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植物天冬氨酸代谢途径关键酶基因研究进展 被引量:14
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作者 于妍 宋万坤 +5 位作者 刘春燕 高运来 李文福 孙殿君 陈庆山 胡国华 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期7-11,17,共6页
谷类作物和豆类作物的营养价值主要体现在以天冬氨酸为前体的必需氨基酸的含量上。植物中这些氨基酸的含量受天冬氨酸代谢途径中关键酶基因的影响。本文综述了这些酶基因的克隆、在大肠杆菌和不同植物中表达的研究进展。
关键词 天冬氨酸 代谢途径 必需氨基酸 酶基因 克隆 表达
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家蚕酪氨酸羟化酶的氨基酸序列分析和重组表达 被引量:1
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作者 刘春 周梦婷 +4 位作者 谭祥 吕金凤 李栋 聂红毅 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期467-473,共7页
酪氨酸羟化酶参与昆虫体色和斑纹黑色素合成以及免疫黑化反应等重要生理过程。为了研究家蚕(Bombyx mori)酪氨酸羟化酶的生物学功能,采用生物信息学方法对家蚕与其它物种的酪氨酸羟化酶氨基酸序列进行比对分析,结果显示不同物种之间的... 酪氨酸羟化酶参与昆虫体色和斑纹黑色素合成以及免疫黑化反应等重要生理过程。为了研究家蚕(Bombyx mori)酪氨酸羟化酶的生物学功能,采用生物信息学方法对家蚕与其它物种的酪氨酸羟化酶氨基酸序列进行比对分析,结果显示不同物种之间的酪氨酸羟化酶具有保守性,在昆虫物种之间尤其保守;家蚕酪氨酸羟化酶含有保守的功能位点,如铁原子结合位点His331、His336、Glu376,底物蝶呤结合位点Gly293、Leu294、Leu295、Phe300、Glu332、Tyr371和Glu376。构建重组质粒p29-Bmth,利用原核表达系统实现了家蚕酪氨酸羟化酶蛋白的重组表达,通过高效液相色谱分析证明纯化获得的重组家蚕酪氨酸羟化酶蛋白具有酪氨酸羟化活性,测定其活性为0.81 U,比活性为0.13 U/mg。研究结果为深入研究家蚕酪氨酸羟化酶的生理功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 酪氨酸羟化酶 氨基酸序列 功能位点 原核表达 纯化 酶活性
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白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因开放读框的克隆及其在大肠杆菌中的表达
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作者 刘伟 李若瑜 +2 位作者 卜定方 王端礼 马圣清 《菌物系统》 CSCD 北大核心 2002年第4期547-551,共5页
根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY6的序列和编码492NEIVR496的序列分别设计上、下游引物,以白念珠菌ATCC11006的基因组DNA为模板进行PCR扩增;将PCR产物克隆并做序列分析后,在大肠杆菌中进行表达。结果表明PCR获... 根据白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框中编码1MSSVKY6的序列和编码492NEIVR496的序列分别设计上、下游引物,以白念珠菌ATCC11006的基因组DNA为模板进行PCR扩增;将PCR产物克隆并做序列分析后,在大肠杆菌中进行表达。结果表明PCR获得大小约为1.5kb的产物,测序分析表明克隆的产物大小为1491bp,正是白念珠菌角鲨烯环氧化酶基因的开放读框,表达得到约为80kDa大小的蛋白,与理论计算一致。本研究为开展特比萘芬与其作用靶酶关系的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白念珠菌 角鲨烯环氧化酶基因 开放读框 基因克隆 大肠杆菌 表达 特比萘芬靶酶 蛋白分析 抗真菌药
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苦荞芦丁水解酶序列鉴定及在昆虫系统中的表达 被引量:1
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作者 杜程 崔晓东 王转花 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第14期91-98,共8页
