-AKT蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.01),两者呈负相关关系(P<0.05)。胃癌组织中PTEN蛋白的表达在性别和年龄间差异均无统计学意义(P>0.05),但在分化程度、肿瘤大小、临床分期和淋巴结转移表达差异均有统计意义(P<0.01)。胃癌组织中P-AKT蛋白表达在性别、年龄和肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05),但在分化程度、临床分期和淋巴结转移间表达差异均有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织PTEN mRNA的半定量表达明显低于癌旁组织PTEN mRNA的半定量表达(P<0.01)。结论:PTEN基因在胃癌组织中低表达,癌旁组织蛋白表达也明显高于胃癌组织,P-AKT蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,两者在胃癌中的表达呈负相关。

miRNA-381靶向PTEN对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制研究

目的探讨与研究miRNA-381靶向10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失基因(PTEN)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法将处于对数生长期的BGC-823细胞平均分为三组:对照组、实验1组与实验2组,分别转染miRNA NC 20 nmol/L与miRNA-381 mimic 20 nmol/L、40 nmol/L。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞迁移情况,实时定量PCR检测miRNA-381表达情况,Western blotting检测PTEN蛋白表达情况。结果转染后24 h、48 h,实验1组与实验2组的细胞增殖指数、细胞迁移指数、miRNA-381表达量高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);实验2组高于实验1组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。实验2组与实验1组的细胞凋亡指数、PTEN蛋白相对表达量均显著低于对照组,实验2组也较实验1组显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与转染后24 h相比,转染后48 h三组细胞增殖指数、凋亡指数、迁移指数以及miRNA-381相对表达量均显著增加,而PTEN蛋白相对表达量仅对照组显著增加,两个实验组均显著降低(P<0.05)。结论在胃癌细胞中,miRNA-381可通过靶向抑制PTEN表达,从而促进胃癌细胞增殖与迁移,抑制胃癌细胞的凋亡。

PTEN基因蛋白、Ptch在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨磷酸酶及张力蛋白同源基因蛋白(PTEN)、补丁蛋白(Ptch)在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。方法选取口腔鳞状细胞癌组织标本78例,同时选取正常口腔组织标本56例作为对照,采用免疫组化染色法检测PTEN、Ptch蛋白表达。结果口腔鳞状细胞癌中PETN阳性表达率为34.62%,明显低于正常口腔组织(P<0.05),而Ptch阳性表达率为67.95%,明显高于正常口腔组织(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、中低分化和有淋巴结转移口腔鳞状细胞癌组织PETN阳性表达率分别为13.04%、10.00%和11.43%,明显低于Ⅰ~Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移口腔鳞状细胞癌组织(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移口腔鳞状细胞癌组织Ptch阳性表达率为86.96%和88.57%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移口腔鳞状细胞癌组织(P<0.05);口腔鳞状细胞癌组织中PETN表达与Ptch表达呈负相关(γ_(s)=-0.655,P<0.05)。结论口腔鳞状细胞癌组织中PTEN表达下调,而Ptch表达上调,两者与临床病理特征有一定关系,且两者间存在负相关性。

妇科再造丸含药血清对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察妇科再造丸(FKW)含药血清对体外培养子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响及对人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白表达的调控作用。方法:取手术切除的子宫肌瘤标本,分离人子宫肌瘤原代细胞培养至3~4代;雌性SD大鼠灌喂高、中、低剂量FKW药液3d,取大鼠血清作用于培养的3~4代的子宫肌瘤细胞,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学法测定PTEN蛋白表达情况。结果:成功进行人子宫肌瘤细胞原代培养,培养至3~4代的子宫肌瘤细胞纯度接近100%;FKW各剂量组含药血清作用72h后能显著降低子宫肌瘤细胞的增殖活力(P<0.05),提高其凋亡率(P<0.01),并且能上调子宫肌瘤细胞PTEN的表达(P<0.01)。结论:FKW含药血清抑制子宫肌瘤细胞增殖,诱导其凋亡的作用可能是通过上调PTEN表达实现的。

