蝙蝠蛾被毛孢菌丝体通过激活TLR2、TLR4和Dectin-1诱导Th1型免疫反应

目的:研究蝙蝠蛾被毛孢菌丝体(MHCS)对抗原呈递细胞树突状细胞(Dendritic cells,DCs)成熟和功能的调节作用。方法:利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot和混合淋巴细胞培养等实验方法,检测了MHCS对DCs成熟和功能相关表面分子、细胞因子表达以及Toll样受体(TLR)2、TLR4和Dectin-1相关信号转导通路蛋白活性的调节作用。结果:MHCS显著上调DCs表面分子CD11c、MHCⅠ和MHCⅡ、辅助刺激分子CD40、CD80和CD86以及模式识别受体TLR2、TLR4和Dectin-1的表达;促进Th1型细胞因子IL-12产生,抑制Th2型细胞因子IL-10、IL-13和TGF-β1产生;诱导TAK1和IRF3磷酸化活性增加。MHCS也显著刺激幼稚型Th细胞增殖,诱导幼稚型Th细胞向Th1方向分化。利用中和性抗体,分别阻断DCs细胞TLR2、TLR4或Dectin-1活性,可部分抑制MHCS诱导的DCs成熟。结论:MHCS能促进DCs成熟,诱导Th1型免疫反应。MHCS的这些作用与其激活模式识别受体TLR2、TLR4或Dectin-1有关。

NKT细胞在CFA促进的Th1型免疫应答中的作用

为探索CFA促进小鼠对蛋白质抗原产生Th1介导的特异性免疫应答的机制 ,我们用OVA +CFA和OVA +IFA免疫C5 7BL/6小鼠 ,并于第 3天、第 8天后用MACS +FACS法分离引流淋巴结中NKT细胞 ,在体外经CD3单抗刺激 2d后测定其分泌的细胞因子数量及格局。同时于免疫后第 8天分离引流淋巴结抗原特异性T细胞 ,测定其分泌细胞因子的格局 ;并于再次免疫后 2周检测小鼠血清抗体类型。ELISA结果显示 ,与OVA +IFA组相比 ,OVA +CFA免疫小鼠引流淋巴结NKT细胞和抗原特异性T细胞分泌IFN γ的能力均显著升高 (P <0 0 5 ) ,且血清抗体类型以IgG2a为主。表明CFA促进抗原特异性Th0细胞极化为Th1细胞可能是通过激活NKT细胞使之在免疫应答局部产生大量的IFN

黑骨藤皂苷对特应性皮炎小鼠的治疗作用及对Th1型免疫反应的影响

目的探讨黑骨藤皂苷对特应性皮炎(AD)小鼠的治疗作用及对Th1型免疫反应的影响。方法 30只BLAB/c雌性小鼠随机分为正常组8只,模型组10只,黑骨藤皂苷组12只。除正常组外,其余两组均需造模。将小鼠腹部体毛剃去,用1.5%2,4-二硝基氯苯(DNCB)(丙酮∶橄榄油=4∶1)溶液100μL涂在腹部剃毛处初次致敏,2周后在小鼠耳廓内外两侧相同位置涂1%DNCB溶液20μL,1周重复刺激3次,连续2周,共造模30 d。从初次致敏起,黑骨藤皂苷组给予黑骨藤皂苷(0.002 g/d)灌胃,正常组和模型组分别给予等体积生理盐水灌胃,连续灌药30 d。从再次致敏当天(造模第14天)用游标卡尺测量每只小鼠两耳中部厚度,以后每次DNCB刺激前测量1次并记录,观察小鼠两耳外观肿胀情况。在末次耳部DNCB刺激12 h后取材,采用临床症状评分评价小鼠耳朵大体外观;切取耳部皮肤做病理切片,HE染色观察小鼠耳朵组织表皮厚度,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞浸润情况;采用免疫组化法检测耳组织CD68蛋白的表达;采用ELISA法测定血清IgE、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达。结果与模型组比较,不同时间正常组与黑骨藤皂苷组左耳厚度均降低(P<0.05或<0.01)。正常组、模型组、黑骨藤皂苷组临床症状评分组间两两比较,P均<0.01。正常组、模型组、黑骨藤皂苷组耳部组织表皮厚度组间两两比较,P均<0.01;真皮层肥大细胞浸润数目组间两两比较,P均<0.01。与正常组比较,模型组组织CD68及血清TNF-α、IgE、MCP-1水平均升高;与模型组比较,黑骨藤皂苷组组织CD68蛋白及血清TNF-α、IgE、MCP-1水平均降低(P<0.05或<0.01)。结论黑骨藤皂苷对AD小鼠有治疗作用,可抑制Th1型免疫反应。

