晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响.方法体外培养3～5 d的乳鼠心肌细胞,用含1%或10%胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24 h,应用流式细胞仪和原位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体/凋亡细胞核分布的影响.结果AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响;在正常培养液培养时,心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加,24、48 h与12h相比,凋亡小体/凋亡细胞核分别增加了0.55、1.23倍;AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度,并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加,50、100μg/ml AGEs组与对照组相比,凋亡小体/凋亡细胞核12、24、48 h分别增加了0.74和1.21、1.15和1.78、0.83和1.19倍.结论AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响,但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤.

孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响

目的探讨孕期酒精接触对子鼠视皮质神经元凋亡的影响。方法从妊娠母鼠第5d酒精灌胃直至小鼠出生;采用激活的半胱氨酸天冬氨酸蛋白3(Caspase-3)免疫组织化学和原位末端标记(TUNEL)法观察P0、P7和P14小鼠视皮质神经元的凋亡。结果酒精实验组妊娠时间延长,出现死胎和畸形(小头畸形、无脑儿和脊柱脊髓裂等)。酒精实验组Caspase-3阳性率和凋亡指数明显高于对照组(P<0.001),高剂量酒精组明显高于低剂量组(P<0.01)。随着酒精剂量的增加,子鼠视皮质神经元的凋亡明显增加。结论孕期酒精接触可导致子鼠视皮质神经元凋亡,且有剂量依赖性和长时程效应。

尖锐湿疣组织中Survivin蛋白表达与角质形成细胞凋亡的相关性及意义

目的探讨Survivin蛋白在尖锐湿疣(CA)发生、发展中的作用。方法采用免疫组化和TUNEL技术检测56份CA组织(观察组)中Survivin蛋白表达和角质形成细胞凋亡指数,并与25份正常包皮组织(对照组)比较。结果观察组及对照组Survivin蛋白阳性率分别为64.29%(36/56)、4.00%(1/25),P<0.01;角质形成细胞凋亡指数分别为(9.73±3.51)%、(0.95±0.16)%,P<0.01;观察组Survivin蛋白表达阳性者及阴性者角质形成细胞凋亡指数分别为(6.16±2.58)%、(14.31±14)%,P<0.05。Survivin蛋白表达与凋亡指数呈负相关(r=-0.694,P<0.05)。结论 CA组织中存在Survivin蛋白过表达,可抑制角质形成细胞凋亡,促进CA的发生及发展。

激光辅助制动对精子核DNA的影响

目的:研究激光辅助制动精子是否引起精子核DNA损伤。方法:23例行体外受精(IVF)的男性精液标本,上游法处理后用0.45ms脉冲激光照射精子尾部制动精子。采用末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)和单细胞凝胶电泳法(SCGE)两种方法分别检测激光辅助制动处理前后阳性精子百分率。结果:TUNEL法检测激光辅助制动处理前后阳性精子的百分率分别为(1.32±0.61)%、(1.41±0.51)%,差异无显著性(P>0.05);SCGE法检测处理前后阳性精子百分率分别为(1.59±0.70)%、(1.83±0.68)%,差异亦无显著性(P>0.05)。结论:激光照射精子尾部辅助制动精子对精子核DNA无明显损伤。

早期心肌缺血心肌细胞凋亡的实验研究

探讨早期心肌缺血心肌细胞凋亡的意义。采用DNA缺口末端标记法 (TUNEL)对大鼠实验性心肌缺血早期 (6h内 )不同时间缺血损伤区心肌细胞凋亡的情况进行观察。结果 :缺血 1h在缺血区域发现少数散在的凋亡阳性细胞 ,3h达高峰 ,随后下降。正常区域未发现凋亡细胞。缺血边缘区域也在缺血 1h局部开始出现心肌细胞凋亡 ,并随缺血时间延长心肌细胞凋亡指数增加 ,缺血 5h达高峰。表明凋亡是早期缺血性心肌细胞损伤的主要方式 ,心肌凋亡检测可望为早期心肌梗死的死后诊断提供一个灵敏客观的新方法。

肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究

目的 探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。 方法 用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ; 结果 肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ; 结论 bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ;

^(125)I放射性粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤的有效性研究

目的探讨125I放射性粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤的疗效及其作用机制。方法人胰腺癌SW1990细胞株接种于BABL/c裸鼠右下肢旁腹股沟区偏背侧皮下,成瘤后取瘤块接种,6周后成瘤8～10mm。共16只成瘤大小合适的裸鼠用于实验,分别植入125I粒子(8只)和空载粒子(8只)。粒子植入后,每4天测量肿瘤的长径和短径并称裸鼠体重,裸鼠处死后称量瘤体重。瘤体标本行组织病理学检查、末端脱氧核苷酸转移酶-生物素dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞及免疫组化染色检测增殖细胞核抗原。结果 125I粒子治疗组肿瘤体积增长缓慢,而对照组肿瘤体积增长迅速。实验组和对照组瘤体重分别约(2.68±0.70)g和(4.68±1.45)g,两者的差异有统计学意义(P=0.021);抑瘤率约42.66%。粒子植入前、后实验组和对照组间裸鼠体重对比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组肿瘤细胞坏死明显,而对照组肿瘤细胞无明显或仅有少许坏死。TUENL法检查发现实验组和对照组的凋亡指数分别为(23.2±1.9)%和(8.1±1.5)%,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化染色发现:实验组及对照组增殖细胞核抗原(PCNA)阳性染色指数分别为(49.8±1.8)%和(82.2±2.4)%,两者的差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠心、肝、肺、肾及脾脏等组织无明显放射性炎症表现。结论 125I粒子组织间植入治疗人胰腺癌裸鼠移植瘤是有效的,其作用机制包括:直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡及降低细胞增殖,并且125I粒子植入瘤体内对周围脏器是安全的。

骨髓间充质干细胞移植可促进移植胰岛周围新生血管形成

目的探讨胰岛移植联合骨髓间充质干细胞(MSC)移植能否促进移植胰岛周围新生血管形成。方法以非肥胖糖尿病(NOD)小鼠作为受体,将NOD小鼠随机分为4组,联合移植组(6只)、单独胰岛移植组(6只)、单独MSC移植组(6只)、假性移植组(3只)。观察各组NOD小鼠移植后血糖和存活率的变化;采用5-乙炔基-2’脱氧尿苷(Ed U)及d UTP缺口末端标记(TUNEL)方法,在胰岛移植后1、2、4周检测单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的增殖与凋亡情况;采用光学显微镜(光镜)直接观察、组织化学及免疫组织化学的方法观察并定量分析,移植术后2、4、8周单独胰岛移植组和联合移植组移植胰岛的周围新生血管密度。结果 MSC联合移植与胰岛单独移植均能明显改善移植后小鼠的血糖水平,提高NOD小鼠的存活率。MSC联合移植可促进胰岛细胞再生,减少细胞凋亡。联合移植组移植胰岛周围血管密度明显大于单独胰岛移植组。结论 MSC可以促进移植胰岛周围新生血管生成,增加移植胰岛的血供,保护移植胰岛的功能与活性。

C-fos和增殖细胞核抗原在人胎小肠组织中的表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)、C-fos蛋白和凋亡因子在人胎小肠组织中的表达规律。方法应用免疫组织化学法和原位末端标记法(TUNEL)检测第2、3、4三个月龄段16例人胎小肠组织细胞增殖和凋亡的表达情况。结果第2～4个月龄段,PCNA和C-fos蛋白在人胎小肠壁组织细胞中均有阳性表达。随着胎龄增加,人胎小肠壁组织细胞中PCNA蛋白的阳性表达数量和染色强度平均值(AI)均呈逐渐升高趋势(P<0.01),C-fos蛋白的阳性表达数量则呈先升高再降低趋势,而AI值呈逐渐升高趋势(P<0.01)。第2～4个月龄段时,TUNEL染色阳性细胞在人胎小肠壁各层组织内均有分布,随着胎龄增加,TUNEL阳性细胞数量和AI值均呈先升高再降低趋势(P<0.01)。结论 PCNA和C-fos蛋白参与人胎早期小肠壁组织细胞的生长发育,尤其在人胎发育第3个月龄段,细胞增殖和凋亡数量明显增多,此期可能是小肠组织发育的关键时期。