为获得苦荞麦中芦丁水解酶基因(Fagopyrum tartaricum rutin-hydrolyzing enzyme gene,FtRHE),以云荞1号苦荞种子为材料,制备获得天然芦丁水解酶(rutin-hydrolyzing enzyme,RHE),通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定天然RHE序列信... 为获得苦荞麦中芦丁水解酶基因(Fagopyrum tartaricum rutin-hydrolyzing enzyme gene,FtRHE),以云荞1号苦荞种子为材料,制备获得天然芦丁水解酶(rutin-hydrolyzing enzyme,RHE),通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定天然RHE序列信息,结合转录组数据,筛选苦荞RHE基因FtRHE。结果显示,纯化的天然RHE,分子质量约为62 kDa,肽质量指纹图谱证明其为一种β-葡萄糖苷酶,质荷比为914.428 6的肽段FSISWSR为其特征肽段。在苦荞种子转录组数据中筛选获得FtRHE基因序列基础上,通过反转录聚合酶链式反应获得了苦荞FtRHE基因。FtRHE开放阅读框由1 539个碱基组成,编码512个氨基酸,1~29位氨基酸为其信号肽。多重序列比对发现RHE与不同物种来源的β-葡萄糖苷酶氨基酸保守性不高,同源性普遍集中在54%~62%之间。构建Bacmid-FtRHE杆粒,转染昆虫细胞Sf9后,成功表达了具有较高活性的重组RHE。结果表明,获得的FtRHE即为苦荞中RHE基因。该研究为高含量芦丁及无苦涩味荞麦育种以及由芦丁生物转化生产槲皮素等的应用提供了理论支持。 展开更多
关键词 苦荞麦 芦丁水解酶 氨基酸序列 昆虫表达系统 槲皮素
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不同浓度氨基酸对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响
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作者 张梦媛 庄鲁 +6 位作者 万小娟 束刚 王丽娜 朱晓彤 高萍 王松波 江青艳 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1-6,共6页
【目的】研究不同浓度的氨基酸对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响及其机理。【方法】5日龄仔猪门静脉灌流后从中分离纯化出肝细胞并进行培养,在培养基中添加不同浓度的氨基酸(分别为猪血液中氨基酸生理浓度的1、2和4倍),24 h后收集上清和... 【目的】研究不同浓度的氨基酸对仔猪原代肝细胞尿素循环的影响及其机理。【方法】5日龄仔猪门静脉灌流后从中分离纯化出肝细胞并进行培养,在培养基中添加不同浓度的氨基酸(分别为猪血液中氨基酸生理浓度的1、2和4倍),24 h后收集上清和细胞。用比色法检测上清中尿素、底物氨和细胞中氨的浓度以及谷氨酰胺酶(Glutaminase,GLS)和谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)的活性,实时荧光定量PCR法检测细胞中氨甲酰磷酸合成酶1(Carbamyl phosphate synthetase 1,CPS1)、精氨基琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthetase,ASS)、精氨琥珀酸裂解酶(Argininosuccinate lyase,ASL)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(Omithine transcarbamylase,OTC)和精氨酸酶(Arginase,ARG)等尿素循环相关酶基因m RNA的表达。【结果】4倍氨基酸组显著提高了仔猪原代肝细胞培养上清中氨和尿素的浓度,增强了细胞中GLS的活性。荧光定量PCR结果表明,4倍氨基酸组显著提高了细胞中CPS1、ASS和ASL等基因m RNA的表达。1.0和2.0 mmol·L^(-1)的NH4Cl显著促进细胞尿素的合成。【结论】在仔猪原代肝细胞中,高浓度氨基酸可以通过提高GLS的活性等途径加速氨的积累,促进CPS1、ASS、ASL等尿素循环相关酶基因m RNA的表达,从而促进尿素的生成。 展开更多
关键词 仔猪 原代肝细胞 氨基酸 尿素循环 基因表达 酶活性
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含非天然氨基酸定点突变的MLL3_(SET)蛋白表达与纯化
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作者 王小琴 黄银萍 +2 位作者 王蔚倩 吴萍 全舒 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期194-202,共9页
在组蛋白H3K4甲基转移酶MLL3的催化结构域(MLL3_(SET))中定点引入非天然氨基酸N-炔丙基赖氨酸(N-propargyl-lysine,PrK),表达、纯化该突变蛋白(MLL3_(SET)*),并评估突变蛋白的酶活,为后续进一步利用单分子荧光共振能量转移技术(smFRET)... 在组蛋白H3K4甲基转移酶MLL3的催化结构域(MLL3_(SET))中定点引入非天然氨基酸N-炔丙基赖氨酸(N-propargyl-lysine,PrK),表达、纯化该突变蛋白(MLL3_(SET)*),并评估突变蛋白的酶活,为后续进一步利用单分子荧光共振能量转移技术(smFRET)表征MLL3的作用机制奠定基础。将MLL3_(SET)接入pET-28b(+)构建表达载体,通过MLL3_(SET)晶体结构分析选择N4905位点进行PrK的引入;对商业化菌株(C321.ΔA.exp)进行基因组改造以引入T7 RNA聚合酶基因,并在改造后的菌株中表达、纯化MLL3_(SET)^(*),最后测定MLL3_(SET)^(*)的酶活性。结果表明,在构建的C321.ΔA.exp lacZ∷T7p07菌株中,pET28b-MLL3_(SET)^(*)在共转入aaRS-tRNA正交系统以及外源添加PrK后能够正常表达;通过Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析成功纯化出高纯度的MLL3_(SET)^(*)蛋白;多酶级联反应结果显示,MLL3_(SET)^(*)的酶活性比野生型蛋白低,但仍具有约43%的甲基转移酶活性。本研究成功实现了含PrK的MLL3_(SET)蛋白的原核表达与纯化,突变蛋白保留了一定酶活性,为后续深入研究MLL3的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 MLL3_(SET) 基因组改造 非天然氨基酸 表达纯化 酶活性