microRNA-10调控PTEN基因在促进胰腺癌细胞增殖和迁移的作用

目的:研究胰腺癌患者血浆和癌组织中microRNA(miRNA)-10和张力蛋白同源物基因(PTEN)的表达,并探讨两者在胰腺癌中的调控关系;研究miRNA-10在人胰腺癌PANC-1细胞中的表达及其对PANC-1细胞增殖和迁移的影响。方法:选择80例胰腺癌患者为研究组及80例健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测胰腺癌患者血浆中miRNA-10和PTEN基因及组织中miRNA-10的表达,并分析miRNA-10和PTEN基因表达的相关性。采用四甲基偶氮唑盐法和细胞集落形成实验研究miRNA-10在人胰腺癌PANC-1细胞生长和增殖能力,采用划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:两组血浆中miRNA-10和PTEN mRNA的表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。miRNA-10和PTEN mRNA在胰腺癌患者血浆中表达呈线性负相关(r=-0.716,P<0.01)。miRNA-10在胰腺癌患者血浆和组织中表达呈正相关(r=0.938,P<0.01)。MTT法检测结果显示,miRNA-10细胞转染24、48、72、96 h的A值均高于对照组(P<0.05)。平板克隆形成实验检测结果显示:miRNA-10转染2周后,miRNA-10转染的细胞克隆数均高于对照组(P<0.05)。划痕实验结果显示:转染miRNA-10分别在24、48 h的PANC-1细胞中,miRNA-10划痕间距与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);PTEN组与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:PTEN可能是miRNA-10的作用靶点,miRNA-10通过负性调控PTEN基因参与胰腺癌的发生发展、侵袭和转移,miRNA-10可作为胰腺癌的辅助诊断的一个新的检测指标。

结直肠癌血浆中microRNA-181和PTEN基因与病理分期的关系

目的:研究结直肠癌(Colorectal cancer, CRC)患者血浆和癌组织中microRNA-181和张力蛋白同源物基因(PTEN)的表达及其与临床分期,并探讨CRC在结直肠癌中的诊断价值。方法:选择120例结直肠癌患者及100例健康体检者为对照。采用实时荧光定量PCR技术检测结直肠癌患者血浆中miRNA-181和PTEN基因、以及组织中miRNA-181的表达,采用免疫组织化学技术检测结直肠癌患者血浆和组织PTEN蛋白的表达,并分析miRNA-181和PTEN蛋白表达与结直肠癌病理分期的关系。采用四甲基偶氮唑盐法和细胞集落形成实验研究miRNA-181和PTEN在CRC细胞株SW 1116生长和增殖能力。结果:与正常对照组比较,结直肠癌患者血浆中miRNA-181明显升高(0.58 &#177;0.23 vs 3.28 &#177;0.46 (P 【0.01),血浆中PTEN基因明显下降(5.37 &#177;1.34 vs 0.26 &#177;0.21) (P = 0.01)。与癌旁正常结直肠粘膜组织比较,结直肠癌组织PTEN蛋白阳性表达率明显降低(100% vs 36.67%) (P 【0.001);随着分期恶性度的升高,miRNA-181相对表达量增加,PTEN基因和蛋白的表达下降,各组间比较差异均有统计学意义(P 【0.01, P 【0.001)。四甲基偶氮唑盐法显示miRNA-181组在不同时间的CRC细胞株SW 1116生长速度加快,PTEN组细胞生长落后(P 【0.01, P 【0.001, P 【0.001)。平板克隆形成实验显示miRNA-181组在CRC细胞株SW 1116增殖能力增强,PTEN组细胞增殖能力减弱(P 【0.001)。结论:miRNA-181和PTEN在CRC血浆和组织中的异常表达与结直肠癌病理分期密切相关,miRNA-181对结直肠癌的辅助诊断和预后监测具有重要的临床意义。

