肺癌患者外周血单个核细胞Th1/Th2反应状态及黄芪的调节作用

目的:探讨肺癌患者外周血单个核细胞（PBMC）Th1/Th2免疫反应状态,观察中药黄芪（AG）对其作用。方法:采集并分离肺癌患者和健康志愿者的PBMCs,各分为4组:其中1组即刻冻存待测,其余3组分别为不加药对照组、加 10％AG、20％AG组,培养48h,收集细胞。以IL-2、IFN-γ代表Th1型细胞因子,IL-4、IL-6、IL-10代表Th2型细胞因子,用RT-PCR方法检测肺癌患者PBMC中Th1/Th2型细胞因子mRNA的表达。结果:肺癌患者PBMC中,IL-4、IL-6和IL-10表达阳性率显著高于正常对照（P<0.05）,而IL-2无1例表达（0/23）,IFN-γ仅1例表达;经与黄芪培养后（2种浓度）,肺癌患者Th2型因子与未加AG培养组相比,IL-4、IL-6和IL-10的表达率下降（P<0.05）;而IL-2的表达率显著提高（P<0.05）。结论:肺癌患者外周血的免疫细胞呈现Th2型免疫反应优势状态;黄芪对于肺癌宿主PBMCs Th1/Th2的状态有良好的调节作用,可使肺癌患者PBMCs的Th2型优势免疫反应向Th1方向逆转。

PLGA为佐剂的OVA纳米疫苗皮下注射可预防小鼠过敏反应性气道炎症和调节Th1/Th2反应

目的探讨聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(D,L-lactic-co-glycolic)acid,PLGA]包裹的卵清蛋白(OVA)纳米疫苗(POM)对哮喘小鼠的免疫治疗效果。方法包裹不同剂量(低、中、高)的OVA纳米粒子和对照(OVA、空白纳米粒子、PBS)通过皮下注射给予小鼠,再用OVA进行致敏和激发,通过肺组织学、支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数、测定BALF和脾细胞培养上清液中细胞因子的含量,观察小鼠呼吸道炎症和免疫学改变。结果肺部组织学和BALF中细胞计数结果显示,与PBS对照组相比,OVA治疗组、中剂量和高剂量OVA纳米组的肺部嗜酸性浸润显著减轻,BALF中总细胞和嗜酸性细胞显著减少。细胞因子测定结果显示,与PBS对照组相比,中、高剂量OVA纳米组的BALF和脾细胞培养上清液中IFN-γ显著升高,IL-4水平显著降低。OVA治疗组中IL-4水平显著下降,而IFN-γ水平无显著差异。结论OVA纳米疫苗可预防哮喘嗜酸性气道炎症,其可能的机制之一是调节了过敏性哮喘的Th1/Th2失平衡反应。

TIGIT信号在日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2反应平衡中的作用研究

目的研究TIGIT信号在日本血吸虫感染过程中Th1/Th2反应平衡中的作用。方法 C57BL/6小鼠感染日本血吸虫尾蚴,并以未感染小鼠作为正常对照。感染0、3、5、8、13周时取小鼠脾脏,采用流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞中TIGIT阳性细胞比例,以及TIGIT阴性和TIGIT阳性细胞上Ki67、IFN.γ、IL.4表达水平。结果日本血吸虫感染组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占CD4+T细胞的比例显著高于正常对照组(29.30%±0.70%vs.3.09%±0.50%;t=29.09,P<0.01),但感染组和对照组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占CD8+T细胞的比例差异无统计学意义(3.61%±0.26%vs.3.58%±0.16%;t=0.108,P>0.05),且感染组和对照组小鼠脾脏中TIGIT+细胞占非T细胞的比例差异亦无统计学意义(1.86%±0.19%vs.1.37%±0.17%;t=1.931,P>0.05)。进一步分析发现,Ki67在TIGIT+细胞上的表达比例(17.03%±0.64%)较其在TIGIT.细胞上表达的比例(6.59%±0.37%)显著升高(t=14.09,P<0.01),而CD4+TIGIT+细胞中Th2/Th1比值显著高于CD4+TIGIT.细胞(39.28%±3.75%vs.11.79%±1.64%;t=6.721,P<0.01)。结论感染日本血吸虫后,CD4+T细胞上TIGIT表达增加,且可能通过诱导Th2细胞增殖进而促进Th2细胞比例增加。

银屑病Th1/Th2模式的体外试验

目的 研究银屑病的Th1/Th2反应模式。方法 标本取自 33例寻常型银屑病患者和 2 0名正常对照者 ,利用植物血凝素 (PHA)和葡萄球菌肠毒素B(SEB)分别刺激外周血单个核细胞增殖 ,通过ELISA法检测PBMC培养上清中IL 2、IFN γ和IL 4水平。结果 SEB显著促进银屑病组 3种细胞因子的分泌 (P <0 .0 1) ;SEB和PHA刺激组中 ,进行期IFN γ/IL 4的比值均明显高于静止期 (P <0 .0 1)。结论 银屑病属于Th1型反应模式。

