早发性卵巢功能不全患者外周血Tfh占比、功能相关细胞因子表达变化及其与性激素水平的相关性

目的观察早发性卵巢功能不全(POI)患者外周血滤泡辅助性T细胞(Tfh)占比、功能相关细胞因子表达变化,并分析其与性激素水平的相关性。方法POI患者29例(观察组),同期健康体检者31例(对照组),采用流式细胞术检测全血Tfh占比,免疫印迹实验检测外周血单个核细胞(PBMC)CXCR5、BCL-6蛋白,酶联免疫吸附法检测血清IL-6、IL-21,电化学发光法检测血清促卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、泌乳素、孕酮、睾酮、雌二醇(E_(2))、抗缪勒管激素(AMH)水平,Spearman相关分析法分析Tfh、CXCR5蛋白、BCL-6蛋白、IL-6、IL-21与性激素的相关性。结果与对照组比较,观察组全血Tfh占比增加,血清IL-6、IL-21水平升高,PBMC CXCR5、BCL-6蛋白表达升高,血清FSH、LH水平升高,血清E_(2)、AMH水平降低,P均<0.05。全血Tfh占比与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.75、0.63,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.35、-0.82,P均<0.05);血清IL-6水平与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.75、0.62,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.47、-0.77,P均<0.05);血清IL-12水平与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.68、0.56,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.25、-0.73,P均<0.05);PBMC BCL-6蛋白表达与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.73、0.60,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.27、-0.76,P均<0.05);PBMC CXCR5蛋白表达与血清FSH、LH水平呈正相关(r分别为0.72、0.58,P均<0.05),与血清E_(2)、AMH水平呈负相关(r分别为-0.27、-0.70,P均<0.05)。结论POI患者全血Tfh占比增加,PBMC CXCR5、BCL-6蛋白表达升高,血清IL-6、IL-21、FSH、LH水平升高及E_(2)、AMH水平降低,Tfh及其相关因子与性激素呈正相关或负相关,Tfh及其相关因子可能参与了POI发生过程。

MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻特应性皮炎小鼠炎症

目的 探讨特应性皮炎(AD)模型中白细胞介素17C(IL-17C)介导滤泡辅助性T(Tfh)细胞分化的意义。方法BALB/c小鼠分为对照组、AD模型组、低剂量MOR106处理组、高剂量MOR106处理组,每组8只。除对照组外,其余各组均用2,4-二硝基氯苯(DNCB)处理建立AD模型,低剂量和高剂量MOR106处理组分别给与5 mg/kg或10 mg/kg MOR106(抗IL-17C huIgG1)处理。通过流式细胞术分析小鼠外周血中Tfh细胞亚群的分化,并采用Western blot法检测皮肤组织中Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路蛋白表达。结果 与对照组相比,AD模型组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著增加,AD组小鼠的Tfh细胞亚群显示去调节分化,导致外周血中CD4^(+)CXC趋化因子受体5(CXCR5)^(+)γ干扰素(IFN-γ)^(+)Tfh1细胞、 CD4^(+)CXCR5^(+)IL-17A^(+)Tfh17细胞和CD4^(+)CXCR5^(+)IL-21^(+)Tfh21细胞的百分比显著增加,以及CD4^(+)CXCR5^(+)IL-10^(+)Tfh10细胞和CD4^(+)CXCR5^(+)叉头盒转录因子3(FOXP3)^(+)滤泡调节性T(Tfr)细胞的百分比显著减少,磷酸化的JAK2(p-JAK2)、 p-STAT3蛋白水平显著增加;与AD模型组相比,MOR106处理组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著降低。MOR106处理有效地逆转AD小鼠外周血中Tfh1细胞、 Tfh10细胞、 Tfh17细胞、 Tfh21细胞和Tfr细胞的这些变化趋势。与AD组相比,低剂量和高剂量MOR106处理组小鼠p-JAK2、 p-STAT3蛋白水平显著降低。结论 MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路、抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻AD小鼠炎症反应。

