日本血吸虫感染小鼠CD_4^+ T淋巴细胞协同刺激分子表达谱及其在介导Th1/Th2极化中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠不同病期体内及体外培养后脾CD4+T淋巴细胞表面的协同刺激分子表达谱,探讨协同刺激分子介导Th1/Th2极化的作用。方法收集血吸虫感染后4w、7w、12w、16w和20w小鼠及正常小鼠脾CD4+T淋巴细胞,以及上述不同病期经SEA诱导72h后脾淋巴细胞培养上清,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子CD80、CD86、ICOS、CD40、OX40、4-1BB及PD1表达水平,用ELISA法检测培养上清中的Th1细胞因子IFN-γ,Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-13。结果血吸虫感染后小鼠脾CD4+T淋巴细胞表面CD86、ICOS、CD40和OX40的表达均随感染时间延长而上调,其中ICOS和CD86表达上调最为显著;经SEA诱导培养72h后CD86、ICOS亦显著上调表达;培养上清检测发现IFN-γ在4w时呈高表达,7w开始随感染时间延长呈下调表达;IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达水平则从7w开始明显升高,IL-5的峰值出现在12w,其余均16w达高峰,致20w仍维持在较高水平。结论日本血吸虫感染小鼠CD4+T淋巴细胞协同刺激分子表达水平与Th1/Th2免疫偏移密切相关,其中ICOS、CD86在介导Th2极化中可能具有重要作用。

ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫对CD28/CD86表达及Th1/Th2极化的影响

目的探讨上调可诱导共刺激分子(ICOS)信号对感染日本血吸虫小鼠CD28/CD86的表达及Th1/Th2极化的影响。方法建立ICOS转基因(ICOS-Tg)小鼠及野生型FVB/NJ小鼠日本血吸虫病模型,应用流式细胞术分析感染前(0周)和感染后(4～20周)小鼠的脾CD4+T淋巴细胞上CD28与脾CD19+B淋巴细胞上CD86的表达水平。应用免疫组化法检测同期小鼠肝脏虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞上CD28、CD86表达水平变化。取同期小鼠脾淋巴细胞用SEA进行诱导培养72 h后,采用ELISA法检测培养上清中Th1(IFN-γ、IL-12)及Th2(IL-4、IL-13)细胞因子表达水平。采集同期小鼠的血清,应用ELISA法检测血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的表达水平。应用HE染色法观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变动态变化。结果ICOS-Tg小鼠脾CD4+T细胞上CD28和脾CD19+B细胞上CD86的水平与同期野生型FVB/NJ小鼠相比明显升高,且分别在感染4周后(50.57±7.54 vs 40.38±5.43,P<0.05)及在感染12周后(76.46±10.55 vs 65.10±10.17,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿的CD28、CD86表达亦高于野生型FVB/NJ小鼠的水平,且分别在感染7周后(0.485±0.094 vs 0.357±0.078,P<0.05)及感染12周后(0.649±0.072 vs 0.537±0.064,P<0.05)差异显著。ICOS-Tg小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13)水平从感染7周后比野生型FVB/NJ小鼠显著升高(皆P<0.05);ICOS-Tg小鼠血清SEA特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a的水平显著高于野生型FVB/NJ小鼠的水平(P<0.05、0.01、0.001不等);ICOS-Tg小鼠Th2分化指数与IgG1/IgG2a的比值亦高于野生型小鼠,分别在感染7、12、16、20周后(P<0.05、0.001)及12、16周后(皆P<0.05)具有显著性差异。在整个病程中,ICOS-Tg小鼠肝脏虫卵肉芽肿体积显著大于野生型FVB/NJ小鼠。结论感染日本血吸虫的ICOS-Tg小鼠CD28、CD86表达及其Th2免疫应答显著上调,并伴随肝虫卵肉芽肿病变增强,表明ICOS信号对CD28-CD86信号通路具有一定的调控作用,且在介导Th2极化及肝虫卵肉芽肿的发生、发展中发挥重要作用。

