Tetramycin抗性基因克隆及生物活性的测定

为研究Tetramycin生物合成基因簇,提高产量,根据已知链霉菌抗性基因的保守核苷酸序列设计简并引物,以链霉菌11371基因组DNA为模板进行克隆Tetramycin抗性基因,并将其转化GS115中表达,以阳性克隆为指示菌,测定Tetramycin抗性基因生物活性。结果显示克隆的Tetramycin抗性基因1-2-1和2-1-1测定生物活性时并没有表现出对Tetramycin拮抗作用的提高,但为进一步研究Tetramycin生物合成基因簇、提高Tetramycin产量提供理论数据。

Rice Resistance against Blast Induced by Tetramycin

[ Objective] The research aimed to discuss the tetramycin-inducad resistance and its mechanism in order to provide basis for better application in the production. [ Methedl Taking rice blast as the control object, the impacts of tetramycin on the activity of PAL, POD, PPO and SOD in rice leaves were studied. [Result] The activity of PAL, POD and PPO in rice leaves were significantly increased after spraying tetramycin. The activity of enzyme in the treatment of inoculation after spraying terramycin for 24 h increased most obviously. The activity of SOD had no significant difference among different treatments. [ Condesion] Terramycin not only has strong antimicrobial effect, but also might enhance disease resistance in order to prevent pathogen infection through inducing the activity of rice defense enzyme.

梨火疫病菌对四霉素敏感基线的建立及抗药性评价

【目的】建立新疆库尔勒地区和阿克苏地区梨火疫病菌(Erwinia amylovora)对四霉素的敏感基线,监测梨火疫病菌对四霉素的抗药性水平,为四霉素防治梨火疫病田间用药、抗药性监测与抗药性治理提供理论依据。【方法】采用抑菌圈法测定100株梨火疫病菌株对四霉素的敏感性;采用平板划线法和含药培养基法药剂驯化抗药突变体,进行抗药性评价。【结果】共监测到敏感菌株74个,低抗菌株26个。100株菌株对四霉素的敏感性频率接近正态分布,因此可将该曲线(平均EC50=1.59±1.029μg·mL^(-1))作为新疆库尔勒地区和阿克苏地区梨火疫病菌对四霉素的敏感基线;共获得4株抗药突变体,均不具有稳定遗传性;四霉素与84%噻霉酮、中生菌素均会产生交互抗药性。【结论】建立了新疆梨火疫病菌分离菌株对四霉素药剂的敏感基线,仅监测到少数低抗菌株,梨火疫病菌对四霉素的抗性风险低。

超高效液相色谱-串联质谱法测定植物源食品中多抗霉素B、四霉素A和申嗪霉素残留量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定植物源性食品中的多抗霉素B、四霉素A和申嗪霉素残留量的分析方法。方法样品采用乙腈提取,经HLB固相萃取柱净化,Waters BEH HILIC色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱仪检测,基质匹配标准曲线外标法定量。结果多抗霉素B、四霉素A和申嗪霉素在5.0~200.0μg/L质量浓度范围内线性关系良好(r^(2)>0.995)。蔬菜、水果中多抗霉素B、四霉素A的定量限均为0.050 mg/kg,申嗪霉素的定量限为0.010 mg/kg。谷物中多抗霉素B、四霉素A的定量限为0.100 mg/kg,申嗪霉素的定量限为0.025 mg/kg。多抗霉素B在0.050~10.000 mg/kg添加水平回收率为80.5%~101.3%,相对标准偏差为0.72%~9.22%,申嗪霉素在0.010~10.000 mg/kg添加水平回收率为70.3%~108.2%,相对标准偏差为1.52%~9.80%,四霉素A在0.050~1.000 mg/kg添加水平回收率为80.4%~107.1%,相对标准偏差为1.45%~9.29%。结论本方法操作简单,准确性好,灵敏度高,可用于植物源性食品中多抗霉素B、四霉素A和申嗪霉素残留量的测定。