基于营卫学说探究类风湿关节炎与Tfh/Tfr细胞失衡的相关性

目的:从营卫学说角度阐述滤泡辅助性T细胞(Tfh)/滤泡调节性T细胞(Tfr)失衡与类风湿关节炎中医病机之间的联系。方法:选取2021年9月至2022年12月在南京中医药大学附属中西医结合医院风湿免疫科就诊的门诊及住院类风湿关节炎患者62例,搜集患者一般情况、病史资料、中医辨证信息及血清样本。检测符合入选标准患者的空腹Tfh细胞比例、Tfr细胞比例、白细胞介素(IL)-21水平,描述营卫失调证候积分、Tfh细胞比例、Tfr细胞比例、Tfh/Tfr细胞比值与IL-21在类风湿关节炎患者中的分布,分析营卫失调证候积分、Tfh细胞比例、Tfr细胞比例、Tfh/Tfr细胞比值、IL-21等指标之间的相关性。结果:类风湿关节炎患者营卫失调证候积分与年龄、病程、红细胞沉降率、免疫球蛋白A、关节压痛数、健康评估问卷评分、28个关节病情活动指数评分呈正相关(P<0.05);类风湿关节炎患者的Tfh/Tfr细胞比值、IL-21与营卫失调证候积分呈正相关(P<0.05),Tfr细胞与营卫失调证候积分呈负相关(P<0.05)。结论:营卫失和是类风湿关节炎发生、发展的基本病机,影响患者病情。营卫失和可与Tfh/Tfr细胞失衡对应,Tfh/Tfr细胞平衡可能属于营卫和调在现代理论下的具象体现。

类风湿关节炎患者外周血TFH细胞TIGIT和PD1表达及意义

目的探讨含T细胞免疫球蛋白和酪氨酸免疫抑制受体结构域蛋白(TIGIT)和程序性死亡分子(PD1)在类风湿关节炎(RA)患者外周血滤泡辅助性T(TFH)细胞上的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪检测79例RA患者(RA组)和45例对照者(HC组)外周血TFH细胞TIGIT和PD1阳性的百分率和平均荧光强度(MFI),并进行比较,分析其与RA实验室检查指标的相关性。结果①与HC组相比,RA组仅PD1^(+)TFH细胞百分率和PD1表达MFI增高,差异有统计学意义(P<0.01)。②RA组TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率低于HC组(P<0.01);RA组TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率、PD1表达MFI和TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率、PD1表达MFI高于HC组(P<0.05)。③RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与类风湿因子(RF)呈正相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率、TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞和TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI均与阳性的RF呈正相关(P<0.05)。④RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率与血沉(ESR)呈负相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞百分率与ESR呈正相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率与淋巴细胞数量(Lym)呈负相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与淋巴细胞百分比(Lym%)呈负相关、与中性粒细胞数量(Net)、中性粒细胞百分比(Net%)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、系统性免疫炎症指数(SII)、衍生中性粒细胞与淋巴细胞比值(dNLR)、ESR、C-反应蛋白(CRP)呈正相关(P<0.05),TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI与Net、ESR、CRP呈正相关(P<0.05)。⑤RA组外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率与疾病活动性评分(DAS28)-ESR呈负相关(P<0.05),TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI和TIGIT^(-)PD1^(+)TFH细胞PD1表达MFI均与DAS28-ESR、DAS28-CRP、关节压痛数(PJC)、关节肿痛数(SJC)、视觉模拟评分(VAS)呈正相关(P<0.05)。⑥TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率降低和TIGIT^(+)PD1^(+)TFH细胞百分率升高为RA发病的危险因素。结论RA患者外周血TIGIT^(+)PD1^(-)TFH细胞百分率降低、TIGIT^(+)PD1^(+)TFH和TIGIT^(-)TPD1^(+)TFH细胞百分率升高,且与该疾病的抗体产生、炎症程度及活动性有关。