藤龙补中汤对晚期大肠癌患者Th1型免疫反应作用

[目的]观察藤龙补中汤对晚期大肠癌患者细胞免疫功能作用。[方法]将62例晚期大肠癌患者随机分为对照组和治疗组,对照组给予化疗治疗,治疗组给予藤龙补中汤联合化疗治疗;观察2组患者治疗前后T细胞亚群及相关细胞因子变化情况。[结果]治疗组治疗后CD3+、CD4+、CD8+CD28+T细胞亚群,Th1型细胞因子IL-2与IFN-γ,以及IL-12显著升高(P<0.01),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]藤龙补中汤可以增强Th1型免疫反应,并可能与升高IL-12促使Th1细胞分化,分泌Th1型细胞因子促CD8+T执行细胞免疫功能相关,值得进一步研究。

IL-27在Th1型免疫发生中的作用

IL-27是最近发现的一种与IL-12相关的细胞因子,它由抗原提呈细胞产生,通过广泛表达于各种免疫细胞表面的IL-27受体WSX-1/gp130发挥生物学效应。IL-27对Th1型免疫反应具有重要的调节作用。IL-27可以促进初始CD4+T细胞的增殖,也可以促进其向Th1细胞的分化及产生IFN-γ。而在高度Th1极化的情况下,IL-27的主要作用是限制Th1型免疫反应的强度和持续时间,从而保护机体免受过度的免疫反应的损伤。IL-27在抗感染免疫,抗肿瘤免疫及自身免疫性炎症等Th1型免疫主导的病理过程中起重要作用。

结核分枝杆菌抗原Ag85B优势诱导活动性结核患者Th1型细胞免疫反应研究

目的观察Ag85B抗原在诱导活动性结核患者细胞免疫应答中的作用。方法选取60例活动性结核患者,分离其外周血单个核淋巴细胞(PBMC),加Ag85B抗原刺激培养72h,ELISA法检测上清液中的IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10细胞因子浓度,流式细胞术(FCM)检测CD4^+T淋巴细胞内的细胞因子IFN-γ水平,定量PCR及Western blot法检测PBMC细胞转录因子T-bet、GATA-3的表达。结果检测活动性结核患者外周血单个核淋巴细胞(PBMC)培养上清液,Ag85B蛋白实验组Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2浓度明显高于结核菌素(PPD)组(P<0.05),而Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平与PPD组相比,差异无统计学意义(P>0.05),以上两组细胞因子水平均明显高于空白对照组(P<0.05)。流式细胞法检测CD4+T胞内细胞因子IFN-γ水平,Ag85B蛋白实验组高于PPD组及空白对照组(P<0.05)。定量PCR及Western blot法检测,T-bet水平Ag85B组高于PPD组(P<0.05),而GATA-3水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论结核杆菌抗原Ag85B可以通过上调Th1型转录因子T-bet诱导优势Th1型免疫反应,为结核病的预防及治疗提供理论基础。

