壮药龙盘止咳方通过调控p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路减轻急性支气管炎小鼠肺损伤

目的:探究壮药龙盘止咳方减轻急性支气管炎小鼠肺损伤的潜在机制。方法:KM小鼠采用烟熏法建立急性支气管炎模型,将造模成功的60只小鼠随机分为模型组、SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂,5 mg/kg)组、高剂量(10.4 g/kg)龙盘止咳方组、低剂量(5.2 g/kg)龙盘止咳方组和龙盘止咳方(10.4 g/kg)+SB203580(5 mg/kg)组,每组12只,另将正常饲养的12只小鼠设为对照组。分组完成后进行药物干预,每天1次,连续1周。观察给药前后各组小鼠的一般状态变化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18水平;HE染色观察肺组织病理学变化;免疫组化法检测肺组织核因子κB(NF-κB)p65的阳性表达;RT-qPCR检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平;Western blot检测肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/NF-κB/NLRP3通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠出现咳嗽、流涕、呼吸急促等症状,且肺部支气管可见炎性细胞浸润、肺泡壁和支气管壁增厚、黏膜充血和水肿等病理损伤,肺组织NF-κB p65在胞核中呈强阳性表达,BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平,肺组织NLRP3、IL-1β、ASC和caspase-1的mRNA表达水平,以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白水平显著升高(P<0.05),胞质NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,高、低剂量龙盘止咳方组和SB203580组小鼠咳嗽、流涕、呼吸急促等症状,以及肺部支气管炎症细胞浸润等病理损伤明显减轻,肺组织胞核NF-κB p65呈阳性表达的细胞数减少,BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18水平,肺组织NLRP3、IL-1β、ASC和caspase-1的mRNA表达水平,以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、胞核NF-κB p65、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白水平显著降低(P<0.05),胞质NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05)。且龙盘止咳方和SB203580联合应用对p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路及肺部炎症的抑制作用均优于单独应用。结论:壮药龙盘止咳方可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB/NLRP3通路的激活,减少肺部炎症细胞因子的产生,从而减轻急性支气管炎小鼠肺损伤。

壮医龙盘止咳方对肺炎支原体感染BALB/c小鼠NOD样受体蛋白3炎性体信使核糖核酸表达的影响

目的:探讨壮医龙盘止咳方对肺炎支原体(Mycoplasma Pneumonia,MP)感染小鼠NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎性体信使核糖核酸(messenger Ribonucleic Acid,mRNA)表达及白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)分泌的影响。方法:将96只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、MP模型对照组、罗红霉素组及壮医龙盘止咳方组,每组24只。采用滴鼻法建立支原体感染小鼠模型,每组小鼠灌胃给药2周,其中正常对照组及MP模型对照组分别灌服相同容量蒸馏水。于造模后7 d、14 d、28 d留取小鼠肺组织及肺泡灌洗液,分别用荧光定量聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)及酶联免疫吸附试验方法检测肺组织中NLRP3、接头蛋白指向相关斑点蛋白(Apoptosis-associated Speck-like Protein Containing CARD,ASC)及支气管肺泡灌洗液(Broncho-Alveolar Lavage Fluid,BALF)中IL-18的表达量。结果:给药后7 d、14 d罗红霉素组和壮医龙盘止咳方组可下调支原体模型小鼠肺组织NLRP3、ASC表达及BALF中IL-18的分泌(P <0.05)。结论:壮医龙盘止咳方治疗MP感染与下调NLRP3炎性体相关mRNA表达及抑制IL-18分泌有关。

壮药龙盘止咳方治疗小鼠甲型流感病毒H1N1肺炎的作用及机制

目的:探究壮药龙盘止咳方的抗流感病毒性肺炎作用及其相关机制。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、高剂量(10.4 g/kg)龙盘止咳方组、低剂量(5.2 g/kg)龙盘止咳方组和龙盘止咳方(10.4 g/kg)+Toll样受体3(TLR3)激动剂聚肌胞苷酸[Poly(I:C),20 mg/kg]组,每组20只。采用甲型流感病毒(IAV)H1N1滴鼻法建立病毒性肺炎模型,观察小鼠一般状态,并每组取10只小鼠,记录15 d的存活率和存活时间;计算肺、脾和胸腺指数;HE染色观察肺组织病理变化;实时荧光定量PCR检测肺病毒载量;ELISA法检测肺匀浆中白细胞介素6(IL-6)、IL-4、干扰素α(IFN-α)、IFN-β和IFN-γ水平;Western blot检测肺组织TLR3/视黄酸诱导基因I(RIG-I)/核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达。结果:对照组小鼠精神状态良好,在实验期间未出现死亡;与对照组相比,模型组小鼠在感染后出现典型的流感症状,小鼠存活率、存活时间、脾指数和胸腺指数显著降低(P<0.05),肺指数,肺组织病理学评分,病毒载量,肺匀浆中IL-6、IL-4、IFN-γ、IFN-α和IFN-β水平,肺匀浆中IFN-γ/IL-4比值,以及肺组织TLR3、胞核NF-κB p65、RIG-I和干扰素β启动子刺激蛋白1(IPS-1)表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,高、低剂量龙盘止咳方组小鼠症状明显减轻,小鼠存活率、存活时间、脾指数、胸腺指数、肺匀浆中IFN-α和IFN-β水平及肺组织RIG-I和IPS-1表达均显著增加(P<0.05),肺指数,肺组织病理学评分,病毒载量,肺匀浆中IL-6、IL-4和IFN-γ水平,肺匀浆中IFN-γ/IL-4比值,以及TLR3和胞核NF-κB p65表达均显著降低(P<0.05);而Poly(I:C)可明显减弱龙盘止咳方对IAV H1N1感染小鼠的肺脏保护作用。结论:壮药龙盘止咳方有减轻IAV H1N1感染小鼠肺损伤的作用,其机制可能与调节TLR3/RIG-I/NF-κB信号通路,抑制过度的先天炎症反应有关。

壮医龙盘止咳方治疗小儿急性支气管炎风热犯肺证30例临床观察

目的:观察壮医龙盘止咳方治疗小儿急性支气管炎风热犯肺证的临床疗效。方法:选取60例急性支气管炎风热犯肺证的患儿,将其随机分为2组,每组各30例。治疗组采用壮医龙盘止咳方治疗,对照组予小儿宣肺止咳颗粒治疗,治疗5d后观察2组患儿的疗效、白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(INF-γ)含量的变化情况,并进行中医证候评分。结果:总有效率治疗组为89.66%(26/29),对照组为76.67%(23/30),2组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组治疗后IL-4高于对照组,INF-γ及中医证候积分均低于对照组,各项指标组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:壮医龙盘止咳方治疗小儿急性支气管炎风热犯肺证疗效显著,值得推广应用。