流式细胞术检测肉桂活性成分对Tfh细胞的影响

滤泡辅助性T细胞(Follicular helper CD4 T cells,Tfh)是重要的CD4^(+)T淋巴细胞亚群之一,与多种疾病的发生和发展密切相关,其参与疾病发生的机制尚有待深入研究。该研究将分离小鼠脾脏细胞,应用贝克曼Moflo分选系统分选出CD4^(+)T淋巴细胞。使用细胞因子刺激Tfh细胞分化并检测其分化比例,同时采用流式细胞术检测和分析肉桂活性成分对滤泡辅助性T细胞分化的影响。结果表明,贝克曼Moflo XDP分选系统可以显著提高CD4^(+)T淋巴细胞的纯度,且肉桂活性成分可以显著抑制Tfh细胞分化。为新药在Tfh细胞的开发提供一定实验基础,并且为研发肉桂作为新的增强免疫疗效药物提供可靠的实验依据。

调控BCL-6信号干预Tfh细胞分化:治疗炎症性肠病新策略

自滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh细胞)发现以来,大量证据表明与炎症性肠病的发病有关.Tfh细胞及其亚群分泌不同细胞因子皆可在炎症性肠病的发病过程中扮演重要角色,为靶向治疗炎症性肠病提供重要思路.BCL-6信号作为Tfh细胞分化途径上的关键性转录因子,可调控Tfh细胞的增殖、分化.在BCL-6信号缺乏时无法产生Tfh细胞,且BCL-6信号也可通过正性调控、负性调控以及表观遗传学等多种途径有效调控Tfh细胞的分化.在BCL-6信号调控异常时可导致Tfh的分化异常导致炎症性肠病的发生.因此可以通过干预BCL-6信号来调控Tfh细胞分化来作为治疗炎症性肠病新的有效靶点.

AIHA患者外周血Tfh/Treg细胞的检测及临床意义

目的研究自身免疫性溶血性贫血（AIHA）患者外周血CD4＋CXCR5＋T细胞（Tfh）及CD4＋CD25＋FoxP3＋ T细胞（Treg）数量和比例及相关细胞因子的变化，探讨其在AIHA发病机制中的作用。方法选择30例AIHA患者，分离外周血单核细胞（PBMC），采用流式细胞术（FCM）检测Tfh及Treg细胞的数量，ELISA法测定血清中IL-21，IL-10的水平及IL-21／IL-10比值变化，与同期选择的健康对照组比较。结果AIHA患者PBMC中Tfh细胞及IL-21因子的水平均高于健康对照组，而Treg细胞及IL-10水平低于对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05），Tfh／Treg与IL-21／IL-10比值均升高（P〈0．05），且IL-21／IL-10比值变化与患者病情呈正相关（P〈0．05）。结论Tfh及Treg细胞的比例异常及相关细胞因子IL-21／IL，10比值变化可能参与AIHA患者的免疫紊乱机制。

血管活性肠肽调控滤泡辅助性T细胞/滤泡调节性T细胞平衡治疗溃疡性结肠炎的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是以结肠黏膜屏障持续损伤为病理基础的自身免疫性疾病。滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞的异常表达与UC的发生发展密切相关,Tfh细胞具有分泌促炎因子、辅助B细胞产生抗体等作用,能够促进UC的发展,Tfr细胞则具有抑制Tfh细胞活性、分泌抗炎因子等作用,如何调节两者平衡已成为UC的潜在治疗靶点之一。血管活性肠肽(VIP)对UC具有防治作用,其机制与调控Tfh/Tfr细胞平衡密切相关,可对UC的治疗提供思路。