E3泛素连接酶RNF216调控Th1型免疫应答促进肿瘤发生的研究

泛素-蛋白酶体蛋白降解系统是细胞内调控蛋白更新的重要机制,E3泛素连接酶是介导蛋白泛素化修饰的关键分子,可参与调控包括肿瘤发生的多种病理生理过程。E3泛素连接酶RNF216是否可调控肿瘤的发生发展尚不明确。本研究采用WT和RNF216基因缺陷型(RNF216-/-)小鼠,使用EO771乳腺癌细胞建立乳腺癌移植瘤模型,观察乳腺癌细胞在小鼠中的成瘤情况,以明确RNF216在肿瘤发生中的作用及其可能机制。实验结果表明乳腺癌细胞EO771在RNF216-/-小鼠中的成瘤情况和WT小鼠相比显著减小,而且存活率明显升高;腹腔注射CpG可抑制肿瘤的生长,在RNF216-/-小鼠中的抑瘤效果则显著增强。进一步研究表明在乳腺癌细胞EO771移植瘤小鼠模型中,和WT小鼠相比,CpG刺激RNF216-/-小鼠可显著诱导TNF-α、IFN-γ、IL-6等Th1型细胞因子的分泌,而Th2型细胞因子的变化不显著,这提示RNF216可能直接或者间接参与Th1型应答调控。可见,RNF216可通过调控Th1型免疫应答参与肿瘤的发生发展。

幽门螺杆菌脂多糖能促进免疫鼠的Th1型免疫应答

幽门螺杆菌（Hp）感染在全世界流行，导致慢性胃炎，其中10％～15％的患者会发展为消化性溃疡或胃癌。美国加利福尼亚大学的Taylor等用含脂多糖（LPS）的Hp（LPS＋）全菌体超声处理物和去除LPS的HP（LPS-）超声处理物接种BALB／c鼠，比较Hp LPS对全身和局部免疫应答的影响。

变应性鼻炎患者血清中YKL-40含量与嗜酸性粒细胞功能、Th1/Th2型及Treg/Th17型免疫的相关性

目的:探讨变应性鼻炎患者血清中YKL-40含量与嗜酸性粒细胞功能、Th1/Th2型及Treg/Th17型免疫的相关性。方法:选择本院收治的变应性鼻炎患者310例作为变应性鼻炎组,同期在本院进行体检的健康志愿者100例作为正常对照组。对比两组研究对象血清中YKL-40含量、嗜酸性粒细胞功能、Th1/Th2及Treg/Th17细胞因子含量的差异。采用Pearson检验评估变应性鼻炎患者血清YKL-40含量与病情严重程度的相关性。结果:变应性鼻炎组血清中YKL-40的含量高于正常对照组;变应性鼻炎组血清中嗜酸性粒细胞功能IgE、Eotaxin-2的含量高于正常对照组;血清中Th1细胞因子IFN-γ、IL-12的含量低于正常对照组,Th2细胞因子IL-4、IL-13的含量高于正常对照组;血清中Treg细胞因子TGF-β的含量低于正常对照组,Th17细胞因子IL-17的含量高于正常对照组高。经Pearson检验发现,变应性鼻炎患者血清中YKL-40的含量与嗜酸性粒细胞功能、Th1/Th2型及Treg/Th17型免疫状态直接相关。结论:变应性鼻炎患者存在血清YKL-40含量异常高表达,且具体表达量与病情严重程度呈正相关。

SAM-P1鼠对神经毒型流感病毒R404BP株中枢神经系统感染的免疫防御

目的:研究SAMP1鼠中枢神经系统被流感病毒感染后,机体对感染神经元的清除及病毒感染所诱导的免疫应答。方法:采用立体定位微量注射法,用神经毒型流感病毒R404BP株经嗅球感染SAMP1鼠,造成实验性流感病毒脑炎动物模型。检测感染鼠生存率,感染神经元清除时间以及Th1型细胞免疫。结果:SAMP1鼠对流感病毒R404BP株易感性高,感染后生存率降低,清除感染神经元所需时间延长,脾淋巴细胞NK活性及CTL杀伤活性低下。结论:老化鼠因机体Th1型免疫应答下降导致对神经毒型流感病毒免疫防御机制的降低。