白介素12诱导T细胞凋亡的作用

目的 :探讨白介素 12 (IL - 12 )对T细胞凋亡的作用。方法 :用dUTP缺口末端标记(TUNEL)和AnnexinV的方法测定IL - 12诱导后T细胞凋亡率。结果 :IL - 12诱导人的白血病T细胞株TIB - 15 2和人的淋巴瘤T细胞株HTB - 176的凋亡 ,以 5 0ng/mL的质量浓度作用效果最佳 ,作用时间在 3和 6d内达到最高峰。结论 :IL - 12能诱导T细胞的凋亡 ,其诱导作用从细胞早期质膜的改变开始 ,并与IL - 12的浓度和T细胞成熟状态及作用时间有关。

地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞凋亡的研究

本文用透射电镜的方法，研究了地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞的凋亡，并确立了乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞形态学特征；含溴化乙锭的琼脂多糖（１５％）电泳检测乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞的断裂ＤＮＡ；末端标记法（ＴＵＮＥＬ法）直接、持异的标记乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞断裂ＤＮＡ。获得地噻咪松诱导乳鼠胸腺细胞中凋亡细胞，以及透射电镜下可见凋亡细胞的典型形态学特征；ＤＮＡ琼脂糖电泳呈典型梯状条带；ＴＵＮＥＬ法中凋亡细胞着染，褐色颗粒沉着。提示不同浓度的地噻咪松可诱导乳鼠胸腺细胞凋亡，稍加改进ＴＵＮＥＬ法后，显示结果比较好。

意大利蜜蜂工蜂脂肪体胚后发育过程中细胞的增殖和凋亡

脂肪体是昆虫体内物质贮备和中间代谢的重要组织。本研究通过显微形态观察、BrdU免疫组织化学和原位末端转移酶标记(TUNEL)细胞凋亡检测技术,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂脂肪体胚后发育过程中细胞的增殖和凋亡特点进行了比较研究。结果表明:意大利蜜蜂工蜂脂肪体细胞数量的快速增加集中在幼虫发育前期(1-3龄),而细胞的凋亡则集中在蛹发育早期的2-3 d(预蛹-2日龄蛹)时间之内。在变态发育中,工蜂幼虫脂肪体凋亡降解后重新组建形成成虫的脂肪体。本研究为昆虫脂肪体的功能研究以及昆虫组织细胞自噬和凋亡的机制研究提供一定的证据。

家榆种子老化过程中ROS-类caspse-3途径的初步研究

以家榆种子为试材,在37℃、100%相对湿度下进行老化处理后,结合DAPI染色和细胞原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)、激光共聚焦技术以及生化分析,检测家榆种子人工诱导老化过程中细胞核、活性氧(ROS)和类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性的变化.结果显示:随着老化程度加深,种子细胞染色质皱缩、凝聚,继而解体并被排出体外;表皮中最先发现TUNEL凋亡核,而后逐渐延伸到子叶和胚轴;老化处理5d时种子活性氧信号最强,且其与程序性死亡相关事件的发生具有时空一致性,同时在胞浆中检测到较强的caspase-3活性.研究表明,家榆种子人工老化可导致细胞程序性死亡,且存在与ROS迸发及类caspase-3相关联的信号通路.