神香草对哮喘小鼠体内Tfh细胞的改善作用

目的观察神香草预处理对哮喘小鼠的保护作用,并探讨其可能机制。方法将32只Balb/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组及神香草组4组,每组8只。除对照组外,其余3组制备哮喘模型。哮喘组于第1天、第15天腹腔注射0.2 mL致敏液,第22天雾化吸入1%卵清蛋白(OVA)溶液,每次30 min,每周3次,连续8周。地塞米松组和神香草组分别于OVA激发前1 h给予地塞米松0.005 mg/10 g和神香草提取液0.04 g/10 g灌胃,每日1次,连续8周。对照组以生理盐水代替OVA处理。8周后,取材,流式细胞术检测外周血中CD4^+CXCR5^+/CD4^+和CD4^+CXCR5^+ICOS^+/CD4^+CXCR5^+的比例,Real-time PCR检测各组肺组织中BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL和IL-21 mRNA的表达,并观察肺组织病理学改变。结果与哮喘组比较,神香草组外周血CD4^+CXCR5^+/CD4^+和CD4^+CXCR 5^+ICOS^+/CD4^+CXCR5^+的比例减少,并且肺组织中BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL和IL-21 mRNA的表达亦明显降低(均P<0.05)。结论神香草可能通过减少Tfh细胞的数量和影响其相关分子的表达而在慢性哮喘治疗中发挥作用。

重症肌无力患者外周血中Tfh细胞表达的变化及其意义

目的:探讨重症肌无力(MG)患者外周血中Tfh细胞及相关细胞因子在MG发病中的作用。方法:收集40例MG患者和20例健康正常人外周血标本。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Tfh细胞比例;ELISA法检测血清中IL-21浓度;放射免疫沉淀法检测血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)滴度,并与Tfh细胞比例和IL-21水平进行相关性分析。结果:MG患者外周血中Tfh细胞比例、IL-21水平均较健康对照组显著增高,且与疾病的严重程度呈正相关;MG患者血清中抗AChR-Ab滴度较健康对照组显著增高,与Tfh细胞比例及IL-21水平呈正相关。结论:Tfh细胞参与了MG的病理过程,与自身抗体产生具有密切关系。

重症肌无力患者外周血AIRE、Tfh细胞和Tfr细胞与病情严重性相关分析

目的探讨自身免疫性调节因子(AIRE)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞与重症肌无力(MG)患者病情严重程度的相关性。方法收集2015-12—2016-4第四军医大学唐都医院收治的MG患者22例,根据临床表现分为全身型MG(GMG)和眼肌型MG(OMG);同期选取健康体检中心查体者10名作为健康对照。收集MG患者详细临床资料,包括美国MG协会(MGFA)分型及定量MG(QMG)评分。通过流式细胞术分析AIRE阳性细胞比例及Tfh/Tfr比值。结果 (1)AIRE表达在各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。GMG组和OMG组AIRE表达均较对照组降低(P<0.01,P<0.05),而GMG组与OMG组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Tfh/Tfr比值在各组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。GMG组和OMG组Tfh/Tfr比值均高于对照组(P<0.01,P<0.05),且GMG组高于OMG组(P<0.05)。(3)MG患者AIRE表达与MGFA分型及QMG评分呈负相关(r=-0.517,P<0.05;r=-0.616,P<0.01),Tfh/Tfr比值与MGFA分型和QMG评分呈正相关(r=0.761,r=0.581,均P<0.01)。结论 AIRE、Tfh/Tfr比值与MG的病情严重程度有一定的相关性,并可能参与了MG的发病。

补肾健脾-利湿化瘀方对IgA肾病模型大鼠Tfh细胞通路影响的研究

目的通过观察IgA肾病模型大鼠小肠黏膜Tfh通络ICOS、CXCR5、Bcl-6、IL-21的变化,探讨补肾健脾-利湿化瘀方对IgA肾病的治疗靶点。方法采用陆慧瑜改良法制备IgA肾病大鼠模型,随机分为空白组、模型组、洛丁新组、补肾健脾-利湿化瘀方(中药高、中、低)剂量组,各15只。给药7周后检测各组小肠黏膜ICOS、CXCR5、Bcl-6、IL-21的表达及肾脏病理的变化。结果与空白组比较,模型组的Tfh相关细胞在小肠黏膜中表达均显著增强(P<0.05),IgA在肾脏沉积明显增多;与模型组大鼠比较,各治疗组Tfh相关细胞在小肠黏膜表达明显减少,IgA在肾脏沉积明显减少,中药中剂量组减少最为显著(P<0.05)。结论补肾健脾-利湿化瘀方通过抑制小肠黏膜生发中心Tfh的过度活化,使IgA浆细胞生成减少,从而缓解肾脏损伤。

