川芎嗪对肿瘤坏死因子致血管内皮细胞组织因子表达的影响

目的观察肿瘤坏死因子(TNFα)对人脐静脉血管内皮细胞株ECV304组织因子(TF)表达的影响及植物来源单体化合物川芎嗪的干预作用。方法内皮细胞培养采用RPMI-1640完全培养基;采用一期凝固法测总的细胞促凝活性(PCA);细胞TF抗原测定采用ELISA法;TFmRNA采用RT-PCR的方法检测。结果川芎嗪预处理后,可明显抑制TNFα(1000u/mL)作用不同时间以及不同浓度的TNFα(0～2000u/mL)作用6h后ECV304细胞TF活性的表达;川芎嗪在1～1000μg/mL范围内以剂量依赖方式抑制TN-Fα(1000u/mL)的刺激作用(P<0.01),在1000μg/mL时,川芎嗪的抑制作用最强;以其预处理ECV304,可使TNFα刺激TF的活性下降70%;川芎嗪也可显著降低受刺激的ECV304TF抗原及TFmRNA表达。结论TNFα可诱导血管内皮细胞TF的表达,川芎嗪具有在mRNA水平抑制TNFα刺激血管内皮细胞TF表达的作用。

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子(TF)表达的胞内信号转导机制。方法胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和mRNA;放射免疫法测PKC(蛋白激酶C)活性;免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果TMP和Staurosporine(Sta)可显著减少PMA与TNFα刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达(P<0.01);PMA、TNFα使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNFα引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)均可抑制NF-κB的活化。结论TNFα诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNFα诱导TF的表达。

肿瘤坏死因子-α激活人肺微血管内皮细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路

目的 建立体外人肺微血管内皮细胞 (HPMEC)培养技术 ,观察肿瘤坏死因子 α(TNF α)对HPMECp38丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)活性的影响。方法 ( 1)建立体外人肺微血管内皮细胞培养模型 ;( 2 )采用Westernblot和免疫复合物激酶技术检测TNF α对HPMECp38MAPK的活化作用。结果 ( 1)TNF α可迅速诱导HPMECp38MAPK的磷酸化和活化 ,在一定程度上呈时间、剂量依赖关系 ;( 2 )p38MAPK特异性阻断剂———SB2 0 35 80可显著抑制由TNF α诱导的p38MAPK活化。结论 TNF α激活p38MAPK信号通路 。