TetR家族转录调控子基因敲除对鲍曼不动杆菌生物被膜生成能力的影响

目的:研究TetR家族转录调控子(TFR)基因敲除对鲍曼不动杆菌生物被膜(BF)生成能力的影响。方法:通过构建自杀质粒的方法敲除鲍曼不动杆菌SZ042株TFR基因,并设计内部引物和外部引物的方法进行敲除株的验证,采用结晶紫染色法对比观察和定量分析基因敲除前后BF生成的情况。结果:成功敲除鲍曼不动杆菌中TFR基因,获得TFR基因敲除株SZ042/ΔtetRt株;与野生株相比,敲除株菌膜形成量明显下降,培养4、8、12、16、24 h BF的生成量差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:TFR基因对鲍曼不动杆菌被膜生成和形态维持有促进作用,可以作为开发针对鲍曼不动杆菌BF生成机制的新型抗菌药物的潜在靶点。

流产布鲁菌LysR家族转录调控子LTTR8缺失株的构建及其生物学特性分析

布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab_RS24670缺失株ΔlttR8,基于广宿主质粒pBBR1MCS构建成互补株ΔlttR8-Com。免疫印迹试验表明:ΔlttR8为光滑型菌株;体外培养分析发现lttR8缺失不影响布鲁菌的生长;细胞感染试验发现lttR8缺失不影响布鲁菌黏附、入侵细胞和胞内存活的能力。耐受性试验分析发现:lttR8缺失不影响布鲁菌对过氧化氢(H2O2)和多粘菌素B(polymyxin B)的敏感性。小鼠感染试验分析发现lttR8缺失显著减弱流产布鲁菌的毒力。综上所述,本研究发现一个新的与流产布鲁菌致病性相关的转录调控子,为布鲁菌致病机制研究提供参考。

TetR家族转录调控基因tfpA对链霉菌合成A21978C的影响

目的研究A21978C产生菌中一个Tet R家族转录调控基因tfp A对A21978C产量的影响。方法利用同源重组方法敲除该tfp A基因,HPLC检测突变株A21978C产量的变化,通过过表达与回补实验验证其调控特性。结果敲除tfp A基因的突变株A21978C产量与亲株相比增加了50%;基因回补后A21978C产量恢复到亲株的水平。过表达突变株则几乎不产A21978C。结论Tet R家族转录调控基因tfp A对A21978C的合成至关重要,是一个负调控基因。

嗜水气单胞菌AraC家族转录调控因子AetY的功能

为研究嗜水气单胞菌中国流行菌株NJ-35的AraC家族转录调控因子AetY(U876_01475)的功能,本实验采用同源重组技术构建了该基因的缺失株ΔaetY及互补株CΔaetY,并对野生株、缺失株及互补株生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的耐药性和对斑马鱼的致病力进行检测。结果显示,与野生株相比,ΔaetY生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的最小抑菌浓度(MIC)均显著降低,对斑马鱼致病力明显降低,半数致死量(LD_(50))增加400余倍。CΔaetY各项指标均恢复至野生株水平。本研究首次针对嗜水气单胞菌AraC家族成员进行了基因功能分析,为进一步探究该菌的致病机理提供参考。

Sox基因家族对成年神经发生的转录调控作用

成年神经发生是脑内一个复杂而高度调控的重要生物学过程,维持了脑内可塑性和相关功能。近年来,成年神经发生受内在因素和外在因素的影响。其中,内在因素中的转录因子参与基因转录,协调成年神经发生过程中遗传程序的表达。Sox基因家族编码的Sox蛋白作为重要的转录调控因子对成年神经发生起着重要的转录调控作用。因此,本文就Sox基因家族中参与成年神经发生的关键因子展开综述,为人们理解成年脑内神经发生的分子调控机制提供新的见解。

胚胎发育合子型基因激活(ZGA)的调控机制

新受精卵超越早期分裂阶段正常的发育需要胚胎基因转录的重新起动与续后调控 .ZGA(合子型基因激活 )是胚胎发育过程中母型调控向合子型调控过渡中的关键事件 .卵为新形成合子发育程序的起动提供了特殊的环境条件 ,并对其调节控制起了必要的作用 .各类动物早期卵裂过程的胚胎基因转录起动精确时间是可变的 ,涉及染色质结构成分、调控元件 (顺 反式 )、RNA降解、DNA复制、修饰 加工作用、卵子发生因子、合子钟及天然信号等多种因素的调节控制 .本文综述了当前胚胎发育合子基因表达的时间及相关调控机制的研究进展 .