CD4单抗选择对于流式细胞术分析Th1/Th2极化的有效性评价

选择13B8.2和S3.5两株商品化的CD4单克隆抗体用于Th1/Th2极化的流式细胞术评价,分析PMA、Ionomycin和BFA单独或联合作用于外周血CD4抗原表达水平的变化,以确定Th1/Th2极化评价时有效的CD4设门单抗,并试图揭示CD4抗原降调的机制。结果表明,13B8.2可作为CD4的设门单抗。PMA和Ionomycin联合刺激会导致外周血CD4抗原的明显降低,而PMA单独刺激不能,且BFA与PMA和Iononmycin同时加入外周血中可部分抑制PMA和Ionomycin刺激引起的CD4抗原内吞和降解。

Th1/Th2极化相关因子在血吸虫病肝纤维化发生发展中的作用

血吸虫病肝纤维化是宿主感染血吸虫后发生免疫反应导致的严重病理损害。宿主处于何种免疫应答状态决定了肝纤维化的进展。当宿主体内以Th1免疫应答为主时,不易发生肝纤维化;而宿主体内以Th2免疫应答为主时,易形成肝纤维化。细胞因子及共刺激分子在Th1/Th2极化过程中均发挥重要的作用。本文综述了细胞因子和共刺激分子调控Th1/Th2极化的作用及其与血吸虫病肝纤维化发生、发展相关性的研究进展。

PRRSV感染对细胞自噬与Th1/Th2细胞极化影响的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是一种急性、高度接触性传染病,严重危害着养猪业的健康发展。目前的药物和疫苗不能有效防治该病,因此研究猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的致病机制具有重要意义。自噬是最新发现的一种细胞维持生存的途径,它是通过降解大分子物质及回收受损细胞来维持细胞内环境稳态变化的一种生理现象,在病原微生物感染过程中发挥关键的调控作用。研究表明,PRRSV感染能够诱导细胞自噬,而自噬参与调控Th1/Th2细胞平衡,Th1/Th2细胞因子极化在宿主防御病原感染中起着至关重要的作用。因此,文章对PRRSV感染、Th1/Th2细胞极化与细胞自噬的相关性,以及Th1/Th2细胞极化与PRRSV的免疫相关性进行综述,以期更加深入地了解PRRSV致病机制。

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。

成人外周血细胞中Th2功能亚群分化的体外实验研究

目的 :研究在中性条件和Th2极化条件下CD3单克隆抗体 (CD3mAb)激活的人外周血αβT细胞Th1/Th2型细胞因子的表达。方法 :用CD3mAb、IL 2刺激人外周血单个核细胞 (PBMC) ,作为CD3mAb激活的T淋巴细胞 (CD3AT)的中性条件培养 ;用CD3mAb、IL 2、rhIL 4和抗人IL 12抗体 ,作为Th2极化条件。分别收集PBMC和培养后第 7、14和 2 1天细胞 ,加PMA、ionomycin和monensin作用 6h后 ,用多色荧光抗体标记 ,在流式细胞仪上检测αβT细胞中胞内IFN γ或IL 4产生细胞的比例。结果 :PBMC中IFN γ+ 或IL 4 + αβT细胞分别为 2 3.6 %、2 .4 %。与中性条件相比 ,Th2极化条件下培养 3周 ,αβT细胞中IFN γ产生细胞明显减少 (P <0 .0 0 1) ,IL 4 + 产生细胞显著增加 (P <0 .0 0 1) ;同时产生IFN γ+ IL 4 + 细胞从 3.6 %增加至 6 .1%。结论

Th1/Th2细胞因子在复发性外阴阴道念珠菌病中的作用

复发性外阴阴道念珠菌病同阴道局部的Th1/Th2细胞的极化密切相关。念珠菌诱导局部产生的白介素(IL)-4、IL-10和IL-25等细胞因子,促使Th0细胞向Th2型细胞分化,并抑制Th1型细胞的增值,引起局部免疫功能紊乱,从而导致阴道局部对念珠菌的免疫功能降低。