宁夏地区欧李根癌病病原菌鉴定及防治药剂筛选

对宁夏地区欧李(Cerasus humilis(Bge.) Sok.)根癌病病原菌开展鉴定并筛选防治药剂。采用组织分离法进行病原菌的分离,以胡萝卜和向日葵为指示植物按柯赫氏法则确定其致病性,经形态学、生理生化性质和16S rDNA序列分析进行分类鉴定。采用滤纸片抑菌圈法对8种低毒杀菌剂开展毒力测定,筛选出对病原菌有较强抑菌效果的药剂,以向日葵为指示植物进行防治效果验证。结果表明:从欧李根癌组织中分离获得的ATJ1菌株,可以使胡萝卜盘和向日葵接种部位出现明显的增生,具有致病性。ATJ1菌株分类鉴定为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)生物I型。在室内药剂筛选中,四霉素和乙蒜素的防治效果最好,400倍稀释液的抑菌率分别为83.80%和72.55%,ρ(EC_(50))分别为5.13和985.75 mg/L。在盆栽试验中,四霉素和乙蒜素对病原菌ATJ1均具有较强的抑菌效果,向日葵接种部位未发病,但是高质量浓度药剂会导致药害。因此,低质量浓度(稀释倍数≥1 200倍)的四霉素或乙蒜素适用于欧李根癌土壤杆菌的防治。

1.5%生物农药四霉素水分散粒剂的研究

对1.5%四霉素水分散粒剂进行配方筛选和工艺优化。通过检测水分散粒剂的技术指标,筛选了载体、润湿分散剂和崩解剂的种类及其用量,并对工艺条件如加水量、干燥时间和干燥温度等进行优化。四霉素水分散粒剂优化配方:四霉素母粉15%(质量分数,以下同),gerogonT/366%、gerogonL-WET/P10%、硫酸铵6%、硅藻土补至100%。最佳工艺条件:加水量27%、干燥时间1h,干燥温度50℃。所得四霉素水分散粒剂制剂性能稳定、绿色环保,经过冷热储稳定性测定,各项指标均符合水分散粒剂的质量技术标准。

四霉素对番茄叶霉病菌的毒力效应及田间防治效果

为评价四霉素对番茄叶霉病的防治效果,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定了四霉素对9株不同地区来源的叶霉病菌(Passalora fulva)菌丝生长、孢子萌发以及芽管伸长的毒力,并进行了田间药效试验。结果表明:四霉素对番茄叶霉病菌具有较高的抑制活性,其中抑制孢子萌发、芽管伸长的活性较高,其EC_50值分别为0.002 30~0.012 7μg/mL、0.00050~0.013μg/mL;对菌丝生长抑制活性略低,其EC_50值为0.601 6~1.394μg/mL。显微观察发现:经四霉素处理后,番茄叶霉病菌新生菌丝生长受阻、部分菌丝末端分支增多、变粗;分生孢子萌发受抑制,芽管膨大变粗、生长受阻。田间试验结果表明:经四霉素有效成分6.75和20.25 g/hm^2处理后,对番茄叶霉病的保护防效分别为74.40%和83.09%,治疗防效分别为67.92%和76.68%,均显著高于对照药剂甲基硫菌灵(有效成分540 g/hm^2)的处理防效。

农用抗生素11371各组份的分离纯化和鉴别

从一株链霉菌11371的发酵液中,提取到四种抗生素,经分离得到主要成份为11371A_1和A_2,次要成份为11371B和C。 本文对11371A_1、A_2、B及C组份,进行了分离及理化性质的研究。根据所测定的紫外、红外吸收光谱,~1H和^(13)C核磁共振谱以及质谱数据,确认11371A_1为四霉素A, 11371A_2为四霉素B,11371B为白诺氏菌素,11371C为茴香霉素。

四霉素对稻瘟病菌丝和孢子生长的影响

进行了四霉素对稻瘟病菌作用机理的研究,结果表明,四霉素对稻瘟病菌菌丝生长及孢子萌发具有较强的抑制作用。四霉素处理后菌丝发生扭曲变形,粗细不一,部分菌丝内含物流出,出现空管,而正常菌丝粗细较均匀一致,原生质和核等内含物分布均匀;正常的稻瘟病菌分生孢子有明显的隔膜,产孢量较大,而四霉素处理后分生孢子隔膜模糊不清,且在边缘出现泡状突起,产孢较少。通过遗传稳定性初步试验,明确了四霉素对稻瘟病菌具有抑制作用而无杀死作用。

气浮法预处理土霉素废水的试验研究

为了降低土霉素废水生化处理难度,土霉素废水进行资源化利用,对土霉素废水进行化学气浮预处理试验。采用0.02g/L喹啉和0.001g/L磷酸三丁酯(TBP)复合药剂、充气量0.3m3/h、pH6～9、充气孔径10mm-3、气浮时间10min,土霉素去除率达到96％,水收率达到95％以上。结论表明,化学气浮法可有效去除废水中的土霉素,使处理后废水易于生化达标排放,并可回用药剂。处理过程中产生的泡沫产品含有高浓度的土霉素,可作为一般生化出水的抑菌剂。

多烯大环类抗生素合成酶结构域的差异进化分析及应用于一株产四霉素链霉菌菌株的筛选(英文)

