基于液质联用和模拟炮制的诃子汤制狼毒大戟减毒机制研究

目的基于液质联用(LC-MS)和模拟炮制初探诃子汤制狼毒大戟的减毒机制。方法采用LC-MS分析狼毒大戟诃子汤制前后和狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制后的化学成分变化;小鼠分别灌胃给予狼毒大戟生品乙醇提取物、狼毒大戟水制品乙醇提取物、诃子汤乙醇提取物、狼毒大戟诃子汤制品乙醇提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷提取物、狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷提取物、狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制提取物,以粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平以及肠道病理损伤情况评价诃子汤制狼毒大戟和诃子汤模拟炮制狼毒大戟生品二氯甲烷部位的毒性变化。结果狼毒大戟中共鉴定出115种化合物,诃子汤中共鉴定出53种化合物。狼毒大戟经诃子汤炮制后有58种化合物的含量显著降低,12种化合物的含量显著升高。与空白对照组相比,狼毒大戟生品组及其水制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤明显。与狼毒大戟生品组相比,诃子汤组和狼毒大戟诃子汤制品组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著降低(P<0.01),肠道损伤得到修复。狼毒大戟生品二氯甲烷部位经诃子汤模拟炮制后,二萜类化合物和鞣质酚酸类化合物的离子强度变化率分别为-6.75%~8.09%和66.06%~100.00%。狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位二萜类化合物的离子强度变化率为-9.92%~54.72%,无鞣质酚酸类化合物。与空白对照组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位组和狼毒大戟诃子汤制品二氯甲烷部位组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平均显著升高(P<0.01),肠道损伤严重。与狼毒大戟生品二氯甲烷部位组相比,狼毒大戟生品二氯甲烷部位诃子汤模拟炮制组的粪便含水量、TNF-α和IL-1β的释放水平显著降低(P<0.01),肠道未见明显损伤。结论诃子汤制能缓和狼毒大戟肠道毒性,其减毒机制可能是狼毒大戟在炮制过程中引入的诃子汤中大量的鞣质酚酸类化合物在动物体内起到了药理拮抗作用。

ICP-MS测定诃子炮制前后无机元素含量及安全性评价

目的:建立诃子生品及清炒、麸煨、砂烫、烘制4种炮制品中26个无机元素的分析方法,对其中重金属及有害元素进行健康风险评估。方法:采用电感耦合等离子体质谱法,以铑和铼为内标,通过标准曲线法测定诃子中的26个元素;采用危害指数(HI)法和暴露限值(MOE)法进行健康风险评估。结果:26个元素的标准曲线线性关系良好,仪器检出限为0.0002~0.4342μg·kg^(-1),加样回收率为83.21%~116.84%。诃子炮制前后无机元素差异明显,部分重金属及有害元素所致健康风险较低。结论:该方法简便、准确,适用于诃子中无机元素的含量测定,为其重金属及有害元素健康风险评估提供了参考。

The changes of polyphenolic contents in two kinds of Terminalia chebula Retz.traditional Tibetian processing methods

Taking Terminalia chebula Retz. as the control product, the polyphenolic contents of the processed products in Tibetian, Rubia cordifolia L. processed Terminalia chebula Retz. and Euphorbia fischeriana Steud processed Terminalia chebula Retz. were analyzed by HPLC. Polyphenolic contents increased from 4.54% to 5.69% and 7.46%, respectively, which may lead to the change in their pharmacological effects.

Effects of different processing methods in Tibet on content of chebulinic acid in Terminalia chebula Retz.

To study the change of the content of chebulinic acid in Terminalia chebula Retz. by different processing methods in Tibet. We taking chebulinic acid as an indicator, the contents in Terminalia chebula Retz. and its processed products were analyzed by using HPLC. Also, the change rule was explored. Compared with Terminalia chebula Retz., the contents of chebulinic acid have decreased after processing, declining 50.18% for the Rubia cordifolia L. processed product, while 11.2% reduce for the Euphorbia fischeriana Steud processed product. After the specific preparation process in Tibet, the contents of chebulinic acid have reduced significantly, which may lead to different pharmacological effects.