血清CA199、HE4、PTEN联合检测对子宫内膜癌病情及预后的评估价值

目的分析血清糖类抗原199(CA199)、人附睾蛋白4(HE4)、人第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)联合检测对子宫内膜癌病情及预后的评估价值。方法选择2018年1月—2020年2月收治的子宫内膜癌91例作为观察组,另选取同期治疗的子宫内膜增生87例作为对照组,以及健康体检者81例作为健康组。比较3组、不同国际妇产科联合会分期子宫内膜癌患者及不同预后子宫内膜癌患者的血清CA199、HE4、PTEN水平,并分析三者联合检测对子宫内膜癌患者预后的评估价值。结果观察组和对照组血清CA199、HE4水平高于健康组,PTEN水平低于健康组;且观察组血清CA199、HE4水平高于对照组,PTEN水平低于对照组(P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ期子宫内膜癌患者血清CA199、HE4水平低于Ⅲ~Ⅳ期患者,PTEN水平高于Ⅲ~Ⅳ期患者(P<0.05)。预后良好组血清CA199、HE4水平低于预后不良组,PTEN水平高于预后不良组(P<0.05)。CA199、HE4、PTEN联合检测评估子宫内膜癌患者预后不良的曲线下面积为0.917,明显高于CA199、HE4、PTEN单独检测。结论随着子宫内膜癌患者病情进展血清CA199、HE4水平升高,PTEN水平下降,三者联合检测可为子宫内膜癌预后评估提供参考。

环磷酰胺及其代谢产物作用于卵巢癌细胞SKOV3后对PTEN基因的影响

目的探讨环磷酰胺(CP)及其代谢产物丙烯醛(ACR)作用卵巢癌细胞SKOV3后对人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的影响。方法选择不同浓度CP及其代谢产物ACR作用重组PTEN蛋白,采用硝基苯磷酸二钠(PNPP)检测PTEN的磷酸化活性,Western blot技术检测蛋白表达,通过生物素与蛋白结合检测药物与蛋白的结合方式;同时分析PTEN基因通路P53/TP53的表达改变;不同药物浓度作用细胞后通过免疫沉淀(IP)方法得到目的蛋白,通过高效液相色谱(HPLC)检测其蛋白磷酸化活性。结果药物代谢产物作用重组PTEN蛋白后其磷酸化活性随着药物浓度的增高而降低,ACR抗体作用表达随着药物浓度增高表达增多,不同实验组蛋白与生物素表达随药物浓度增高而增多,在细胞中随着药物浓度增高PTEN磷酸化活性降低,TP53蛋白表达随着药物浓度增加而减少。结论 CP代谢产物ACR可通过抑制PTEN蛋白磷酸化活性引起细胞毒性。

四逆汤协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离治疗肺癌的研究

目的从蛋白质类泛素化修饰角度解析温里剂四逆汤协同壮观霉素B1抑制肺癌细胞增殖、迁移和促进细胞凋亡的作用机制。方法实验分对照组、壮观霉素B1组、四逆汤组和联合药物组,于人非小细胞肺癌A549细胞株作用48 h后,采用Westernblotting法检测小泛素相关修饰蛋白-1(SUMO1)、10号染色体缺失磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷酸化Akt(p-AKT)和Caspase-9的蛋白表达水平;MTT实验绘制细胞增殖曲线;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果壮观霉素B1和四逆汤均能够降低A549细胞共价态SUMO1和p-Akt水平,增加PTEN和活化Caspase-9的蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,壮观霉素B1和四逆汤联合药物组对细胞的抑制作用显著强于各单独给药组。结论四逆汤能够协同壮观霉素B1诱导PTEN与SUMO1解离,进而抑制肺癌细胞增殖、转移和促进细胞凋亡。

姜黄素对神经胶质瘤细胞的抑制作用及机制研究

目的探讨天然中药小分子化合物姜黄素对人神经胶质瘤的作用及调节机制。方法以人胶质母细胞瘤U251细胞株为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度姜黄素在24、48、72 h对U251增殖的作用,通过划痕实验、Transwell小室方法检测姜黄素对U251细胞迁移和侵袭能力的调节;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)荧光染色法检测姜黄素对U251细胞凋亡的作用;以Western blot检测姜黄素对蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、人第10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白表达的影响。结果与对照组相比,姜黄素10μmol/L以上时,对U251细胞增殖具有抑制作用;与对照组比较,姜黄素能明显抑制U251的迁移与侵袭能力,促进U251细胞的凋亡;且姜黄素可明显抑制p-Akt蛋白表达、促进PTEN蛋白表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素抑制神经胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等作用可能与下调p-Akt蛋白、上调PTEN蛋白表达有关。