Tspan29在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7和MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测4次穿膜蛋白29(tetraspanins-29,Tspan29)在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨敲低Tspan29对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(epithelieal-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法:收集2017年6月至2018年2月复旦大学附属肿瘤医院闵行分院手术切除的20例乳腺癌患者的癌组织和相应的癌旁组织标本,以及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231和人乳腺上皮细胞MDA-kb2,用qPCR和Western blotting检测乳腺癌组织和细胞系中Tspan29的表达水平。通过siTspan29对MCF-7、MDA-MB-231细胞中Tspan29进行干扰,用qPCR法检测转染细胞中Tspan29mRNA和蛋白的表达水平,PCR芯片法检测MCF-7细胞中EMT相关基因的表达,用CCK-8法、Transwell实验检测MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果:乳腺癌组织中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著高于癌旁组织(均P<0.01),MCF-7和MDA-MB-231细胞中Tspan29 m RNA和蛋白的表达水平显著高于MDA-kb2细胞(均P<0.01)。siTspan29干扰后,MCF-7细胞中Tspan29 mRNA和蛋白的表达水平显著下降(均P<0.05);MCF-7细胞中EMT相关基因中有2个基因显著上调,有7个基因显著下调;MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(均P<0.05)。结论:Tspan29在乳腺癌组织及细胞系中表达水平显著上调,敲低Tspan29对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有显著的抑制作用。

1型糖尿病四跨膜蛋白7自身抗体检测技术的建立与应用

目的建立四跨膜蛋白7自身抗体(TSPAN7A)的荧光素酶免疫共沉淀检测技术(LIPS),并评估TSPAN7A在中国1型糖尿病(T1D)人群中的应用价值。方法将插入人全长四跨膜蛋白7 cDNA的海肾荧光素酶重组质粒转染293T细胞,获得含四跨膜蛋白7与海肾荧光素酶融合蛋白的细胞裂解液。待测血清与该细胞裂解液孵育过夜后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物,洗涤,加入海肾荧光素酶底物并检测荧光读数,以199名健康对照的第99百分位数作为阳性阈值。采用LIPS法检测2014至2017年中南大学湘雅二医院代谢内分泌科就诊的100例T1D患者[男64例,女36例,年龄(28±16)岁]、119例2型糖尿病(T2D)患者[男78例,女41例,年龄(47±12)岁]以及98名健康对照[男55名,女43名,年龄(28±12)岁]血清中TSPAN7A水平。同时采用放射配体法(RLA)检测谷氨酸脱羧酶自身抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)、锌转运体8自身抗体(ZnT8A)水平,初步评估TSPAN7A的临床应用价值。结果100例T1D患者中GADA、IA-2A、ZnT8A、TSPAN7A的阳性率分别为72.0%、40.0%、29.0%、25.0%,经Bonferroni法校正后,TSPAN7A阳性率低于GADA(P<0.001),而与IA-2A(P=0.035)和ZnT8A比较差异无统计学意义(P=0.630)。T1D患者TSPAN7A阳性率高于T2D的0.84%(1/119;25.0%比0.84%,P<0.001)和健康对照的1.02%(1/98;25.0%比1.02%,P<0.001)。在其他抗体基础上联合检测TSPAN7A可使T1D抗体阳性检出率由82.0%提高至85.0%。TSPAN7A阳性T1D患者与其他3种胰岛自身抗体阳性者临床特征差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论本研究成功建立了TSPAN7A的荧光素酶免疫共沉淀检测技术,TSPAN7A是中国T1D人群的一种新型胰岛抗体。