复方铁苋工艺优化及抑菌成分研究

目的 基于抑菌药效优化复方铁苋最佳配伍及提取工艺,并揭示该中药复方的抑菌物质。方法 以抗嗜水气单胞菌药效为考察指标筛选复方铁苋最佳配伍,以没食子酸的含量和抑菌活性为评价指标,通过单因素实验和响应面法优化复方铁苋的提取工艺;对不同提取工艺的复方铁苋建立化学指纹图谱并指认“共有峰”,通过相关分析建立指纹图谱与抑菌药效间的“谱效关系”,并采用UPLC-Q-TOF-MS技术进行成分鉴定,找出抑制嗜水气单胞菌的关键成分。结果 复方铁苋以铁苋菜∶五倍子∶诃子=2∶2∶1(w/w/w)为最佳配伍,以料液比为1∶25,浸泡22 min后煎煮60 min为最佳提取工艺,该条件下复方铁苋提取物对嗜水气单胞菌具有最佳抑制效果;从复方铁苋指纹图谱中找出4个与抑菌活性呈高度正相关的物质:诃子酸>诃子鞣酸>没食子酸-4-O-(6-O-没食子酰)葡萄糖苷>没食子酸(相关系数在0.499~0.846之间)。结论 铁苋菜、五倍子、诃子在最佳配伍及工艺条件下具有明显抑制嗜水气单胞菌的活性,通过“谱效关系”快速找出该中药复方中潜在的抑菌物质,为复方铁苋进一步开发为防治嗜水气单胞菌的药物提供科学依据。

Enhanced Antioxidant Capacities in vivo Caused by the Change in Key Constituent of Terminalia chebula Retz. Treated with Tibet Traditional Process

In order to investigate the chemical-biological relationship caused by the special processing technology,the constituent＇s content and antioxidant capacity in vivo of Euphorbia fischeriana Steud processing Terminalia chebula Retz. have been tested. Taking T. chebula Retz. as control,the content of gallic acid is analyzed with high performance liquid chromatography（HPLC） method. The results show that the increase of gallic acid concentration from 4.54% to 7.46% leads to enhancement of the antioxidant capacities in vivo of the E. fischeriana Steud processing T. chebula Retz. The significant antioxidant capacity in vivo（p〈0.05） of the processed product possesses is better than the unprocessed herb. Its superoxide dismutase（SOD）and malondia-ldehyde（MDA） contents in serum,the MDA content in liver can match the effects of vitamine E when administered at high dosage.

诃子及其炮制品对CCl_4诱导小鼠肝损伤的保护作用

将120只小鼠随机分为空白组、四氯化碳(CCl_4)组、联苯双酯(DDB)组及低、中、高3个剂量(1.0、2.0、4.0 g/kg)的原药诃子、白狼毒制诃子和茜草制诃子组,共12个组,每组10只。给药7 d后,腹腔注射10 m L/kgCCl_4油溶液,建立小鼠肝损伤模型,检测各组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)活力,观察肝脏组织学结构变化。研究结果显示,诃子不同炮制品可减少CCl_4所引起的小鼠肝损伤,显著降低血清ALT、AST活力,提高肝脏SOD、GSH–Px活力,并对肝细胞有一定保护作用;药效表现由强到弱依次为茜草制诃子、白狼毒制诃子、生药诃子,且高剂量的效果优于低剂量。以茜草制诃子高剂量组4.0 g/kg效果最为理想,其作用机制可能与抗氧化性有关。

诃子炮制前后HPLC指纹谱比较研究

目的建立诃子HPLC化学指纹图谱,用于比较炮制前后其化学成分的变化。方法采用Diamonsil Plus C18-A柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.3%磷酸-甲醇为流动相梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长270 nm,柱温30℃;以中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)建立指纹谱。结果生品和制品各标定24个共有峰,其中23个峰为生品和炮制品所共有;通过比较可见炮制前后化学成分在量的方面发生显著变化,有成分含量增高,亦有成分含量降低。结论诃子在炮制前后化学成分间发生了转化。

诃子炮制前后多糖的含量变化研究

采用苯酚-硫酸法测定了诃子炮制前后多糖的含量变化情况,为研究诃子“煨熟固肠止泻”的炮制原理提供理论依据。方法学考察结果显示葡萄糖质量浓度在4.028-16.11μg/mL浓度与吸光度具有良好的线性关系;平均回收率为97.3%,RSD=1.3%（n=6）。使用该方法测得的不同产地诃子药材生品中多糖含量在4.35%-10.64%,制品中多糖含量在5.17%-10.79%。结果表明炮制后诃子中多糖含量略有增高。