基于RTB的新型免疫增强剂构建、表达及免疫效果评估

目的利用自主知识产权抗体3E1,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位,通过构建含肽的绿色荧光蛋白原核表达载体,实现含肽的绿色荧光蛋白在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,评价小鼠舌下口服含蓖麻毒素B链肽的绿色荧光蛋白后黏膜免疫应答的能力。方法用生物信息学技术,确定蓖麻毒素B链与细胞特异性结合的活性肽部位;分子克隆技术构建含不同肽的绿色荧光蛋白原核表达载体;镍金属离子鏊合柱纯化目的蛋白;间接ELISA测定小鼠舌下口服不同肽-GFP融合蛋白后各种抗体水平的变化。结果实现了含不同肽的GFP在大肠杆菌中的高效、可溶性表达,获得了纯度大于90%的肽-GFP融合蛋白。免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体。免疫组血清中IgG2b、IgG3、IgA水平与对照组无明显差异。结论分别用4个小分子肽-GFP融合蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中均检测到了较高水平的IgG抗体,其中的P1肽-GFP融合蛋白免疫小鼠的血清中检测到了较高水平的IgG2a和IgM抗体,激发了Th1型免疫应答。

重组幽门螺杆菌疫苗免疫保护作用与免疫后胃炎

目的:研究以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)疫苗的免疫保护机制。方法:将表达不同Hp抗原的减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonellatyphimurium)分别免疫小鼠,免疫4周后以Hp攻击;在攻击前及攻击后5周分批处死小鼠,比较各组小鼠Hp定植密度及各项免疫指标的变化。结果:(1)和NS(Normalsalin,NS)对照组相比各免疫组的Hp定植密度显著下降。(2)和NS组相比攻击前后各免疫组血清IgG2a和胃黏膜Th1型细胞因子表达显著升高。(3)和NS组相比攻击后免疫组鼠胃黏膜出现明显的炎症反应。结论:以减毒鼠伤寒沙门菌为载体构建的重组幽门螺杆菌疫苗在小鼠体内诱导出以Th1反应为主并伴随免疫后胃炎的保护性免疫应答。

TLR4激活剂对约氏疟原虫感染早期免疫应答的影响

通过外源性给予LPS,探讨TLR4在疟疾感染早期免疫应答的作用特点及其免疫调节作用。通过Plasmodium yoelii 17XL感染的BALB/c小鼠建立鼠疟模型并在感染前给予LPS,于感染第0、3和5天制备脾细胞悬液,通过流式细胞术检测脾细胞悬液中TLR4+DCs和Tregs百分含量;ELISA方法检测脾细胞培养上清中IFN-γ和IL-10水平。结果显示,LPS处理能够显著延长宿主生存期,降低原虫血症水平,同时显著提升脾上清中的IFN-γ水平,降低抑炎性细胞因子IL-10水平。在感染早期,LPS处理可诱导Th1型免疫应答的有效建立,明显遏制P.y 17XL红内期疟原虫的感染进程。

高效赤红球菌协同CpG ODN增强鸡禽流感疫苗的免疫效力

禽类疫苗存在免疫效率低、免疫持续时间短和细胞免疫刺激不足等问题,新型禽类疫苗佐剂亟待开发。作者的前期研究证实,CpG ODN具有高度的安全性以及良好的细胞和体液免疫刺激功能,然而,CpG ODN的生产和使用成本十分高昂,尚未用于禽类疫苗佐剂。为了降低成本并提升功效,基于TLR2和TLR21潜在的协同关系,本研究以禽流感疫苗为模式疫苗,探究了赤红球菌和CpG ODN协同刺激免疫的关系。通过HI试验、细胞增殖试验和相关细胞因子表达量的检测,证实了该复合佐剂具有更强大的体液免疫和细胞免疫提升功效,能提升Th 1型免疫反应,免疫保护持续时间长,同时还能增强系统和局部免疫。通过检测受体的表达量,确证了CpG ODN与赤红球菌之间存在着协同关系。此外,在CpG ODN剂量减半的复合佐剂刺激试验中,发现由于协同关系的存在,CpG ODN半剂量的复合佐剂仍具有良好的免疫刺激效果。本研究为进一步降低CpG制剂的生产和使用成本做了先行探究,为CpG制剂高效且成本可控地应用于禽类动物养殖,乃至畜牧养殖奠定了基础。

