化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢的影响

目的基于CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢探讨化瘀祛痰方防治血脂异常的机制。方法32只SPF级SD大鼠分为空白对照组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组8只。除空白对照组外,其他各组给予高脂饲料喂饲,建立高脂血症模型。于第13周开始,化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀灌胃,空白对照组、模型组给予相应体积的生理盐水灌胃,每日1次,灌胃4周。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;HE染色观察肝脏组织病理变化;Elisa检测各组大鼠肝脏14,15-环氧二十碳三烯酸(14,15-epoxyeicosatrienoic acid,14,15-EET)水平;Real time RT-PCR检测肝脏组织细胞色素P450表氧化酶2J3(Cytochrome P450 oxidase 2J3,CYP2J3)、肉毒碱棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)mRNA水平;Western blot法检测肝脏组织CYP2J3、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-actived protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase,ACC)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、CPT-1蛋白水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05);肝脏脂质沉积显著,可见大量脂滴;肝脏组织内14,15-EET含量显著降低(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著降低(P<0.01)。与模型组比较,经化瘀祛痰方及辛伐他汀干预后,大鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.05);肝脏脂质沉积情况明显改善,脂滴数明显减少;肝脏组织内14,15-EET水平显著升高(P<0.01);肝脏CYP2J3、CPT-1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01),p-AMPK/AMPK、p-ACC/ACC显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可有效改善高脂血症大鼠血脂异常,减轻肝脏脂质沉积情况,其机制可能与CYP2J3/EETs介导脂肪酸代谢密切相关。

化瘀软肝解毒方治疗乙型肝炎后肝硬化患者疗效观察

目的探究化瘀软肝解毒方治疗乙型肝炎后肝硬化患者的疗效。方法随机选取2021年1月—2021年12月在该院接受治疗的乙型肝炎后肝硬化患者120例,采用随机数表法分为观察组(62例)和对照组(58例)。对照组采用富马酸替诺福韦酯治疗,观察组在对照组基础上联合化瘀软肝解毒方治疗。比较两组治疗疗效、不良反应发生率,同时检测治疗前后血清肝纤维化指标[透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)]、肝功能指标[谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(bilirubin,TBil)]、肾功能指标[内生肌酐清除率(endogenous creatinine clearance,Ccr)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)]以及基质金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor-1 of metalloproteinase,TIMP-1)表达水平。结果观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05),两组均未发生明显不良反应。治疗后,观察组血清HA、LN、TIMP-1、ALT以及TBil均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组肾功能指标Ccr、β2-MG差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合使用化瘀软肝解毒方和富马酸替诺福韦酯治疗乙型肝炎后肝硬化具有更好的临床疗效,在改善患者肝功能和肝纤维化指标均具有优势,值得临床进一步验证及推广。

基于AMPK调控ACC/CPT1信号通路介导脂肪酸代谢探究化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响

目的 观察化瘀祛痰方含药血清对HepG2细胞脂质沉积的影响,并探究其作用机制。方法 采用1 mmol/L油酸棕榈酸混合液诱导HepG2细胞24 h构建脂质沉积模型,分别给予化瘀祛痰方含药血清、AMP依赖的蛋白激酶[Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase, AMPK]抑制剂及抑制剂+中药联合干预,油红O染色观察脂质沉积情况,试剂盒检测细胞中甘油三酯(triglyceride, TG)含量,蛋白印迹法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl CoA Carboxylase, ACC)、p-ACC、肉碱棕榈酰基转移酶-1(Carnitine Palmitoyltransferase-1,CPT1)蛋白相对表达量,以及实时荧光定量法检测细胞中AMPK、ACC、CPT1 mRNA相对表达水平。结果 与模型组相比,化瘀祛痰方含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,细胞中p-AMPK、CPT1蛋白及CPT1 mRNA相对表达量升高,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),AMPK蛋白及基因相对表达水平无明显差别(P>0.05);AMPK抑制剂组细胞中脂滴及TG含量升高,AMPK、CPT1蛋白及mRNA相对表达量降低,ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量升高(P<0.05或P<0.01);与AMPK抑制剂相比,抑制剂+中药含药血清组细胞中脂滴数目减少、TG水平降低,AMPK、p-AMPK蛋白及AMPK mRNA相对表达水平无显著差异(P>0.05),ACC、p-ACC蛋白及ACC mRNA相对表达量降低、CPT1则相对表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论 化瘀祛痰方含药血清可能通过激活AMPK使其磷酸化,并调控ACC/CPT1信号通路,抑制脂肪酸合成,促进脂肪酸氧化,从而降低HepG2细胞内的甘油三酯水平及脂质沉积。

基于化瘀通痹方干预活动期类风湿关节炎效果观察及血清TNF-α、IL-1β、CRP变化机制探究

目的研究化瘀通痹方干预活动期类风湿关节炎效果及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)变化机制。方法选取2017年2月—2019年1月医院活动期类风湿关节炎患者192例,采用SPSS 20.0软件,产生随机数字,将纳入患者分为观察组和对照组(各96例)。两组患者均采用同样的药物基础干预,观察组联合化瘀通痹方;且观察两组患者第1个疗程结束时(T1)、第3个疗程结束时(T2)临床治疗效果,检测治疗前(T0)、T1和T2类风湿因子(RF)和血清TNF-α、IL-1β、CRP水平,统计晨僵、关节疼痛等症状、体征变化状况及用药安全性。结果 T1时,观察组临床总有效率67.71%(65/96)与对照组60.42%(58/96)比较,差异无统计学意义(P>0.05);T2时,临床总有效率94.79%(91/96)高于对照组70.83%(68/96),差异有统计学意义(P<0.05)。T0、T1、T2时,两组患者晨僵时间、关节压痛数、肿胀数和休息痛评分、患者自评/总体状态评分以及RF、TNF-α、IL-1β、CRP水平均呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05);T2时,观察组晨僵时间、关节压痛数、肿胀数和休息痛评分、患者自评/总体状态评分及RF、TNF-α、IL-1β、CRP水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组药品不良反应事件6例(发生率6.25%)低于对照组的15例(发生率15.63%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论化瘀通痹方通过降低血清TNF-α、IL-1β、CRP水平,利于削弱活动期类风湿关节炎炎症反应程度而减轻关节损伤,其增效减毒作用显著。