蒙药金色诃子炮制品对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用及其急性毒性研究

目的:观察蒙药金色诃子不同炮制品对α-萘异硫氰酸酯致大鼠肝损伤的保护作用及其急性毒性。方法:采用a-萘异硫氰酸酯建立大鼠肝损伤模型,给予不同金色诃子炮制品,观察其降酶保肝作用。采用最大给药量方法进行急性毒性实验。结果:与模型组比较,烘制金色诃子能够明显降低a-萘异硫氰酸酯所致肝损伤大鼠血清AST和ALT水平(P<0.05)。急性毒性实验小鼠未见异常反应,烘制金色诃子、煮制金色诃子、金色诃子肉最大给药剂量为临床用药量的500倍,生品最大给药剂量为临床用药量的375倍。结论:烘制金色诃子对a-萘异硫氰酸酯所致急性肝损伤具有降酶保肝作用,毒性较小,较为安全。

茜草制诃子多糖的提取工艺研究

【目的】优化茜草制诃子多糖的提取工艺,为茜草制诃子多糖的研发提供理论依据。【方法】以茜草制诃子为研究对象、茜草制诃子多糖提取率为指标,通过单因素试验和正交试验考察料液比、提取温度、提取时间和提取次数对茜草制诃子多糖提取率的影响,筛选茜草制诃子水提醇沉法的最佳工艺。【结果】茜草制诃子水提醇沉法提取多糖的最佳提取工艺为:料液比1∶20,提取温度90℃,提取时间3 h,提取次数3次。在该条件下茜草制诃子多糖的最大提取率为3.55%。【结论】获得茜草制诃子多糖提取的最佳工艺条件,水提醇沉法可较好地应用于茜草制诃子多糖的提取,优化的工艺稳定可行、提取率高。

诃子超微粉的工艺优化及其对黄嘌呤氧化酶活性的影响

目的 优化诃子超微粉的制备工艺,探究其对黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活性的影响。方法 以XOD抑制率为评价指标,在单因素实验考察球料比、冷冻时间、转速、球磨时间的基础上,采用正交实验优化制备工艺,并对制备的超微粉进行粉体学性质检测,并评价其XOD抑制率。建立优化后的诃子超微粉的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)指纹图谱,并与原粉末进行对比,并对粉体学性质进行检测。结果 采用球磨法制备了诃子超微粉,诃子超微粉最优制备条件为:球料比5:1、冷冻时间40 min、转速400 r/min、球磨时间1.0 h,优化后的超微粉粒径为22.42μm,5 mg/mL XOD抑制率为69.10%。优化后的诃子超微粉可显著改善普通粉的粉体学性质,降低药粉粒径;经HPLC分析,两种诃子粉末指纹图谱主要成分基本一致,超微粉碎工艺未破坏诃子成分。结论 优化后的诃子超微粉抗XOD活性更佳,为诃子超微粉在高尿酸血症中的应用提供了基础。

狼毒(月腺大戟)毒性部位诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性研究

为探究狼毒(月腺大戟)诃子汤制前后肠道毒性变化与成分组成变化的相关性,在整体动物模型水平灌胃给药,以小鼠的粪便含水量,肠道不同部位炎症因子及病理损伤情况为指标,比较月腺大戟生品二氯甲烷提取部位(二氯部位)、诃子汤制品二氯部位与模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位的肠道毒性作用差异,考察诃子汤制对月腺大戟肠道毒性的影响。同时构建月腺大戟和诃子成分结构数据库,采用HPLC-TOF-MS分析这3个提取部位的二萜类成分与鞣质酚酸类成分组成变化。采用HPLC测定炮制前后月腺大戟饮片和炮制后锅壁残留物中的4种主要二萜类成分ent-11α-hydroxyabicta-8(14)、13(15)-dien-16,12-olide(HAO)、jolkinolide B(JNB)、fischeria A(FA)、jolkinolide E(JNE)的含量,考察诃子汤炮制是否对二萜类成分的含量与结构产生影响。结果表明,月腺大戟生品二氯部位组可显著增加小鼠的粪便含水量和各肠段炎症因子TNF-α和IL-1β释放水平,且发现肠道组织受损并伴随明显炎症细胞浸润,而与生品二氯部位组比较,模拟诃子汤制月腺大戟二氯部位组肠道组织损伤减轻,炎症细胞浸润减少,肠道毒性显著下降。质谱分析结果显示月腺大戟二氯部位模拟诃子汤制后二萜类成分含量无明显差异,但新增了大量来源于诃子的鞣质酚酸类等成分。HPLC结果显示,月腺大戟诃子汤炮制后4种萜类成分含量有不同程度下降,下降幅度在-0.35%~-19.74%,下降部分主要残留于锅壁,表明诃子汤制并未改变月腺大戟中毒性二萜类成分的结构。诃子汤中鞣质酚酸类成分拮抗作用是月腺大戟诃子汤炮制后肠道毒性下降的主要原因,民族药诃子汤炮制狼毒具有科学性。