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Identification of Festuca arundinacea Schreb Cat1 Catalase Gene and Analysis of its Expression Under Abiotic Stresses 被引量:14
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作者 Wen-Long Yang Jing-Mei Liu +3 位作者 Fan Chen Qiang Liu Yan-Dao Gong Nan-Ming Zhao 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2006年第3期334-340,共7页
Ablotlc stresses, such as drought, high salinity, and cold/freezing, lead plants to produce excess reactive oxygen species. Catalase, a unique hydrogen peroxide-scavenging enzyme, plays a very Important role In plants... Ablotlc stresses, such as drought, high salinity, and cold/freezing, lead plants to produce excess reactive oxygen species. Catalase, a unique hydrogen peroxide-scavenging enzyme, plays a very Important role In plants. To characterize the catalase involved In plant response to ablotlc stresses, we constructed a cDNA library from 4℃-treated Festuca arundinacea Schreb seedlings and isolated a catalase gene from this library. The cDNA (FaCat1, 1 735 bp) contained an open reading frame of 1 479 bp. BLAST analysis Indicated that the deduced amino acid sequence showed 96% Identity with that from wheat TaCat1 and 87% Identity with that from maize ZmCat2. Northern blotting analysis showed an obvious Increase of FaCat1 transcripts In leaves In contrast with roots. Time-course analysis of the expression of FaCat1 in F. arundinacea leaves showed that FaCat1 expression was upregulated in cold- and salt-stressed leaves, with the FaCat1 transcripts accumulat-Ing mostly at 4 or 2 h after cold or salt stress, respectively. No significant changes in FaCat1 transcription were observed in dried leaves and inhibition of FaCat1 transcription was found In absclsic acid (ABA)-treated leaves, Indicating that the FaCat1 gene is differentially expressed during cold, high salt, drought, and ABA treatment In F. arundinacea leaves. 展开更多
关键词 abscisic acid amino acid sequences CATALASE cold stress complementaryDNA DNA libraries drought enzymeS gene expression genes lawns and turf leaves open readingframes ROOTS salinity stress stress response transcription wat er stress