多烯大环类抗生素的生物合成酶属于典型的I类聚酮合酶(PKS),这些生物大分子有着非常相似的化学结构和模块合成的形式。在本研究中,每个多烯聚酮合酶的单一结构域被作为系统进化分析的对象。我们发现,各类结构域在进化上出现了不同方向的倾向,其中,KS域在进化树中归成三大类,分别对应多烯结构的三大块区域;相对于KS域和ACP域表现出基因水平转移的倾向而言,AT和KR域则大部分都在单一的基因簇内部发生复制或者重组;而七烯类的FR-008和四烯类的匹马菌素的合成基因簇则极可能源自同一祖先,由此也佐证了多烯抗生素的共轭双键数目是由结构域的组织分布决定的。这些结果都为多烯大环组合生物工程提供了重要的启示。同时利用FR-008和匹马菌素的高度同源性,基于基因筛选的手段,我们分离到了一株新的产四烯大环类抗生素四霉素的链霉菌。

两种生物药剂对苹果病害的室内活性评价

为评价2种生物杀菌剂对苹果病害防控的广谱性,本研究采用菌丝生长速率法测定了药剂对苹果轮纹病、炭疽病、干腐病和腐烂病的抑制效果。结果表明:3%中生菌素可湿性粉剂和0.3%四霉素水剂对4种苹果病害均具有防治效果,其中3%中生菌素可湿性粉剂对干腐病菌和腐烂病菌有较强的抑菌活性,其EC50值分别为4.92和7.33μg·mL-1;0.3%四霉素水剂对轮纹病菌、腐烂病菌和干腐病菌的EC50值分别为4.52,6.44和7.04μg·mL-1。因此,3%中生菌素可湿性粉剂和0.3%四霉素水剂可作为苹果园广谱性生物源杀菌剂,可交替使用减少抗药性。

药肥一体化对烟草青枯病防治效果评价

为了筛选防治青枯病的药肥一体化制剂,以优美利和四霉素为供试药剂,研究了不同水平的水肥一体化组合对烟草青枯病防效及经济性状的影响。结果表明:各处理的青枯病发病率在7月10日后均快速上升,与大田生产发病趋势较为一致,CK处理7月25日病株率最高,达78.30%;"优美利3 g+四霉素200倍液"的组合防治效果达69.47%,极显著高于其余处理;同时,该处理的经济性状也表现最优,产值达1 635.66元/667m^2,极显著高于其余处理。这表明施用高水平的优美利和四霉素组合来防治烟草青枯病是切实可行的。

我国葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性测定

灰霉病是葡萄生产上的重要病害之一,严重影响葡萄果实的品质和产量。为明确葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性,本研究分别采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了四霉素和啶酰菌胺对采自云南省宾川县、湖北省武汉市和辽宁省北镇市60株葡萄灰霉病菌的有效抑制中浓度EC,建立了敏感性基线,并分析了二者之间的交互抗性。结果显示,葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感基线分别为0.245和1.115μg/mL;上述葡萄灰霉病菌均对四霉素敏感,而11.7%的菌株表现为啶酰菌胺抗性。并且四霉素与啶酰菌胺之间不存在交互抗性(r=-0.040,P>0.05)。因此,四霉素可作为防治葡萄灰霉病的候选药剂,研究结果对两种杀菌剂的科学使用以及葡萄灰霉病的可持续防控具有重要的理论和实践意义。

Effects of Integrated Technology of Medicine and Fertilizer on Bacterial Wilt of Tobacco

In order to validate the control effects of integrated technology of medicine and fertilizer on tobacco bacterial wilt,field experiments were conducted by using youmeili and tetracycline as the test agents.The results obtained were listed as follows:(1)The incidence rate of bacterial wilt ascended more quickly after July 10 th,the incidence of CK reached 78.30%on July 25 th.(2)The control effect of“youmeili 3 g+tetramycin 200 times liquid”reached 69.47%,significantly higher than other treatments.(3)The output value of“Youmeil 3 g+tetramycin 200 times liquid”served as 1635.66 yuan/667m^2,with the highest economic character in all treatments.In a word,integrated technology of medicine and fertilizer was a feasible approach to control tobacco bacterial wilt.

农抗120活性成分四烯化合物的分离与鉴定

从农抗120产生菌刺孢吸水链霉菌北京变种的发酵产物中分离四烯类化合物,通过液相色谱与质谱联用仪测定其相对分子质量,采用核磁共振仪鉴定其结构.结果表明,所分离的四烯类化合物具有四烯大环内酯类抗生素的特征紫外吸收谱,并与四霉素B的结构相同.经体外活性测试结果表明,四烯类化合物对农抗120的活性指示菌清酒酵母具有明显的抑制作用.