寻常性银屑病患者骨髓造血细胞凋亡的研究

目的研究银屑病患者骨髓造血细胞的凋亡状况。方法应用免疫磁珠法分离银屑病患者与正常人骨髓CD34+细胞,原位末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测两组CD34+细胞的凋亡指数(AI)。结果银屑病患者骨髓CD34+细胞AI平均值为(7.6±0.9)%,正常人骨髓CD34+细胞AI平均值为(5.5±0.6)%,经统计学分析,两者差异无显著性(t=1.08,P>0.05)。结论银屑病患者骨髓造血细胞凋亡活性正常。

糖耐康改善ZDF大鼠胰岛β细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨糖耐康干预2型糖尿病大鼠(ZDF)胰岛β细胞凋亡的作用及机制。方法:6只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常对照组,雄性ZDF(fa/fa)大鼠30只设为2型糖尿病成模组。根据体质量及随机血糖将成模组大鼠随机分为5组,即模型组、二甲双胍组、糖耐康高、中、低剂量组。给药前测大鼠空腹血糖值及血清胰岛素值;给药6周再次检测大鼠空腹血糖值及血清胰岛素值并进行比较。采用HE染色观察胰岛形态结构的改变;采用TUNEL法检测各组大鼠胰腺组织中胰岛β细胞凋亡情况;免疫组织法观察细胞死亡信号转导效应酶Caspase-3在胰岛中表达情况。结果:给药6周后,糖耐康高、中、低剂量组均可显著改善ZDF大鼠空腹血糖(P<0.01);糖耐康高、中、低剂量组血清胰岛素值较模型组均有所升高,其中,高、低剂量组有显著性差异(P<0.05);给药组胰岛素抵抗指数较模型组均有所下降,其中,糖耐康高剂量组及二甲双胍组有极显著性差异(P<0.01)。HE染色显示给药组的胰岛细胞形态、结构较模型组有所改善。TUNEL结果显示ZDF(fa/fa)大鼠胰腺组织内均可见胰岛细胞凋亡改变,与模型比,给药组TUNEL阳性表达率均显著性减少(P<0.05)。免疫组化结果显示给药组Caspase-3蛋白表达下降(P<0.05)。结论:糖耐康能有效降低ZDF大鼠胰岛β细胞的凋亡,即对胰岛β细胞有一定的保护作用。

哌醋甲酯对ADHD动物模型SHR大鼠前额叶皮质层细胞凋亡的影响

目的本研究以自发性高血压大鼠(SHR)作为注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型,探讨ADHD动物模型SHR大鼠中是否存在前额叶皮质层细胞凋亡现象,以及哌醋甲酯能否影响大鼠前额叶皮质层细胞的凋亡。方法将SD大鼠作为对照组,SHR大鼠分为两组,每组6只,分别为SHR组和哌醋甲酯组。哌醋甲酯组给予哌醋甲酯(2mg/kg)连续灌胃14天,1次/日,对照组、SHR组给予等体积0.9%氯化钠注射液连续灌胃14天,1次/日,取脑,制作石蜡切片,用TUNEL染色观察前额叶皮质层细胞凋亡情况。结果 SHR组前额叶皮质层细胞凋亡率(17.23±0.61%)较对照组(2.74±0.24%)显著增高(F=-13.902,P<0.05);哌醋甲酯组前额叶皮质层细胞凋亡率(7.82±0.53%)较未经药物干预的SHR组显著减少(F=8.87,P<0.05),但仍然高于对照组(F=-9.048,P<0.05)。结论 ADHD动物模型SHR大鼠前额叶皮质层细胞存在凋亡增高现象,哌醋甲酯可以在一定程度上改善ADHD前额叶皮质层细胞的凋亡。

海马神经元谷氨酸损伤研究

目的:本研究通过观察体外培养的大鼠胚胎海马神经元在谷氨酸损伤后,细胞活力变化及细胞损伤的方式,初步探讨谷氨酸对神经元的损伤机制。方法:通过MTT,观察不同浓度(62.5μM、125μM、250μM、500μM)的谷氨酸损伤后不同时间(6 h、12 h、18 h、24 h)海马神经元活力的变化。经相差显微镜观察谷氨酸对海马神经元胞体及突起的影响。通过TUNEL、Hoechst染色比较正常培养组和损伤组的凋亡率,分析谷氨酸对海马神经元的损伤作用。结果:MTT结果显示,谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,在所观察的剂量范围内,随着谷氨酸浓度的增加,作用逐步增强,至500μM达峰值,随着损伤后孵育时间的延长,海马神经元活力逐渐下降。TUNEL和Hoechst染色结果也显示,125μM谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,主要引起海马神经元的凋亡。结论:谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,且这种作用呈现剂量相关性。中等剂量(125μM)谷氨酸损伤主要引起海马神经元的凋亡。