胚胎发育合子型基因激活(ZGA)的调控机制

新受精卵超越早期分裂阶段必需胚胎基因转录 ( ZGA)的重新起动与续后调控 ,在各类动物早期卵裂过程的胚胎基因转录起动精确时间是可变的 ,涉及染色质结构成分、调控元件 (顺 /反式 )、RNA降解、DNA复制、修饰或加工作用、卵子发生因子、合子钟及天然信号等多种因素 。

Runx转录因子家族在T细胞发育过程中的作用

Runx基因家族包含3个成员即Runx1,Runx2和Runx3。虽然三者作为转录因子在发育过程的调控中具有各自独特的功能,如Runx1在后阶段造血(definitivehematopoiesis)、Runx2在骨骼系统发育、Runx3在神经发生等过程中发挥关键性作用,但是它们都在T细胞发育过程中扮演重要角色。本文对Runx基因家族在T细胞发育过程中的作用进行简要介绍。

HIF-1α调控p53RFP基因的转录调控元件鉴定

目的分析具有血管生长调节重要功能的转录因子HIF-1α是否通过调控P53RFP的启动子区域而发挥调节作用,并对其元件进行鉴定。方法 HIF-1α和Lac Z相比,应用荧光定量PCR检测HIF-1α、P53RFP、P53 mRNA水平表达的变化。PCR扩增不同长度(1780 bp,1200 bp,780 bp)P53RFP基因启动子片段,引入KpnⅠ和HindⅢ双酶切位点,克隆入萤光素酶报告载体PGL3-basic中。HEK393A细胞共转染萤光素酶报告载体,PcDNA 3.1(+)-HIF-1α以及海肾萤光素酶载体PRL-SV40,以PGL3-control做阳性对照。48小时后检测双萤光素酶活性。结果与LacZ相比,HIF-1α组HIF-1α,P53RFP mRNA表达升高,而P53表达无变化。成功构建P53RFP不同长度片段的启动子萤光素酶报告载体;各组相对萤光素活性分别为:control组0.0483±0.0035;PGL3-1780bp组0.4990±0.1441;PGL3-1200 bp组0.4460±0.071 1:PGL3-780 bp组0.5223±0.0659。各实验组萤光素酶活性均高于control组(P<0.05);各实验组间无显著性差异(P>0.05),表明HIF-1α基因对三个不同长度片段的启动子活性的影响无显著差异。结论 HIF-1α可以促进P53RFP表达增高,而P53RFP基因的转录调控因子P53表达无变化;HIF-1α对P53RFP的调控可能通过其启动子区域的核心元件发挥作用。

调节因子X蛋白家族的结构与功能

调节因子X(Regulatory Factor X,RFX)蛋白家族是一类包含高度保守的有翼螺旋型DNA结合域的转录因子,因特异性结合基因启动子区的X盒而得名。该蛋白家族广泛分布于动物和真菌中,参与纤毛和精子发生、免疫反应以及细胞周期调控等多种生物过程。RFX家族的一些成员还对肿瘤细胞的存活及增殖起到促进或抑制作用,有望成为治疗肿瘤的新靶点。本文将对RFX蛋白家族的发现、各成员的结构特征、表达模式和生物学功能等进行综述,以期待为后续研究提供参考。

流产布鲁菌转录调控子ArsR6缺失株的构建及其生物学特性分析

布鲁菌病是一种由布鲁菌感染引起的人畜共患传染病。布鲁菌是兼性胞内寄生的革兰氏阴性菌,其适应宿主环境、在胞内存活并建立慢性感染依赖于多种基因的表达和调控。前期研究利用转座子随机突变技术发现了转录调控子ArsR6与流产布鲁菌毒力相关,本研究通过基因定向缺失方法构建了流产布鲁菌arsR6基因卡那霉素抗性标记缺失株,并通过耐受性试验、免疫印迹试验、胞内存活试验、小鼠致病性试验等对arsR6缺失株的基本生物学特性进行了评估。结果显示,arsR6缺失显著减弱了布鲁菌抵抗阳性杀菌肽的能力,此外,arsR6缺失株的T4SS表达量增加,胞内存活能力增强,感染小鼠早期脾脏载菌量增加,慢性感染阶段导致小鼠脾脏显著肿胀,以上结果表明,ArsR6是布鲁菌毒力相关的重要转录调控子,本研究为布鲁菌致病机制研究提供参考。

基于不同生长时期香港牡蛎转录组数据分析BMP蛋白家族的表达变化

为探究香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)生长调控关键基因的作用机理,本研究利用转录组高通量测序技术分析骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMPs)家族中的关键差异表达基因在香港牡蛎不同生长时期的表达变化。本研究检测到了5个BMP蛋白家族的基因,并发现BMP1、BMP2、BMP3和BMP7在12M时的表达量低于4M时的表达量,基因时空表达呈下降趋势;而BMP10基因在12M时的表达量高于4M时的表达量,基因时空表达呈上升趋势。研究表明,BMP蛋白家族中的BMP1、BMP2、BMP3、BMP7和BMP10等基因可能参与了香港牡蛎的生长调控过程。