山东省不同地区蔬菜菌核病菌对四霉素的敏感性

采用菌丝生长速率法测定了四霉素对采自山东省不同地区不同蔬菜作物的151株菌核病菌的毒力作用,同时比较了其对蔬菜菌核病菌不同生育阶段的抑制活性,并通过离体叶片法评价了四霉素对蔬菜菌核病的防治效果。结果表明：菌核病菌对四霉素比较敏感,敏感性频率呈单峰正态分布,151株病菌菌丝生长的平均EC50值为（0.29±0.01）μg/mL,该值可作为蔬菜菌核病菌对四霉素的敏感基线。此外,经四霉素处理后,该病菌的菌核数量以及干重明显降低,菌核明显变小;2μg/mL的处理对菌核萌发的抑制率达到100.00%。离体黄瓜叶片接种试验表明,四霉素对菌核病具有较好的保护和治疗效果,且保护作用较为显著。在质量浓度为20μg/mL时,四霉素对该病的防效显著高于对照药剂多菌灵和异菌脲。因此,四霉素具有防治蔬菜菌核病的潜在价值,可进一步通过田间试验验证其应用效果。

四霉素对茶藨子葡萄座腔菌Botryosphaeria ribis室内毒力测定及其田间防效试验

为确定四霉素对杨树溃疡病的防治效果,采用菌丝生长速率法测定四霉素水剂对茶藨子葡萄座腔菌Botryosphaeria ribis的室内毒力,采用刮治喷涂法对茶藨子葡萄座腔菌引起的杨树溃疡病进行田间应用效果研究。试验结果表明,四霉素对茶藨子葡萄座腔菌的EC50和EC90分别为114.82 a.i.mg/L、389.05 a.i.mg/L,对茶藨子葡萄座腔菌具有较好的抑菌效果,优于对照药剂多抗霉素。田间防效试验结果表明,刮治喷涂0.3%四霉素水剂可以有效防治真菌病原茶藨子葡萄座腔菌导致的杨树溃疡病,其有效成分浓度为60~150 a.i.mg/L时,田间防效达68.25%~82.41%,与室内毒力测定结果相符。

梧宁霉素高产菌株选育的研究

亚硝酸与紫外线复合诱变、紫外线诱变、亚硝酸诱变对菌株WN-4的孢子依次进行处理,采用链霉素抗性突变株筛选和琼脂块筛选法,得到一株梧宁霉素高产菌株W11;其生物效价是出发菌株的1.27倍。

不同杀菌剂对黄瓜靶斑病菌的毒力作用特性比较

为筛选防治黄瓜靶斑病的有效药剂,采用菌丝生长速率法、孢子萌发法和芽管伸长法测定了19种杀菌剂对黄瓜靶斑病菌的毒力,探究了4种毒力较高杀菌剂对病原菌菌丝形态的影响。结果表明：氟啶胺、吡唑萘菌胺、咯菌腈和四霉素对黄瓜靶斑病菌菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长各生长发育阶段均有较强的抑制活性,其中,4种药剂抑制菌丝生长的平均EC_（50）值分别为0.516 3、1.538、1.605和0.648 2 mg/L,抑制孢子萌发的平均EC_（50）值分别为0.164 4、1.359、1.127和0.002 5 mg/L,抑制芽管伸长的平均EC_（50）值分别为0.189 6、0.144 7、0.060 4和0.001 5 mg/L;啶酰菌胺、百菌清和肟菌酯3种不同作用机制杀菌剂对黄瓜靶斑病菌孢子萌发和芽管伸长的抑制活性较强,3种药剂抑制孢子萌发的平均EC_（50）值分别为1.564、0.373 0和0.021 3 mg/L,抑制芽管伸长的平均EC_（50）值分别为0.629 5、0.233 4和0.405 0 mg/L,但对菌丝生长的抑制作用较弱,平均EC_（50）大于16 mg/L;氟啶胺、吡唑萘菌胺、咯菌腈和四霉素可引起黄瓜靶斑病菌菌丝不同程度的异常生长,主要表现为菌丝隔膜间距变小、菌丝节间肿大、主菌丝上二次分枝发生频繁、菌丝变形黏连、菌丝新分枝处生长受抑制或分生孢子生长变形。研究表明,氟啶胺、吡唑萘菌胺、咯菌腈和四霉素对黄瓜靶斑病菌具有较高的毒力,在黄瓜靶斑病的田间防治中具有较好的开发应用潜力。