B2型胸腺瘤胸腺Tfr细胞和Tfh细胞与重症肌无力的相关性研究

探讨B2型胸腺瘤胸腺Tfr细胞和Tfh细胞与重症肌无力的相关性及对疾病诊治的决策意义。收集了2005年5月～2015年12月胸外科行胸腺切除术27例住院患者的临床及病理资料。其中合并重症肌无力(MG)12例,不合并MG15例,采用免疫荧光染色方法检测并分析两组胸腺生发中心中Tfr和Tfh细胞数及比值。结果,Tfr在两组间比较差异有统计学意义(P<0.01),B2型胸腺瘤合并MG组Tfr细胞低于对照组;Tfh在两组间比较差异有统计学意义(P<0.01),B2型胸腺瘤合并MG组Tfh细胞高于对照组;Tfh/Tfr比值在两组间比较有统计学意义(P<0.01),B2型胸腺瘤合并MG组Tfh/Tfr高于对照组。因此,B2型胸腺瘤合并MG患者胸腺中的Tfr细胞及Tfh细胞的异常,可能对生发中心形成免疫调控有一定作用,可能参与了MG的发病,从一个侧面加以证实以往研究MG的免疫调控机制,对疾病诊治提供了多维度的决策选择。

骨髓增生异常综合征患者外周血循环Tfh细胞变化及与B细胞功能异常的关系

目的:研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血循环滤泡辅助性T(Tfh)细胞变化及与B细胞功能异常之间的的关系。方法:2015年8月-2017年10月诊断为MDS20例患者纳入MDS组,20例在年龄、性别相匹配的健康志愿者纳入健康对照(HC)组。收集MDS患者和HC的外周血,通过密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC),同时保留分离过程中留下的血清。应用流式细胞术(FCM)检测PBMC中循环Tfh细胞即CD4^+CXCR5^+T细胞和其功能亚型CD4^+CXCR5^+ICOS^+T细胞、CD4^+CXCR5^+PD-1^+T细胞的百分比,同时检测浆母B细胞即CD19^+CD20^-CD38^+B细胞百分比。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IgA,IgM和IgG浓度。分析MDS患者和HC外周血中循环Tfh细胞、浆母B细胞比率和血清中抗体浓度的差异,并分析MDS患者外周血中循环Tfh细胞与浆母B细胞比率、及其与血清中抗体浓度的相关性。结果:MDS患者CD4^+CXCR5^+T细胞、CD4^+CXCR5^+ICOS^+T细胞和CD19^+CD20^-CD38^+B细胞百分比以及抗体浓度均低于HC,而CD4^+CXCR5^+PD-1^+T细胞的百分比高于HC。MDS患者CD19^+CD20^-CD38^+B细胞百分比和抗体浓度与CD4^+CXCR5^+T细胞、CD4^+CXCR5^+ICOS^+T细胞百分比呈正相关,而与CD4^+CXCR5^+PD-1^+T细胞百分比呈负相关(r=-0.613)。结论:MDS患者循环Tfh细胞及其功能亚型比率发生了明显变化,并与B细胞功能存在一定的相关性。