胸腺素Α_1对支气管哮喘患者气道高反应的抑制作用

目的探讨胸腺素Α1(TΑ1)对哮喘患者TH1/TH2免疫反应的调节以及其对气道高反应性的抑制作用。方法选取缓解期哮喘患者25例(哮喘组),给予胸腺素Α1(TΑ1)隔日一次皮下注射,每次1 MG/KG,疗程1.5月。健康志愿者(对照组)15名。分别对哮喘组用药前、后,对照组留取血标本,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测上述三组血清中IL-4、IL-5、IFN-Γ含量,并对检测结果进行统计学处理。结果哮喘组用药前血清中IL-4含量[(52.15±8.96)PG/ML]与对照组[(13.33±11.16)PG/ML]比较差异有显著性(P<0.01)。哮喘组用药后血清IFN-Γ量[(1185.52±67.10)PG/ML]显著增加,与对照组[(138.25±6.25)PG/ML]和用药前[(144.58±1.06)PG/ML]相比均有显著性差异(P=0.001);IL-4含量[(14.15±4.86)PG/ML]较用药前[(52.15±8.96)PG/ML]明显降低(P=0.001)。结论本研究显示:TΑ1能上调TH1型免疫反应,下调TH2型免疫反应,抑制IL-4和IL-5的过度表达,从而对哮喘患者的气道高反应性有治疗和抑制作用。

丰宫并殖吸虫感染诱导大鼠Th1/Th2免疫应答的偏移模式研究

目的明确丰宫并殖吸虫感染后宿主(SD大鼠)Th1/Th2免疫偏移模式。方法自丰宫并殖吸虫流行区采集溪蟹,分离丰宫并殖吸虫后尾蚴,采用腹壁皮下注射的方法建立丰宫并殖吸虫感染大鼠动物模型,分别在0、3、7、14、28、70 d处死大鼠,取血,分离血清,采用双抗体夹心ELISA法检测I型免疫反应(IL-1、TNF-α、INF-γ)和II型免疫反应(IL-4、IL-5、IL13)相关细胞因子,结合肺组织病变情况,分析丰宫并殖吸虫大鼠肺吸虫病的Th1/Th2免疫偏移模式。结果大鼠感染丰宫并殖吸虫后,血清Th1型细胞因子(IL-1、TNF-α、INF-γ)水平迅速上升,感染7 d左右达到高峰,随后呈逐渐下降趋势,其中感染3 d、7 d与0 d、14 d、28 d、70 d时比较[IL-1:(3、7 d)vs.(0、14、28、70 d)=(25.25±2.26、23.00±8.38)pg/ml vs.(17.34±2.76、15.89±4.44、10.34±2.90、10.82±6.05)pg/ml;IFN-γ:(3、7 d)vs.(0、14、28、70 d)=(279.58±51.43、276.29±54.64)pg/ml vs.(173.64±43.36、190.74±34.10、142.57±35.10、170.56±26.53)pg/ml;TNF-α:(3、7 d)vs.(0、14、28、70 d)=(49.39±8.03、54.78±13.64)pg/ml vs.(33.10±4.75、37.64±19.53、25.01±11.91、23.12±9.05)pg/ml],差异均有统计学意义(均P<0.05)。Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)呈逐渐上升趋势,14 d或28 d时达到高峰,之后逐渐下降,70 d时下降至感染早期水平,其中14 d、28 d与0 d、3 d、7 d时比较[IL-4:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(20.27±3.31、19.71±2.41)pg/ml vs.(10.77±2.58、9.90±3.62、12.92±3.65、11.72±2.42)pg/ml;IL-5:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(18.68±2.46、19.53±2.65)pg/mL vs.(9.60±1.58、9.38±2.24、10.76±2.85、8.10±1.69)pg/ml;IL-13:(14、28 d)vs.(0、3、7、70 d)=(13.57±0.94、13.38±1.10)pg/ml vs.(6.00±1.33、7.09±1.18、8.68±2.03、7.12±0.90)pg/ml],差异均有统计学意义(均P<0.05)。肺部特征与细胞因子水平变化规律相一致。结论在丰宫并殖吸虫感染大鼠,Th1型及Th2型免疫反应共同存在,综合作用于宿主。早期(3 d和7 d)以I型免疫反应为主,诱导机体迅速产生大量Th1型细胞因子(IL-1、TNF-α、INF-γ);至感染中后期(14 d和28 d),机体产生Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13),II型免疫反应逐渐取代I型免疫反应而占主导地位;进入慢性感染阶段后(70 d),两种免疫反应达到动态平衡。上述细胞因子的变化规律与肺组织大体观察特征吻合。

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs)Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P<0.01),抑制IL-4、IL-10的生成(P<0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF-κB信号通路激活,从而调控炎症因子表达,使Th1/Th2细胞因子网络平衡体系向Th1方向倾斜,缓解特应性皮炎(AD)。

树突状细胞及其在呼吸道炎症中的作用

树突状细胞是免疫应答的始动者，具有很强的异质性。体内有各种树突状细胞亚群发挥不尽相同的作用。树突状细胞在肺内呈网络状分布。在诱导肺部Th1／Th2免疫反应中以及诱导肺部免疫耐受中起着重要作用。