家蚕绿色茧品种G_1的茧色性状遗传及不同茧色蚕体组织的黄酮类化合物含量分析

为了探究绿茧系家蚕品种的茧色性状遗传规律,以家蚕绿茧品种G1和白茧品种C108为亲本,配制正反交F1及其自交F2和回交代等多种群体材料,茧色分离调查结果显示:F1为浅绿色茧;自交F2呈现白色茧∶浅绿色茧∶绿色茧=1∶2∶1的分离比;回交后代(C108×G1)×G1、G1×(G1×C108)均呈现绿色茧∶浅绿色茧=1∶1的分离比,而C108×(G1×C108)呈现白色茧∶浅绿色茧=1∶1的分离比。此结果说明家蚕品种G1的绿茧性状对白茧性状为不完全显性遗传。家蚕绿茧系的显色物质为黄酮类化合物,分析不同茧色蚕体组织中的黄酮类化合物含量是研究色素代谢与绿色茧呈色机制的重要途径之一。采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法,测定亲本绿茧品种G1、白茧品种C108和(G1×C108)F1的幼虫中肠、血液、丝腺组织在整个5龄期的黄酮类化合物含量以及茧层中的黄酮类化合物含量,结果显示:3种茧色个体的中肠组织的黄酮类化合物含量无明显差异,推测其合成黄酮类化合物的能力相当;中肠组织与血液中的黄酮类化合物含量与茧色没有明显关系;丝腺组织和茧层中黄酮类化合物含量以G1最高,(G1×C108)F1居中,C108最低。此结果说明绿茧色的深浅与丝腺和茧层中的黄酮类化合物含量表现出良好的一致性。

家蚕5龄幼虫蛋白质代谢研究初探

家蚕幼虫5龄期间蛋白质含量的变化约为体重变化的3倍,整个蚕体的蛋白质含量在第3和第4天之间有一个明显的突增。分析相应的蛋白水解酶活力变化,发现酶活力呈现先升后降的变化趋势,在第4和第5天时活力达到峰值。进一步提取血液、消化液以及脂肪体蛋白水解酶进行研究,结果表明血液和消化液蛋白水解酶的活力变化与蚕体消化、吸收和转化桑叶蛋白的生理进程基本一致。

人肠道病毒71型类病毒颗粒在家蚕BmN细胞及幼虫体内的表达

人肠道病毒71型（human enterovirus 71,EV71）是近年来暴发危害较严重的手足口病的病原。利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕卵巢培养细胞（Bm N）中共表达EV71病毒衣壳蛋白VP1与VP2,分析二者组装成病毒样颗粒（VLPs）的效率,比较用不同启动子构建重组病毒的表达效果,并利用家蚕幼虫进行2种蛋白质的共表达及VLPs纯化条件的研究。结果表明,重组病毒v Bm Bac-vp1-vp2与v Bm Bac-vp1-IRES-vp2均可介导EV71的VP1、VP2蛋白在Bm N细胞中表达,并能够组装成病毒样颗粒,但采用Pph及Pp10启动子的表达和组装效率明显高于Pph及IRES启动子组合;将重组病毒v Bm Bac-vp1-vp2以1×10^4TCID50/头的剂量注射5龄起蚕,Western blotting检测到VP1在幼虫血淋巴中特异性表达,并且随着感染时间的延长表达量增加;经蔗糖梯度密度离心能够有效地纯化蚕体血淋巴中的病毒样颗粒。研究结果为后续EV71疫苗研制奠定了一定的试验基础。

5龄期和吐丝期家蚕丝腺中的过氧化氢代谢与谷胱甘肽氧化还原循环特征

机体内的氧化还原状态对细胞的生命活动有着重要影响,而过氧化氢(H2O2)代谢和谷胱甘肽氧化还原循环与之密切相关。利用分光光度法检测5龄期和吐丝期家蚕丝腺中参与H2O2代谢与谷胱甘肽氧化还原循环调控的各种因子(氧化剂、还原剂和抗氧化剂)的含量变化。在2个时期的丝腺中未能检测到谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和谷胱甘肽还原酶(GR)活性。5龄期丝腺中的H2O2含量显著升高,超氧化物歧化酶(SOD)活性、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量、还原型谷胱甘肽(GSH)/GSSG比值变化不显著,过氧化氢酶(CAT)活性、GSH含量、总谷胱甘肽含量、硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)活性和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性显著下降。吐丝期丝腺中的H2O2含量、SOD活性、GSH含量、GSSG含量、总谷胱甘肽含量和TPX活性显著下降,CAT活性、GSH/GSSG比值和TrxR活性显著升高。检测结果表明,5龄期丝腺中的CAT活性和TPX活性下降是导致H2O2含量升高的原因,但是TPX活性和TrxR活性下降导致的GSH/GSSG比值变化并不显著;吐丝期丝腺中的SOD活性下降导致H2O2含量下降,TPX活性下降和TrxR活性升高导致GSH/GSSG比值升高。可见,家蚕丝腺中的H2O2代谢与谷胱甘肽氧化还原循环特征在5龄期和吐丝期存在显著差异。

一种新的家蚕突变体——4龄幼虫致死突变的发现

在对家蚕品种P33的饲养过程中发现一种新的幼虫致死型突变体,其幼虫在3龄第2天就表现出体型较正常个体小,生长发育缓慢的特征,3龄期延长约2 d,4龄起蚕后极少取食,生长发育基本停滞,并于4龄第3-4天陆续死亡。将此突变体命名为4龄幼虫致死突变（lethal mutant in the fourth instar larvae,l-4i）。经遗传分析初步判断该突变体由常染色体上的一个隐性遗传基因控制,为纯合致死。该突变体可以作为解析家蚕生长发育机制的重要素材。