IL-4通过抑制树突状细胞合成IL-10以促进IL-12的分泌

长久以来,IL-4被认为是强效诱导Th2分化的细胞因子,近来越来越多的文献报道IL-4也能促进树突状细胞(dendriticcella,DCa)合成IL-12,进而诱导Th1型免疫应答,但是其中的具体机制有待进一步阐明. 作者首先研究了IL-4对LPS诱导DCa成熟分泌细胞因子的影响.结果发现IL-4抑制LPS诱导的DCa分泌IL-10,同时促进IL-12 p70的产生.并且,IL-4是通过下调IL-10 mRNA或上调IL-12p35 mRNA转录进而影响相应蛋白的生成.同样条件下IL-4并不影响LPS活化的DCs分泌IL-6和TNF-α.此外,IL-4只能抑制DCa合成IL-10,并不抑制反而促进LPS诱导的B细胞分泌IL-10.因此IL-4对IL-10的抑制作用具有细胞特异性,也证实IL-4可通过促进B细胞分泌IL-10诱导Th2型免疫应答.

宿主抗新孢子虫感染的免疫机制研究进展

新孢子虫病是一种危害世界养牛业的重要动物原虫病,其病原为顶复门寄生原虫新孢子虫,主要造成牛、羊等反刍动物的流产。目前缺少可以用来预防或治疗新孢子虫病的疫苗和药物,究其原因,主要是由于对新孢子虫致病机制的认识有限。研究表明,新孢子虫感染导致流产的机制与母胎界面的炎症以及感染刺激宿主细胞介导的免疫反应有关。先天免疫反应中的模式识别受体在识别新孢子虫感染中起着关键作用,并进一步激活下游的多种级联信号通路;适应性免疫中的Th1型细胞免疫在抗新孢子虫入侵以及清除新孢子虫中也发挥着至关重要的作用。论文主要综述模式识别受体、先天免疫途径以及细胞免疫等在宿主抵抗新孢子虫感染中的研究进展,以期为后续新孢子虫致病机制的深入研究及防控措施的开发提供参考。

针对结核分枝杆菌潜伏感染的DNA疫苗V569免疫原性及保护性的初步研究

为研究针对结核分枝杆菌潜伏感染的DNA疫苗,基于质粒A39构建了p-VAX1-Ag85B-Rv3425-Rv2029c-PPE26(V569)质粒DNA,并对其免疫原性及保护性进行初步研究。免疫性评价试验共分6组:PBS、p-VAX1-Ag85B(A)、p-VAX1-Ag85B-Rv3425(A3)、A39、V569和BCG,采用左后腿肌内注射C57BL/6小鼠,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测细胞免疫和体液免疫水平;构建斑马鱼-海分枝杆菌潜伏感染模型,将PBS、A、A3、A39、BCG、V569分别通过腹腔注射免疫斑马鱼后,每日注射地塞米松10ug诱导海分枝杆菌复发感染,对斑马鱼肝脏进行菌落计数并绘制生存曲线。结果显示,与BCG组相比,V569能引发实验小鼠强烈的细胞免疫反应(IFN-γ高水平分泌),外周血CD4+/CD8+T细胞比例明显增加。在斑马鱼-海分枝杆菌潜伏感染复发模型中,与BCG免疫组相比,V569免疫斑马鱼后可显著减少其肝脏中海分枝杆菌数量,斑马鱼存活情况得到显著改善,表明V569 DNA疫苗可能是一种抗结核潜伏感染的候选DNA疫苗。

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠Th1、Th2和Th17免疫反应检测

目的探讨不同类型免疫反应在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法 24只SD大鼠随机均分为EAE组和对照组,通过行为观测和大脑微观形态学确认免疫诱导的EAE模型,用ELISA法检测淋巴结和脾细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ和血清中IgG水平,流式细胞术检测淋巴结和脾细胞中IL-17及Foxp3细胞频数。结果与对照组相比,EAE组IgG、IFN-γ、IL-17及IL-4水平均明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论 Th1、Th2和Th17免疫细胞在EAE的发病均起着重要的作用。