诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

目的研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、CIA组、TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组,每组15只。除对照组外,其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型,TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)]TCWE处理,MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后,通过HE染色检查软骨形态,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率,反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、PD-1和PD-L1的mRNA表达,免疫组织化学染色检测RORγt、FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与CIA组相比,TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻,脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加,Treg/Th17细胞比率上调,RORγt的表达降低,FOXP3、PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低,血清TGF-β水平升高。结论TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫,减轻软骨损伤。

宫颈宁栓组分药材提取工艺的研究

目的:选择宫颈宁处方中君药诃子、乌梅,研究其最佳提取方法。方法:采用正交试验法,以水提取物得率、没食子酸含量为指标,考察加水量、浸泡时间、煎煮时间和煎煮次数对水提取效果的影响。结果:诃子、乌梅的最佳提取工艺为加水10倍量、浸泡1 h、煎煮2次、煎煮时间每次2 h。结论:该工艺科学合理,可有效保证产品质量。

诃子水提物对胶原诱导性关节炎模型大鼠肠道免疫机制研究

目的建立诃子水提物中诃子酸、没食子酸含量测定方法;研究诃子水提物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠肠道免疫调节的影响,发现药物作用的新靶点。方法HPLC法检测诃子酸、没食子酸含量;采用牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂诱导建立CIA大鼠模型,并设正常对照组,模型组,雷公藤组(9.45 mg·kg^-1),诃子高、中、低剂量组(4、2、1 mg·kg^-1),连续给药4周。HE观察肠道的组织病理学形态;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清CD4与CD25的含量;PCR法扩增细菌V3-V4区16SrDNA,分析肠道细菌丰富度、Shannon、Chao指数及主要菌群分布。结果诃子水提物中诃子酸、没食子酸各占3.07%,2.30%,模型对照组血清CD4及CD25的含量显著高于正常组(P<0.05);各用药组阳性表达较模型对照组均有不同程度的降低(P<0.05),诃子提取物高剂量组与雷公藤组相比差异无统计学意义(P>0.05)。肠道菌群分析结果:各组大鼠其肠道菌群物种丰富度和多样性均较正常组下降。诃子高组、雷公藤组与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论诃子水提物能明显缓解CIA模型大鼠关节炎表现,有效降低CIA大鼠血清CD4、CD25的表达,调节肠道菌群失衡,可能是诃子在临床上能够有效治疗类风湿关节炎的有效机制之一,诃子质量标准研究为该药合理开发利用奠定了基础。