脑组织GDF-15水平与脑梗死大鼠血管新生以及Th1/Th2免疫平衡轴的关系

目的:探讨脑组织GDF-15水平与脑梗死大鼠血管新生以及Th1/Th2免疫平衡轴的关系。方法:45只雄性SD大鼠随机分为脑梗死模型组、假手术组以及正常对照组,15只/组。模型组采用线栓法建立脑梗死模型,假手术组仅暴露颈内动脉后直接缝合皮肤,建模成功后1周评估大鼠改良神经功能缺损(mNSS)评分。采用HE染色检测脑组织病理学变化情况,Western blot法检测大鼠脑组织中组织生长分化因子-15(GDF-15)蛋白水平,RTPCR测定脑组织中GDF-15 mRNA水平。采用ELISA法检测脑组织INF-γ、IL-4表达情况,采用Spearman相关性分析大鼠脑组织中GDF-15蛋白、mRNA表达水平分别与mNSS评分、微血管密度(MVD)、INF-γ/IL-4水平之间的相关性。结果:模型组大鼠mNSS评分明显高于假手术组和正常对照组(P<0.001),模型组脑梗死面积比为(24.45±4.15)%,假手术组和正常对照组未发现脑梗死区域。模型组大鼠脑组织GDF-15蛋白、mRNA、MVD、INF-γ/IL-4水平均明显高于假手术组和正常对照组(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,模型组大鼠脑组织中GDF-15蛋白、mRNA表达水平分别与mNSS评分、MVD、INF-γ/IL-4水平呈正相关关系(P<0.001)。结论:脑梗死大鼠脑组织中GDF-15处于高表达状态,且与神经功能密切关联,其作用机制可能与血管新生以及调控Th1/Th2免疫平衡轴有关。

香连止泻片对恶唑酮诱导溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制

目的探讨香连止泻片对恶唑酮诱导溃疡性结肠炎(UC)小鼠的治疗作用,并基于Th1/Th2免疫轴探讨其作用机制。方法选择雄性BALB/c小鼠48只,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组以及香连止泻低、中、高剂量组,每组8只。模型组、美沙拉嗪组以及香连止泻低、中、高剂量组采用恶唑酮诱导UC模型,空白组正常饲养,不予恶唑酮诱导UC模型。自建模第1天开始,美沙拉嗪组予美沙拉嗪0.31 g/kg灌胃,香连止泻低、中、高剂量组分别予香连止泻片0.68、1.36、2.72 g/kg灌胃,空白组和模型组予等量超纯水灌胃,连续灌胃7天。灌胃期间,每日评估疾病活动指数(DAI)。末次灌胃结束,称量体质量,麻醉后剪开腹腔,分离脾脏并称质量,计算脾脏指数;分离结肠,测量整段结肠长度。取部分结肠组织,过碘酸-雪夫染色,显微镜下观察结肠组织病理形态变化,计数结肠黏膜杯状细胞数量;取部分结肠组织,冰上匀浆,离心留取上清液,采用ELISA法检测IL-1β、TNF-α含量;取部分结肠组织剪碎,组织裂解液冰上充分裂解,提取组织总蛋白,采用Western blotting法检测IFN-γ、IL-4蛋白表达;末次灌胃结束,麻醉后取血,采用流式细胞术检测全血Th1、Th2细胞比例,计算Th1/Th2。结果与空白组比较,模型组DAI评分、脾脏指数,结肠组织IL-1β、TNF-α含量和IFN-γ蛋白表达,全血Th1细胞比例以及Th1/Th2,均显著升高(P均<0.05);结肠黏膜杯状细胞数量减少、排列不规则,内含糖原物质减少;结肠长度显著缩短,结肠组织IL-4蛋白表达和全血Th2细胞比例均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,美沙拉嗪组和香连止泻高剂量组DAI评分、脾脏指数,结肠组织IL-1β、TNF-α含量,全血Th1细胞比例以及Th1/Th2,均显著降低(P均<0.05);结肠黏膜杯状细胞数量增多、形态完整,内含糖原物质基本趋于正常;结肠长度缩短受到显著抑制,结肠组织IL-4蛋白表达显著上调(P均<0.05)。结论不同剂量香连止泻片对恶唑酮诱导UC小鼠均有一定治疗作用,以香连止泻片高剂量(2倍的临床等效剂量)效果最佳;纠正Th1/Th2免疫轴失衡,减轻肠道炎症,可能是香连止泻片的作用机制之一。

胸腺基质淋巴细胞生成素、OX40和OX40受体在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中表达的关系

目的建立小鼠过敏性腹泻模型，检测其大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）、OX40、OX40受体（OX40L）的表达和肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-_4、IFN-1的水平，分析其之间的关系，探讨TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻中的作用。方法雌性BALB／c小鼠20只随机分成两组即对照组和实验组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL4和IFN-1的水平，取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变，SP免疫组织化学技术检测TSLP、OX40、OX40L的表达。结果@HE染色结果显示：实验组比对照组小鼠结肠黏膜组织非特异性炎症反应显著，上皮排列不规则，有大量炎性细胞浸润，固有层可见大量嗜酸性粒细胞浸润；@TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中的表达水平高于对照组的表达水平（t=7．07，t=7．81，t=7．79，P均〈0．01）；③Spearman等级相关分析发现TSLP、OX40、OX40L三者问表达强度存在正相关（r=0．889，r=0．932，r=0．943，P均〈0．01），同时三者与肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL4水平呈正相关（r=0．891，r：0．936，r=0．886，P均〈0．05），而与IFN-1水平呈负相关（r=-0．829，r=-0．881，r=-0．937，P均〈0．05）。结论TSLP、OX40、OX40L三者间表达存在正相关，并诱导了Th1／Th2轴向Th2轴漂移，促进了过敏性腹泻的发生发展。