大黄素调控树突状细胞Tsc1/mTORC1通路对Th1/Th2细胞极化治疗脓毒症的影响

目的探讨大黄素(Emo)调控树突状细胞结节性硬化症复合体1(Tsc1)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)通路对Th1/Th2细胞极化治疗脓毒症的影响。方法将小鼠分对照组、模型组(采用盲肠结扎和穿刺法构建小鼠脓毒症模型)、模型+Emo组;采用脂多糖(LPS)构建树突状细胞(通过小鼠股骨骨髓获取)脓毒症模型,分为对照组、LPS组、LPS+Emo组;采用Transwell构建树突状细胞与CD4^(+)T细胞(通过腹腔灌洗液获取)共培养体系,分为LPS组、LPS+Emo组、LPS+Emo+sh-NC组、LPS+Emo+sh-Tsc1组细胞;采用HE染色观察各组小鼠心、肺、肝组织损伤情况;采用流式细胞术分离CD4^(+)T细胞,以及检测Th1和Th2细胞分化情况;采用ELISA法检测小鼠血清中TNF-α和IL-1β的表达情况以及小鼠脾脏和树突状细胞培养上清液中IL-12和IL-4的表达情况;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏和各组树突状细胞中Tsc1和mTORC1信号通路关键蛋白(S6、pS6)的表达情况。结果小鼠体内模型中,与对照组相比,模型组小鼠心、肝、肺显著损伤,脾脏中TNF-α和IL-1β表达显著升高,Th1/Th2细胞比例显著升高,Tsc1蛋白表达显著降低,S6蛋白磷酸化水平显著增高;与模型组相比,模型+Emo组小鼠心、肝、肺组织损伤部分恢复,脾脏中TNF-α和IL-1β表达显著降低,Th1/Th2细胞比例显著降低,Tsc1蛋白表达显著升高,S6蛋白磷酸化水平显著降低。体外树突状细胞模型中,与LPS组相比,LPS+Emo组细胞培养上清液中Tsc1蛋白表达升高,pS6蛋白表达降低,IL-12和IL-4表达显著降低,Th1/Th2细胞比例显著降低;抑制Tcs1表达后,与LPS+Emo+sh-NC组相比,LPS+Emo+sh-Tsc1组细胞培养上清液中IL-12和IL-4表达显著升高,Tsc1蛋白表达降低,pS6蛋白表达升高,Th1/Th2细胞比例显著升高。结论Emo对脓毒症有明显的治疗作用,其作用机制可能为通过调控树突状细胞中Tsc1/mTORC1通路,影响树突状细胞分泌T细胞极化因子IL-12和IL-4,从而影响Th1/Th2细胞极化以治疗脓毒症。

Th1／Th2炎症极化与肺气肿和肺纤维化

肺气肿具有Ⅰ型T辅助细胞（Th1）炎症极化的特征，表现为损伤过度和修复不足，肺实质的破坏增加，肺间质变薄。与之相反，肺纤维则具有Ⅱ型T辅助细胞（Th2）炎症极化，表现为损伤后修复过度，肺间质增厚，胶原沉积。通过调控Th1和Th2的炎症趋势来控制肺组织的损伤和修复的结局可能会为肺气肿和肺纤维化的防治提供新思路。

从IFN-γ/IL-33表达变化探讨EAN中的Th1/Th2细胞极化

目的探讨IFN-γ和IL-33在实验性自身免疫性神经炎(EAN)发病机制中的作用及EAN中的Th1/Th2细胞极化。方法用P253-78肽段免疫Lewis大鼠,建立EAN模型,观察其发病情况和组织病理改变,并检测淋巴细胞增值反应,用RT-PCR技术检测干扰素γ(IFN-γ)和白介素33(IL-33)在大鼠发病高峰期脾脏、淋巴结和坐骨神经中的表达。结果EAN组大鼠临床表现明显,病理检查可见大量炎性细胞浸润;坐骨神经组织、淋巴结,脾脏中IFN-γmRNA表达显著升高,IL-33mRNA表达明显减少,其引流淋巴结淋巴细胞对P253-78aa的刺激发生强烈的淋巴细胞增殖反应。结论IFN-γ对EAN发病起促进作用,IL-33对EAN大鼠起保护作用;EAN中Th0细胞向Th1的转化明显增强而向Th2细胞的转化则受到抵制。