益气化瘀方对糖尿病大鼠溃疡创面血管再生能力影响的研究

目的:探讨益气化瘀方对糖尿病溃疡大鼠血管再生及溃疡创面愈合能力的影响。方法:SPF级大鼠90只,采用随机数字表法将其分为3组,每组30只,益气化瘀组予益气化瘀方灌胃,模型组、空白组均予生理盐水灌胃;采用STZ和高糖高脂饮食制造糖尿病大鼠模型;每只大鼠手术制造一边长2 cm的正方形皮肤创面。术后3、7、14 d每次随机在各组中取10只大鼠,观察大鼠创面愈合率、取溃疡标本Western-blot检测标本VEGF、VEGFR,免疫组化观察微血管密度。结果:益气化瘀组和模型组术后3、7、14 d创面愈合率明显低于空白组(P<0.05)。益气化瘀组术后3、7、14 d创面愈合率高于模型组(P<0.05)。益气化瘀组和模型组术后3 d、7 d VEGF、VEGFR光密度值明显低于空白组(P<0.05)。术后14 d,益气化瘀组VEGF、VEGFR光密度值高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。益气化瘀组术后3、7、14 d VEGF、VEGFR光密度值均高于模型组(P<0.05)。益气化瘀组术后3、7 d微血管密度低于空白组(P<0.05)。术后14 d,益气化瘀组微血管密度高于空白组(P<0.05)。益气化瘀组术后3、7、14 d微血管密度均高于模型组(P<0.05)。结论:益气化瘀方能改善糖尿病大鼠溃疡局部VEGF、VEGFR分子的分泌,促进溃疡面的愈合。

化瘀祛痰方对高脂血症合并肝癌小鼠PPP途径及脂肪酸合成的影响研究

目的观察化瘀祛痰方对高脂血症合并肝癌小鼠磷酸戊糖(pentose phosphate pathway,PPP)途径及脂肪酸合成的影响。方法将60只Balb/c小鼠随机分为正常组、肝癌组、高脂合并肝癌组、化瘀祛痰方低、中、高剂量组。空白对照组和肝癌组予普通饲料喂养,高脂合并肝癌组及中药组予高脂饲料喂养。12周后肝脏原位注射H22肝癌细胞造模,空白对照组注射等量生理盐水。造模成功后,中药组予化瘀祛痰方中药7.60 g/kg、15.20 g/kg、30.40 g/kg灌胃,其余各组予等量生理盐水。3周后HE染色观察肝脏组织病理变化;全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇酯(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇酯(HDL-C)的含量;ELISA法检测各组小鼠血清甲胎蛋白(AFP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平;Wes法及Realtime RT-PCR法检测葡萄糖转运蛋白(GLUTs)、己糖激酶(hexokinase,HK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)、转酮醇酶(transketolase,TKTL)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Co A carboxylase,ACC)蛋白及mRNA表达。结果HE染色显示,肝癌组小鼠肝脏肝索排列紊乱,肝小叶结构不清,出现空泡样变性结构;高脂合并肝癌组除上述表现外,肝细胞出现脂肪空泡,脂肪性变明显,部分肝细胞胞浆出现液化、退变甚至被吸收消失;与空白对照及肝癌组比较,高脂合并肝癌组血清TC、TG、LDL-C、AFP、AST、ALT含量均显著升高,HDL-C含量降低;GLUT4、HK2、G6PD、TKTL1、ACC蛋白及mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01)。中药干预后,肝索排列紊乱程度有所改善,肝小叶结构较为清晰,脂肪空泡减少,肝细胞的液化、退变现象明显比高脂合并肝癌组减少;血清TC、TG、LDL-C、AFP、AST、ALT含量均显著下降,HDL-C含量升高;GLUT4、HKⅡ、G6PD、TKTL1、ACC蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可能通过影响PPP途径和脂肪酸合成,减轻高脂血症对肝癌的影响,从而防治原发性肝癌。

针药对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的影响

目的:观察针药对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的影响,探讨其作用机制。方法:随机将健康成年的SD大鼠进行分组,10只为一组,共5组,分别为正常对照组、模型组、电针组、药物组和针药混合组。用夹闭双侧颈总动脉的方法构建脑缺血再灌注大鼠模型。电针组在"百会"和"神庭"两个穴位给予电针治疗,药物组采用补气化瘀药物进行灌胃治疗,针药混合组利用电针和补气化瘀药物相结合的联合疗法。用药结束后,观察并分析各组大鼠海马神经元的形态学改变及海马神经元凋亡率的变化。结果:针药混合组可有效保护海马神经元的正常形态结构和数量,抑制海马神经凋亡,具有保护脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元的作用。

党中勤教授从肝脾相关论治自身免疫性肝炎经验

自身免疫性肝炎(Autoimmune Hepatitis,AIH)是一类以自身免疫反应为基础,以血清丙种球蛋白或免疫球蛋白升高为特征的肝脏炎性病变。西医治疗以糖皮质激素联合免疫抑制剂硫唑嘌呤为常规方案。其疗程长,不良反应大,效果并不显著。党中勤教授通过多年理论探索及经验总结,提出从肝脾相关论治自身免疫性肝炎,值得进一步研究和应用推广。