干扰素α对小鼠Tfh细胞分化的调控作用

通过体外试验观察干扰素-α(IFN-α)对滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化及功能的影响。无菌分离小鼠脾细胞,磁珠分选CD4^+T细胞,加入抗CD3单克隆抗体、抗CD28单克隆抗体,重组IL-21、IL-6进行刺激,同时加入重组IFN-α(设不加IFN-α的阴性对照)进行培养,分别在培养后的1、3、5d,流式细胞术检测Tfh细胞(CD4^+CXCR5^+)和CD4^+CXCR5^+PD-1^+细胞的比例;ELISA检测细胞上清中Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的水平;real-time PCR检测培养3d后Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平。结果表明,与阴性组相比,IFN-α能明显促进Tfh细胞的分化及Tfh细胞中PD-1的表达(P<0.05),能提高Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的分泌水平(P<0.05);IFN-α能正向调控Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平(P<0.05)。说明IFN-α可通过正向调控STAT1、Bcl-6的表达,促进Tfh细胞的分化和细胞因子的分泌。

实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠外周血Treg、Tfh细胞的检测分析

目的:探究Treg、Tfh细胞在小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)发病过程中的作用。方法:将ICR雌性小鼠分为模型组和对照组。模型组以猪甲状腺球蛋白(PTg)和弗氏佐剂免疫,合并高碘刺激。酶联免疫吸附法检测小鼠血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平;病理学分析小鼠甲状腺组织;流式细胞术分析小鼠外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg和CD4^+CD154^+CXCR5^+Tfh细胞的比例。结果:模型组TGAb水平为(138.10±12.10)U/mL,高于对照组的(2.46±0.56)U/mL(P<0.05);TPOAb水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05);病理学分析显示模型组甲状腺组织呈轻度炎症改变;模型组CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞比例为(6.20±3.27)%,低于对照组的(11.74±3.52)%(P<0.05);CD4^+CD154^+CXCR5^+Tfh细胞比例两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PTg合并高碘刺激5周时间,可导致小鼠自身免疫发生,甲状腺组织轻度炎症改变;CD4^+CD25^+FoxP3^+Treg细胞参与了早期自身免疫机制。

Tfh/Treg/Breg细胞与习惯性流产患者免疫紊乱的关系

目的探讨CD4+CXCR5^+T(Tfh)、CD4^+CD25^+Fox P3^+T(Treg)及CD1d(hi)CD5^+CD19^+B(Breg)细胞与习惯性流产(HA)患者免疫紊乱的关系。方法从2014年5月~2015年9月在广东省深圳市第二人民医院产检确诊的孕妇中,随机选择30例流产次数≥2次的女性作为HA病例组,同时选择30例正常怀孕生产的女性作为对照组。分别采集两组孕妇怀孕期间外周血,分离外周血单核细胞(PBMC),采用流式细胞术检测Tfh/Treg/Breg细胞数量及比例;采用酶联免疫吸附试验测定血清中白细胞介素-21(IL-21)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的水平,及IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β_1比值变化,并分析IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β_1比值变化与流产次数的相关性。结果与对照组比较,HA病例组Tfh/Th、Tfh/Treg、Tfh/Breg细胞比值均升高,差异有统计学意义(P<0.05),而Treg/Th、Breg/B细胞的比值均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,HA病例组IL-21升高(P<0.05),而IL-10、TGF-β_1均降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β_1比值均升高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β_1比值变化与HA病例组流产次数呈正相关((r=0.786、0.694,均P<0.05))。结论 Tfh/Treg/Breg细胞及相关因子IL-21/IL-10、IL-21/TGF-β_1比值变化可能与HA患者免疫紊乱机制相关。