可诱导共刺激分子信号介导的免疫应答对血吸虫性肝纤维化形成的影响

目的探讨可诱导共刺激分子（inducibleCO—stimulator，ICOS）信号介导的Th2极化对日本血吸虫所致肝纤维化的影响。方法建立ICOS转基因（ICOS—Tg）小鼠及野生型FVB／NJ小鼠日本血吸虫病模型，分别于感染前（0周）和感染后4、7、12、16和20周采集小鼠血清、脾淋巴细胞和肝脏。脾淋巴细胞用可溶性虫卵抗原（SEA）诱导培养72h后，应用ELISA法分别检测细胞培养上清中细胞因子1干扰素（IFN一1）、白细胞介素12（IL一12）、IL一4和IL．13水平．血清中SEA特异性抗体IgG及其亚类IgGl和IgG2a的水平．以及血清中透明质酸（HA）和羟脯氨酸（HYP）的含量。应用免疫组化法检测各期感染小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白（d．SMA）、转移生长因子B1（TGF—B1）和I型胶原蛋白（collagen—I）水平。分别应用苏木素．伊红（HE）染色法和胶原纤维Masson染色法动态观察感染小鼠肝脏虫卵肉芽肿病变及纤维化程度。结果ICOS．Tg小鼠Th2细胞因子IL一4和IL一13水平自感染后7～20周均显著高于野生型小鼠（P〈0．05），Thl细胞因子IFN-γ和IL-12两组之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。ICOS—Tg小鼠的1’h2分化指数亦高于野生型小鼠．在感染后7～20周差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。ICOS—Tg小鼠的SEA特异性抗体IgG、IgGl和IgG2a水平均显著高于野生型小鼠（P〈0．05或P〈0．01，感染后4～7周IgG水平除外），IgGl／IgG2a比值均高于野生型小鼠，其中感染后12和16周（ICOS．Tg小鼠为5．75±0．94和4．96±0．98，野生型小鼠为4．31±0．81和3．41±0．83）差异有统计学意义（P〈0．05）。ICOS—Tg小鼠血清中HA和HYP的水平均高于野生型小鼠，分别在感染后7～20周及12～20周两组差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。免疫组化结果显示，ICOS．Wg小鼠于感染后7～20周肝脏仪一SMA和TGF—B1蛋白表达水平均显著高于野生型小鼠（P〈0．05或P〈0．01）；collagen-I的表达水平亦高于野生型小鼠，但仅在感染后20周两组差异有统计学意义（P〈0．05）。肝组织HE染色结果显示，ICOS-Tg小鼠于感染后7、12和16周的单卵肉芽肿体积『分别为（28．72±6．68）×106、（20．47±5．09）×106和（12．77±4．86）×106μm3]，均显著大于同期野生型小鼠『分别为（18．04±6．21）x106、（15．28±4．87）×106和（11．24±4．38）×10^6μm3]（P〈0．05）。Masson染色结果显示．ICOS—Tg小鼠的肝脏纤维化程度较高．但两组的纤维化程度评分差异无统计学意义（P〉0．05）。结论感染日本血吸虫ICOS．Tg小鼠的Th2免疫应答显著上调．且其肝纤维化程度和相关指标均增强．表明ICOS信号介导的Th2极化与感染日本血吸虫导致的肝纤维化有关。