口腔鳞癌细胞FAS蛋白的表达及其与癌细胞凋亡的关系

目的探讨不同分化程度口腔鳞癌细胞FAS蛋白的表达及其同鳞癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学方法检测38例不同分化程度口腔鳞癌组织FAS蛋白的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位末端标记(TUNEL)技术,检测鳞癌细胞的凋亡。结果FAS蛋白表达及癌细胞的凋亡与口腔鳞癌的分化程度有关,低分化鳞癌的FAS蛋白阳性表达率显著低于高、中分化鳞癌(P<0.05),癌组织分化程度越低,癌细胞凋亡指数(AI)也越低(P<0.01);口腔鳞癌细胞FAS蛋白表达阴性组癌细胞AI明显低于FAS蛋白表达阳性组(P<0.01),FAS蛋白表达阳性组中,随FAS蛋白表达的下降,癌细胞AI逐步降低,凋亡指数与FAS蛋白的阳性表达呈正相关,各组间AI差异有统计学意义(r=0.68,P<0.01)。结论口腔鳞癌细胞FAS蛋白表达与癌组织分化程度及癌细胞凋亡有密切关系,FAS蛋白诱导的凋亡异常在口腔鳞癌的发生发展中起重要作用,FAS蛋白检测可能作为临床判断口腔鳞癌恶性度的有用标记物。

两种原位DNA断链标记技术检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞

目的:介绍两种原位 DNA 断链标记技术(TUNEL 和 ISNT)在检测常规石蜡组织切片和体外培养细胞凋亡中的应用。方法:用 TUNEL 和 ISNT 检测了甲基强的松龙处理的 SD 在鼠胸腺组织,正常鼠肠粘膜组织,肿瘤组织等标本的石蜡组织切片和体外培养的肿瘤细胞药物处理后发生凋亡的细胞爬片及再障病人骨髓涂片。结果:大鼠胸腺组织经甲基强的松龙处理后可见大量凋亡的 T 淋巴细胞,鼠肠粘膜组织粘膜上皮细胞以凋亡的方式更新脱落,肿瘤组织中可见散在凋亡细胞。药物处理的肿瘤细胞和再障病人骨髓细胞中有较多的凋亡细胞。被染成棕色或棕褐色的细胞在形态学上符合凋亡细胞的形态学改变。结论:两种方法具有应用范围广、特异性和敏感性都较高、可以检测早期的细胞凋亡、并可通过计算标记指数进行定量或半定量等的特点。特别适用于常规石蜡组织切片中细胞凋亡的检测,是不失于研究体内组织细胞凋亡的首选方法之一。

大鼠嗅觉神经元凋亡的相关研究

目的研究凋亡是否参与嗅上皮正常生理更替和嗅球摘除后嗅觉神经元死亡后再生过程,探讨凋亡与神经元再生的关系。方法应用原位末端标记法观察正常成年人鼠嗅上皮和摘除嗅球后大鼠嗅上皮12、24、48h和8d中凋亡的出现和改变情况。结果正常成年大鼠嗅上皮中有末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(TUNEL)阳性细胞〔(2.35±0.43)个/200μm〕,摘除嗅球后TUNEL阳性细胞数增加,24h达峰值〔(102.37±19.33)个/200μm〕,以后迅速下降,维持于低水平。结论凋亡参与成年嗅觉神经元生理性更替以及实验性嗅觉神经元死亡和再生的过程。可能是通过直接或间接的信号传导调节神经元前体细胞的增殖和分化。