变形链球菌bgl调控子的转录调节

变形链球菌(streptococcus mutans,S.mutans)通过磷酸转移酶系统(FTS)摄取糖类物质,编码利用β-葡萄糖苷的基因常被葡萄糖的分解代谢产物所抑制。S.mutans中新分离出一个与β-葡萄糖苷水解作用有关的调控子 bgl,其中 bglP编码 PTS中的β-葡萄糖苷特异性酶Ⅱ(EⅡ),bglC和 bglA可能分别编码 Arac/XylS家族的转录调控区和磷酸化β-葡萄糖苷酶,而bglB和orf4的功能仍不清楚。本文即对此几个结构基因的转录调控作一研究。

高迁移率族蛋白与真核基因表达调控

高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)是一系列的染色质相关蛋白,广泛存在于真核生物细胞中,含量丰富,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的高迁移率而得名.HMG蛋白家族可分为HMGB、HMGA和HMGN三类亚家族,各亚家族有其特征的结构域,这些结构域介导了HMG和DNA或染色质相关区域的相互作用.现已发现这些蛋白质具有多种重要生物学功能,其中几乎所有HMG都可以通过修饰、弯曲或改变染色质/DNA的结构,促进各种蛋白质因子形成大分子复合物来调节基因转录.

大肠癌组织中STAT3及其相关生长调控基因的检测与分析

目的探讨转录信号传导子与激活子3(STAT3)及其相关生长调控基因在大肠癌发生发展过程中的作用。方法采用RT-PCR方法检测42例大肠癌患者STAT3及其相关生长调控基因c-myc、p53、生存素(survivin)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平,并比较它们在大肠癌组织、癌旁组织及正常组织中的差异性;采用Western印迹法及免疫组化方法检测STAT3蛋白的表达水平,并分析STAT3蛋白的表达情况与临床病理的关系。结果STAT3、c-myc、survivin、VEGF mRNA在大肠癌及癌旁组织中的表达较正常组织中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);而p53mRNA在大肠癌及癌旁组织中的表达较正常组织中的表达减弱,差异亦有统计学意义(P<0.01);大肠癌组织及癌旁组织中STAT3蛋白水平的表达均高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.01),且癌组织中STAT3蛋白表达与临床分期及淋巴结转移有关。结论STAT3基因的异常表达与大肠癌的发生发展密切相关,可能通过调节其靶基因的表达而发挥致癌作用。

参与发育的基因家族

本文简述了同源框基因 (HOX)和SOX基因两大家族的特征及其在发育过程中的作用。个体发育从受精卵开始就受发育调控串基因的有序启动与关闭的控制。基因表达的调节主要在转录水平上进行 ,并且转录调控子多是一类DNA结合蛋白 ,通过其与受控基因启动子或其他调控元件的结合来调节目标基因的表达。HOX、SOX和DMRT基因三大家族正是通过上述机制参与广泛的发育调控过程。

猪全基因组范围ETS基因家族成员的鉴定、进化与表达分析

ETS转录因子家族在动物中广泛存在,参与细胞分化调控、细胞周期控制、细胞凋亡等多个生物学过程。文章采用生物信息学方法系统分析猪ETS家族成员进化关系和调控图谱,结合RNA-Seq数据分析其组织表达规律。研究利用Pfam鉴定ETS保守结构域序列检索猪(Sus scrofa)蛋白序列,最终在猪基因组上鉴定得到23个ETS家族基因。分析ETS家族基因、蛋白一级结构和高级结构及亚细胞定位预测。基于最大似然法,构建ETS家族系统发育树发现,可分为11个子家族,子家族成员保守结构域、基因结构、理化性质相似。通过生信分析构建由ETS家族、靶基因和miRNA构成的基因调控网络,筛选出40个"ETS家族基因-miRNA-靶基因"前馈回路。转录表达谱提示ETS家族基因在成年公猪和母猪28种不同类型组织中均有表达,且ETS1基因在免疫组织(淋巴、脾脏)和外周血单核细胞中高表达,SPIC基因在免疫组织(淋巴、脾脏)高表达。研究结果为揭示ETS家族成员生物学功能奠定基础。

Fox基因家族与卵巢疾病的研究进展

Forkhead Box（Fox）转录因子家族在胚胎发育过程中起着关键性的调控作用，这些基因表达的改变与动物的生长发育、免疫调控以及肿瘤的发生密切相关，它的突变也可引起卵巢生理功能的改变、卵巢早衰和卵巢肿瘤的发生。本文将对Forkhead Box（Fox）基因家族与卵巢疾病的关系综述如下。