HIV-1感染者TFH细胞的特点及临床意义

目的研究HIV-1感染者外周血CXCR5^+CD4^+T细胞(TFH)的特点及其与艾滋病(AIDS)进展的关系。方法本研究入组17例健康对照和65例HIV-1感染者,HIV-1感染者包括抗病毒治疗前患者48例、抗病毒治疗17例,其中抗病毒治疗前患者又分为CD4^+T细胞≤200个/μl者9例、200个/μl<CD4^+T细胞≤350个/μl者19例和CD4^+T细胞>350个/μl者20例。通过流式细胞技术检测健康对照和HIV-1感染者外周血CD4^+T细胞表面CXCR5分子的表达,并将HIV-1感染者TFH细胞百分比与CD4/CD8比值和HIV-1病毒载量进行相关性分析,对HIV-1感染者TFH细胞百分比、绝对计数与TFC细胞进行相关性分析。结果与健康对照组比较,HIV-1抗病毒治疗前组患者外周血TFH细胞百分比[(18.83±4.55)%vs.(22.06±5.35)%,U=242.00,P=0.0124)和绝对数[(60.23±27.62)个/μlvs.(207.53±51.50)个/μl,U=0,P<0.0001]明显降低;抗病毒治疗组TFH细胞绝对数明显高于抗病毒治疗前组[(135.05±60.77)个/μl vs.(60.23±27.62)个/μl,U=108.00,P=0.0082]。抗病毒治疗前组外周血TFH细胞百分比与CD4/CD8比值呈负相关(r=–0.338,P=0.019),与血浆病毒载量呈正相关(r=0.392,P=0.006)。TFH细胞百分比(r=0.363,P=0.011)和绝对数(r=0.408,P=0.004)与TFC细胞百分比均呈正相关。在抗病毒治疗前组中,随着CD4^+T细胞减少TFH细胞百分比下降,TFH细胞的绝对数呈增加趋势。结论 HIV-1感染者外周血TFH细胞与AIDS进展相关,TFH细胞的减少可能与外周血TFC细胞的清除杀伤作用有关。

FK506作为佐剂刺激Tfh细胞增强体液免疫水平的研究

目的:探讨他克莫司(FK506)作为佐剂通过刺激Tfh细胞增强疫苗体液免疫水平的机制。方法:利用FK506与模式蛋白(卵清白蛋白,OVA)皮下注射免疫BALB/c小鼠,免疫三次,利用ELISA方法检测抗体水平;利用抗体染色流式细胞仪检测Tfh细胞、B细胞表面分子IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27表达。结果:FK506作为OVA蛋白佐剂,能够显著提高小鼠OVA特异性的IgG水平,增强体液免疫水平;免疫后的小鼠Tfh细胞表达IL-21水平显著高于其他对照组。同时,B细胞表达IL-21R及记忆性B细胞标志分子CD27显著高于其他对照组。表明FK506作为佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21,作用于B细胞增强抗体水平。结论:FK506能够作为蛋白疫苗佐剂刺激Tfh细胞表达IL-21;IL-21可能通过与B细胞表面IL-21R作用,增强抗体的分泌;并刺激记忆性B细胞的产生,进而增强体液免疫水平。

糖皮质激素治疗对重症肌无力患者Tfh细胞亚群的作用

目的观察糖皮质激素治疗前后对重症肌无力患者Tfh细胞亚群的调控和影响。方法选取2015年8月~2016年9月于本院由糖皮质激素治疗显著的患者30例以及健康对照组20例,采用流式细胞术的方法检测对比健康对照组,同一患者治疗前后外周血中CD4+T细胞CXCR5,ICOS以及转录因子Bcl-6的表达,ELISA的方法比较治疗前后血清中细胞因子IL-21的表达水平。结果 (1)与健康对照组相比,新发MG患者Tfh细胞显著升高,而糖皮质激素治疗后显著降低;(2)新发MG患者相较于健康对照组,ICOS与Bcl-6表达显著上调,而糖皮质激素治疗后可以显著降低ICOS的表达水平;(3)新发MG患者血清中IL-21水平显著增加,糖皮质激素治疗后IL-21的水平较治疗前显著下降。结论(1)Tfh细胞的失衡可能参与重症肌无力的发病过程,其比例与MG的疗效相关。(2)糖皮质激素可能通过影响Tfh细胞IL-21的表达抑制自身抗体的产生治疗重症肌无力。