黄芩、白芍对牙周炎小鼠治疗效果的对比研究

目的比较黄芩、白芍对牙周炎小鼠血清IgG和IgG1水平的影响,探讨黄芩和白芍对牙周炎的免疫干预和治疗作用机制。方法 64只清洁级12周龄雄性昆明小鼠随机分成4组,每组16只。牙周炎组、黄芩治疗组、白芍治疗组采用丝线结扎上颌第一磨牙并在结扎部位涂菌4周,建立小鼠实验性牙周炎模型,于建模后第5周分别以蒸馏水、黄芩水提物和白芍水提物灌胃。各组动物于建模后第4、6、8、10周各处死4只。制做牙体牙周组织联合切片,显微镜下观察牙周组织的病理变化。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中抗体IgG和IgG1的水平。结果牙周炎组可见牙周组织破坏明显。较牙周炎组相比,黄芩治疗组和白芍治疗组牙周组织炎症程度均明显减轻。与牙周炎组相比,黄芩治疗组和白芍治疗组血清IgG水平在6、8和10周逐步升高(P<0.01)。黄芩治疗组在各时间点的血清IgG水平较白芍治疗组提高显著(P<0.01)。黄芩治疗组和白芍治疗组在6、8和10周IgG1抗体水平均显著升高(P<0.05)。黄芩治疗组血清IgG1水平在各时间点均较白芍治疗组升高显著(P<0.05)。结论黄芩、白芍可以增强抗体IgG的水平和强化Th2细胞反应,达到治疗小鼠牙周炎的效果;黄芩对小鼠牙周炎的治疗效果优于白芍。

日本血吸虫不同病期血清抗体对虫源性及卵源性组分抗原的识别及鉴定

目的分析不同病期感染兔血清所识别的日本血吸虫成虫抗原（adult worm antigen，AWA）和可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen，SEA）的组分蛋白，探索可能与Th1／Th2极化相关的主要功能性抗原。方法常规方法制备成虫和虫卵抗原，用SDS-PAGE电泳和Western blotting技术，分析鉴定感染动物血清抗体识别的虫源性及卵源性组分抗原。结果不同病期血清抗体识别的AWA、SEA组分蛋白谱不同。其中AwA中的11kDa、37kDa、57kDa、79kDa、95kDaa组分分子能被各病期（2～20w）感染血清抗体所识别；SEA中的10kDa、18kDa、41kDa、47kDa、74kDa则可被急性期及以后各病期（6～20w）血清抗体所识别，25kDa、32kDa仅为急性期（6～12w）血清抗体所识别，提示这些组分抗原可能为血吸虫免疫应答的主要功能性抗原，并且同感染血清的反应性明显与病期相关。结论以上AwA和SEA的组分蛋白和不同病期感染血清的反应与血吸虫感染后的Th1／Th2免疫偏移相关，其中能被急性期及以后各病期血清抗体共同识别的SEA主要功能性组分抗原中可能存在诱导Th2极化反应的重要抗原分子。

蛋白糖蛋白A重复序列活化态Tregs细胞对类风湿性关节炎的影响及机制

目的探究蛋白糖蛋白A重复序列(glycoprotein A repetitions predominant,GARP)活化态Tregs细胞对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的影响及机制。方法选取232例RA患者和240例健康志愿者,收集临床资料,ELISA法检测RF、anti-CCP和CRP含量;流式细胞术检测外周血中GARP^+Tregs比例,并做Pearson相关性分析;q-PCR法检测FoxP3 mRNA含量;ELISA检测外周血中IL-17A、TGF-β1、IFN-γ和IL-4含量。结果RA患者抗CCP、RF和CRP含量和ESR均明显高于健康志愿者;RA组GARP^+Tregs,TGF-β1和FoxP3 mRNA含量明显低于健康志愿者;IL-4含量明显降低,IFN-γ含量显著升高;Th1/Th2指数和IL-17A含量显著高于健康志愿者组;RA患者的CRP水平和ERS与外周血GARP^+Tregs比例变化具有明显负相关性;与Th1/Th2指数变化具有明显正相关性。结论GARP^+Tregs比例变化可能指示RA的发生发展,可能通过调控Th1/Th2细胞反应平衡向Th2应答方向发展,及自身与Th17反应平衡参与调节RA病变的作用。

抑制GATA-3基因表达的RNAi载体构建和筛选

GATA-3在Th2免疫网络中起至关重要的作用。本研究的目的是构建和筛选出能够高效、特异性抑制GATA-3基因表达的siRNA质粒载体。在小鼠P815细胞中转染以GATA-3作为靶基因的PSi338、PSi717和PSi1232的干涉质粒载体,通过RT-PCR和Western blot方法分别从转录和蛋白质水平观察它们对GATA-3基因表达的影响。结果表明:PSi338、PSi717均能明显抑制P815细胞中GATA-3 mRNA的表达和GATA-3蛋白的合成。结论:成功地构建和筛选出两条高效、特异性抑制GATA-3基因表达的siRNA质粒载体。