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不同施氮水平对烟草叶片游离氨基酸含量及脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响 被引量:5
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作者 黎旺姐 李勇 +5 位作者 张刚 王莎莎 杨利云 李军营 崔明昆 龚明 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1634-1640,共7页
人工施氮量是影响烟叶中游离氨基酸含量的重要因素,而后者很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同施氮量对烟叶中游离氨基酸含量的影响,在大田条件下通过设置施氮量为60 kg/hm^2、90 kg/hm^2和120 kg/hm^2 3个施氮水平进行处理,... 人工施氮量是影响烟叶中游离氨基酸含量的重要因素,而后者很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同施氮量对烟叶中游离氨基酸含量的影响,在大田条件下通过设置施氮量为60 kg/hm^2、90 kg/hm^2和120 kg/hm^2 3个施氮水平进行处理,用分光光度法和气相色谱-质谱联用法分析,研究了不同施氮水平对游离氨基酸含量以及脯氨酸和苯丙氨酸代谢关键酶及其基因表达的影响。结果表明,随施氮水平的不同,烟叶中总游离氨基酸、脯氨酸和苯丙氨酸含量随施氮水平增加而增高;而亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸和4-氨基丁酸含量在施氮水平为60 kg/hm^2时最高。脯氨酸代谢相关酶和苯丙氨酸代谢相关酶活性均随施氮水平升高而增强,其基因相对表达量也随之上调。上述研究结果表明施氮水平可显著影响烟叶中游离氨基酸含量、种类及其代谢过程。 展开更多
关键词 烟草 施氮量 游离氨基酸 酶活 基因表达
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不同生长温度对烟草叶片游离氨基酸含量及脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响 被引量:2
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作者 黎旺姐 李勇 +5 位作者 张刚 王莎莎 杨利云 李军营 崔明昆 龚明 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期1043-1054,共12页
游离氨基酸是烟叶中的重要化合物,它很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同生长温度对烟叶中游离氨基酸的含量及其代谢的影响,通过人工气候室设置均温18.5℃、23.5℃和28.5℃3个动态气温条件,在烟叶从早期生长至成熟的整个时期... 游离氨基酸是烟叶中的重要化合物,它很大程度上影响着烟叶的品质和风味。为了解不同生长温度对烟叶中游离氨基酸的含量及其代谢的影响,通过人工气候室设置均温18.5℃、23.5℃和28.5℃3个动态气温条件,在烟叶从早期生长至成熟的整个时期进行不同生长温度处理,用分光光度法、气相色谱-质谱法和荧光定量PCR分析,研究了不同生长温度下总游离氨基酸含量和单个游离氨基酸含量的变化规律及对脯氨酸和苯丙氨酸代谢的影响。结果表明,不同生长温度对烟叶生长发育过程中游离氨基酸总量和单一游离氨基酸含量有明显影响。其中,随着烟叶生长发育的进行,所含游离氨基酸含量逐渐下降。在不同生长温度处理下,随生长温度升高总游离氨基酸含量下降;各游离氨基酸含量基本上也随生长温度的升高而降低。对脯氨酸代谢相关酶(P5CS,OAT,ProDH)活性以及苯丙氨酸代谢相关酶(PAL,C4H)活性及其基因表达的定量研究表明,其酶活性和基因表达的变化与含量变化的趋势一致。上述研究结果表明,随着烟叶的生长发育和成熟,其游离氨基酸含量逐渐降低,而较低的生长温度有利于烟叶维持较高的游离氨基酸水平。 展开更多
关键词 烟草叶片 游离氨基酸 生长温度 氨基酸代谢相关酶 基因表达
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血管紧张素转化酶2和中性氨基酸转运载体BoAT1在不同日龄猪肠道中的表达差异 被引量:8
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作者 权素玉 王睿杰 +2 位作者 孙俊杰 吴昭淳 张源淑 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第4期36-39,共4页
研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段... 研究了肠道血管紧张素转化酶2(ACE2)和中性氨基酸转运载体B0AT1在不同生长阶段猪小肠各段中的分布表达,探讨其相互关系。研究选取3日龄仔猪、90日龄生长猪和120日龄成年猪十二指肠、空肠和回肠组织,采用体外扩增和荧光定量技术对各肠段组织中ACE2和B0AT1基因进行了定性和定量分析。结果显示ACE2基因在不同日龄猪小肠各段均有表达,相对表达量随日龄增长显著升高,120日龄猪表达量极显著上调。而肠道中B0AT1相对表达量逐渐下降,120日龄时显著下调。结果提示:ACE2在成年猪肠道组织中有较高表达,B0AT1在仔猪肠道组织中表达较高。 展开更多
关键词 ACE2 B0AT1 小肠 表达
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