诃子制铁屑炮制原理的初步研究

目的通过比较炮制前后铁屑中Fe^(2+)及辅料诃子中有机酸量的变化,对诃子制铁屑的炮制原理进行初步研究。方法采用诃子汤煮法与诃子浸泡法制备2种不同的铁屑炮制品,分别采用紫外分光光度(UV)法和HPLC法测定炮制前后铁屑中Fe^(2+)及诃子中5种有机酸量的变化。结果铁屑生品含Fe^(2+)0.000 3%,诃子汤煮制铁屑和诃子浸泡制铁屑中Fe^(2+)分别升高到3.07%和1.02%;诃子生品含没食子酸1.67%、柯里拉京2.23%、诃黎勒酸9.33%、鞣花酸1.18%、诃子酸24.70%,炮制后有机酸量明显降低,诃子汤煮制铁屑和诃子浸泡制铁屑中没食子酸量分别为1.24%、1.51%,其余4种有机酸量均降为0%。结论采用诃子炮制铁屑,能够使铁屑生品中的Fe^(3+)转化为人体易于吸收的Fe^(2+),铁屑炮制品中剩余的有机酸能够起到抗氧化剂的作用,防止Fe^(2+)被氧化为Fe^(3+),延长铁屑炮制品的保存期。

正交试验结合响应面法优化诃子多糖提取工艺

采用正交试验结合响应面法优化诃子多糖的提取工艺,以诃子多糖的提取率为指标,以固液比、提取温度、提取时间和提取次数为因素,正交试验初步筛选工艺参数,响应面法做进一步优化.结果表明,多糖提取的最佳工艺条件为固液比1∶28,提取温度69℃,提取时间1h,提取次数3次,各项指标相对误差均小于2%,应用响应面法可减少诃子多糖提取时间.

蒙古族药塔日努及其不同炮制品HPLC指纹图谱研究

目的:建立蒙古族药材塔日努及其牛奶制、酒制及诃子汤制品指纹图谱,为塔日努不同炮制品质量控制及炮制原理研究提供依据。方法:采用HPLC,Hypersil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长254 nm,对塔日努及其3种炮制品进行指纹图谱研究,采用指纹图谱相似度软件进行分析。结果:建立了塔日努及其3种炮制品指纹图谱,塔日努经炮制后,其成分发生了变化,塔日努生品及牛奶、诃子汤制品的指纹图谱有明显区别,而生品塔日努及酒制塔日努指纹图谱较为相似。奶制品中5号锋消失,诃子汤制品中新增7号和8号锋、新增的7号峰峰面积较大。结论:该法精密度、重复性、稳定性良好,符合指纹图谱技术要求,可作为塔日努及其炮制品的质量控制方法。

铁屑X射线衍射Fourier指纹图谱研究

目的建立铁屑生品的X射线衍射(XRD)Fourier指纹图谱分析方法,探讨不同炮制方法对铁屑药材品质的影响。方法采用粉末XRD技术对矿物药铁屑生品进行分析,测定其XRD Fourier指纹图谱,并对6种炮制品的XRD Fourier图谱叠加进行比较,运用K值法测定了不同炮制品中Fe_3O_4质量分数。结果初步建立了11批铁屑生品的XRD Fourier指纹图谱共有模式,确立了10个共有峰,其中3号峰和6号峰分别为Fe_3O_4和FeO的特征峰;生品和6种炮制品在共有峰的数目和强度上存在一定差异,与Fe_3O_4质量分数变化规律一致。结论 XRD Fourier指纹图谱分析法可用于铁屑药材的鉴定与分析,为铁屑生品的质量评价及炮制方法的筛选提供依据。