金蝉花多糖对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其机制研究

目的探讨金蝉花多糖对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。方法选取90只雄性小鼠,依体质量均衡分组:正常组,模型组,秋水仙碱组和金蝉花多糖低、中、高剂量组。除正常组外,其余组均通过每周2次的皮下四氯化碳注射(1.0 mg/kg)建立小鼠肝纤维化模型,7周后,秋水仙碱组,金蝉花多糖低、中、高剂量组分别持续灌胃秋水仙碱0.1 mg/kg,金蝉花多糖0.5 mg/kg(低剂量)、1.0 mg/kg(中剂量)和2.0 mg/kg(高剂量)2次/d,共3周。第10周处死小鼠并计算肝指数;Masson染色观察肝组织重构;比色法测定血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;酶联免疫吸附法测定外周血γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和转化生长因子-β(TGF-β)水平;RT-qPCR检测肝组织α-肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原和TGF-βmRNA水平;流式细胞仪检测外周血Tregs比例变化。结果模型组小鼠诱导7周起体质量、外周血IFN-γ和Th1/Th2水平明显低于正常组(P<0.05),肝指数,纤维化比例,肝组织羟脯氨酸、α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、TGF-βmRNA水平,外周血AST、ALT、IL-4、TGF-β水平和Tregs比例明显高于正常组(P<0.05);诱导10周时,金蝉花多糖中、高剂量组体质量明显高于模型组(P<0.05),和秋水仙碱组比较差异无统计学意义(P>0.05)。金蝉花多糖中、高剂量组肝指数,纤维化比例,肝组织羟脯氨酸、α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、TGF-βmRNA水平,外周血ALT、AST、IL-4、TGF-β、Tregs比例,均明显低于模型组(P<0.05),外周血IFN-γ及Th1/Th2明显高于模型组(P<0.05);与秋水仙碱组相比,金蝉花多糖中、高剂量组肝指数,纤维化比例,外周血TGF-β水平、Tregs比例、IL-4水平,肝脏组织TGF-βmRNA水平明显降低(P<0.05),外周血IFN-γ及Th1/Th2明显升高(P<0.05),金蝉花多糖高剂量组肝组织羟脯氨酸、α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA及外周血ALT、AST明显降低(P<0.05)。结论金蝉花多糖通过下调Tregs比例进而降低促纤维化因子TGF-β水平,同时调控Th1/Th2反应平衡,对四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠具有治疗保护作用。

颗粒物和CD4^+T淋巴细胞IFN-γDNA甲基化在儿童变应性鼻炎发病中的机制研究

目的:探讨大气污染环境对AR儿童CD4+TIFN-γ基因启动子区域甲基化的表观遗传调控及相关转录水平表达的影响。方法:对35例6~12岁确诊为持续性AR患儿进行随访,收集患儿血样及设立匹配30例为正常对照组,均进行IFN-γ基因启动子区域的甲基化克隆测序并使用实时定量逆转录聚合酶链反应检测其mRNA表达水平。根据上海市环境局提供的PM10和PM2.5数据,结合居住地址和气象监测点经纬度资料,利用克里格插值法,同时使用上海地区颗粒物穿透率系数模型和儿童室内外活动时间的调查,对PM2.5和PM10的个人综合暴露评估。结果:AR组CD4+T淋巴细胞中IFN-γ基因启动子区域平均甲基化水平明显高于对照组(P<0.05);其中位点-299、+119、+168甲基化程度有差异(P=0.004,P=0.029,P=0.035);AR组IFN-γ转录水平明显降低(P<0.05),并与其平均DNA甲基化水平呈负性相关(r=-0.341,P<0.01)。校正后AR患儿长期暴露的颗粒物PM2.5浓度与其IFN-γ基因启动子区域甲基化程度呈正相关(β=1.441,SD=0.672,P<0.05)。结论:AR患儿IFN-γ基因启动子区域甲基化高水平可能受到PM2.5的影响。